全 文 ：情况比肉豆蔻醚更甚。甲嘎松汤中萜类成分总数量
与单味药成分总数量变化明显，与白豆蔻、肉豆蔻对
比分析，甲嘎松汤的萜类成分数量和含量都明显增
加，特别是 α-姜烯、α-松油醇、α-雪松烯、石竹烯、榄
香素等成分明显的增加。
4. 3 通过上述变化笔者从甲嘎松汤对肝脏疾病氧
化应激病机的干预入手分析〔6〕，结合相关文献桉油
精与酚类物质联合应用可使抗氧化活性增强的报
道〔7〕;高浓度的肉豆蔻醚的致幻作用和黄樟醚致癌
毒性，低浓度肉豆蔻醚的保肝作用;以及 β-水芹烯、
α-姜烯、α-松油醇等明确的抗氧化活性研究〔8，9〕;笔
者发现单味药材与甲嘎松汤总挥发油的成分和含量
似乎朝着加强成分间协同作用和有效成分的活性，
以及降低单味药中潜在的毒副作用的方向变化。因
此，从化学成分及其含量变化层面所得的证据，可在
一定程度上说明甲嘎松汤配伍的科学性和合理性。
参 考 文 献
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收稿日期:2014-03-25
基金项目:国家中医药重点学科临床中药学建设项目(国中医药人教发［2012］32 号)
作者简介:高家荣(1964-)，男，硕士，主任药师，研究方向:从事中药新药研发;Tel:13075537705，E-mail:zyfygjr2006@ 163. com。
补骨脂、肉豆蔻配伍前后特征指纹图谱
及指标成分含量变化研究
高家荣1，杨晓旭2，魏良兵1，韩燕全1，庄星星2
(1. 安徽中医药大学第一附属医院 /国家中医药管理局中药制剂三级实验室，安徽 合肥 230031;2. 安徽中
医药大学药学院，安徽 合肥 230038)
摘要 目的:对补骨脂-肉豆蔻药对配伍前后特征指纹图谱及指标成分含量的变化进行研究。方法:Agilent
Edipse Plus C18色谱柱(250 mm ×4. 6 mm，5 μm)，流动相:甲醇-水，流速:1. 0 mL /min，检测波长:234 nm，柱温:30
℃，建立补骨脂、肉豆蔻及补骨脂-肉豆蔻药对 HPLC 特征指纹图谱，标定共有峰，获得对照指纹图谱;对药对配伍前
后指标成分的含量进行测定。结果:对药对指纹图谱进行分析，共确定了 20 个共有峰，并对共有峰的来源进行归
属;指标成分含量变化结果显示，药对较单味药材中相应指标性成分的含量均有提高。结论:补骨脂-肉豆蔻药对配
伍后大多数化学成分(包括补骨脂素、异补骨脂素、去氢二异丁香酚)较单味药材各成分含量均有较大幅度提高。
关键词 补骨脂-肉豆蔻药对;特征指纹图谱;指标成分
中图分类号:Ｒ284. 1 文献标识码:A 文章编号:1001-4454(2014)10-1873-04
DOI:10. 13863 / j. issn1001-4454. 2014. 10. 043
补骨脂与肉豆蔻作为温肾暖脾、涩肠止泻药对
配伍，最早出自宋·许叔微的《普济本事方》，时称
“二神丸”〔1〕。中药复方是中医辩证论治理论精髓
的具体表现形式，而配伍又是中药复方发挥药效的
关键。药对是中药配伍方法的精髓，既具有复方的
特性，又具有单味中药成分相对简单便于展开现代
科学研究等特点〔2〕。
本实验采用高效液相色谱技术建立指纹图谱的
分析方法，拟对补骨脂-肉豆蔻药对配伍前后的
HPLC 特征指纹图谱变化进行定性分析以及指标成
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分含量变化研究，综合考察药对配伍前后化学成分
的变化，以期更全面地从物质基础角度揭示补骨脂-
肉豆蔻药对配伍的意义。
1 仪器与材料
1. 1 仪器 Agilent 1260 高效液相色谱仪(DAD检
测器、二元高压梯度泵、柱温箱，美国安捷伦公司);
0. 22 μm 微孔滤膜(上海陆纳生物科技有限公司);
BP211D 电子分析天平(德国赛多利斯公司);HH-S
型电热恒温水浴锅(江苏省医疗器械厂);ＲE-852
旋转蒸发器(巩义市峪予华仪器厂);KQ3200B 型超
声波清洗器(昆山市超声仪器厂)。
1. 2 材料 补骨脂素(批号:110739-201115)、异补
骨脂素(批号:110738-201012)、去氢二异丁香酚(批
号:111838-201001)对照品均购于中国食品药品检
定研究院;试验用中药饮片均由安徽中医药大学第
一附属医院中药房提供，经安徽中医药大学第一附
属医院中药房李立华主任药师鉴定均为合格药材。
甲醇(色谱纯，美国 Tedia 公司);水为屈臣氏蒸馏
水;其余试剂为分析纯。
2 方法
2. 1 单味药材样品溶液的制备 称取补骨脂 24
g，6 倍量 50%乙醇提取 2 次，每次 1 h，所得提取液
置浓缩定容至 50 mL，精密吸取醇提浓缩液 5 mL置
蒸发皿中，水浴蒸干，残渣加甲醇溶解定容至 10
mL，过 0. 22 μm 微孔滤膜，即得补骨脂样品溶液。
称取肉豆蔻药材 12 g，按上述方法处理，即得肉豆蔻
样品溶液。
2. 2 药对供试品溶液的制备 称取补骨脂 24 g、
肉豆蔻 12 g，按“2. 1”项下方法处理，即得补骨脂-肉
豆蔻药对供试品溶液。
2. 3 对照品溶液的制备 精密称取补骨脂素、异
补骨脂素、去氢二异丁香酚对照品适量，加甲醇分别
配制成浓度为 0. 109、0. 112、0. 042 mg /mL 的对照
品溶液。
2. 4 色谱条件 Agilent Edipse Plus C18色谱柱
(250 mm ×4. 6 mm，5 μm);流量 1. 0 mL /min;检测
波长 234 nm;柱温 30 ℃;进样量 5 μL;以甲醇(A)-
水(B)为流动相进行梯度洗脱(0 ～ 15 min，50% A;
15 ～ 85 min，50% ～90%A;85 ～ 90 min，90% A;90 ～
95 min，90% ～50% A)。分别精密吸取供试品溶液
各 5 μL，注入液相色谱仪，记录 95 min内的色谱峰。
2. 5 方法学考察
2. 5. 1 精密度试验:精密吸取同一供试品溶液，按
“2. 4”项下色谱条件，连续进样 6 次，各主要色谱峰
的相对保留时间 ＲSD 为 0. 5% ～ 1. 56%，各共有峰
相对峰面积 ＲSD 为 0. 8% ～ 1. 67%，ＲSD 均小于
3%，符合指纹图谱测定要求，表明精密度良好。
2. 5. 2 稳定性试验:分别精密吸取补骨脂、肉豆
蔻、补骨脂-肉豆蔻试品溶液，按上述色谱条件，分别
于 0、2、4、6、12、24 h 进行测定，结果表明，各主要色
谱峰的相对保留时间 ＲSD 为 0. 5% ～ 1. 55%，各共
有峰相对峰面积 ＲSD为 0. 2% ～1. 3%，ＲSD均小于
3%，表明供试品溶液在 24 h内稳定。
2. 5. 3 重复性试验:取同一药对药材各 6 份，精密
称定，分别按“2. 2”项下方法制备药对供试品溶液，
按“2. 4”项下色谱条件，连续进样 6 次，结果表明，
各主要色谱峰的相对保留时间 ＲSD 为 0. 6% ～
1. 65%，各共有峰相对峰面积 ＲSD 为 0. 82% ～
1. 88%，ＲSD均小于 3%，表明方法的重复性良好。
3 单味药材、补骨脂-肉豆蔻药对指纹图谱的研究
3. 1 补骨脂-肉豆蔻药对 HPLC指纹图谱的建立
分别精密吸取补骨脂-肉豆蔻药对供试品溶液 5
μL，注入高效液相色谱仪，按“2. 4”项下色谱条件进
行检测，记录色谱图(图 1)。选择吸收信号较强、稳
定性好、峰形明显的 20 个色谱峰标定为共有峰。
在所建立的色谱条件下，10 批样品的特征峰均
有较好的分离，采用《中药色谱指纹图谱相似度评
价系统(2004A版)》对 10 批样品进行相似度评价，
结果表明样品相似度均大于 0. 95，不同批次间的成
分基本一致。
3. 2 色谱峰的归属
3. 2. 1 补骨脂-肉豆蔻药对指纹图谱峰的药材归属
分析:在 234 nm波长下，取补骨脂、肉豆蔻、补骨脂-
肉豆蔻药对供试品溶液以及补骨脂素、异补骨脂素、
去氢二异丁香酚混合对照品溶液，注入液相色谱仪，
按“2. 4”项下色谱条件进行检测，通过保留时间与
UV光谱的对照分析，对补骨脂-肉豆蔻药对中各色
谱峰代表的化合物进行归属，可以确定 1 号峰为补
骨脂素、2 号峰为异补骨脂素、11 号峰为去氢二异丁
香酚。见图 2。
3. 2. 2 共有峰的峰面积积分值:补骨脂、肉豆蔻、
补骨脂-肉豆蔻药对供试品及混合对照品各自的共
有指纹峰的峰面积平均值见表 1。
根据补骨脂、肉豆蔻、补骨脂-肉豆蔻药对 3 组
指纹图谱共有峰峰面积的均值作对比，进一步说明
了补骨脂、肉豆蔻配伍增效可能是由于药对较单味
药材共有峰面积增加(峰面积与含量成相关性)所
致。
3. 3 指标成分含量变化研究
3. 3. 1 线性关系考察:自动进样对照品溶液各 1、
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图 1 补骨脂-肉豆蔻药对的 HPLC特征指纹图谱
S1 ～ S10. 1 ～ 10 批样品 Ｒ. 对照图谱
图 2 补骨脂药材、肉豆蔻药材、补骨脂-肉豆蔻药对
指纹图谱共有模式叠加图
A. 补骨脂药材 B. 肉豆蔻药材 C. 补骨脂-肉豆蔻药对
D. 混合对照品
2、4、8、12、16 μL，以色谱峰峰面积为纵坐标，进样量
为横坐标，绘制标准曲线并进行线性回归。补骨脂
素回归方程:Y1 = 800. 55X1 + 47. 069，r1 = 0. 9999;异
补骨脂素回归方程:Y2 = 811. 63X2 + 58. 501，r2 =
0. 9999;去氢二异丁香酚回归方程:Y3 = 324. 99X3 +
13. 252，r3 = 0. 9999。结果表明，补骨脂素、异补骨
脂素、去氢二异丁香酚的进样量分别在 0. 109 ～
1. 744 μg、0. 112 ～ 1. 792 μg、0. 042 ～ 0. 672 μg 范围
内与峰面积成良好的线性关系。
3. 3. 2 加样回收率试验:按“2. 2”项下方法平行
制备的 6 份补骨脂-肉豆蔻药对供试品溶液，分别进
样测定，计算补骨脂素、异补骨脂素、去氢二异丁香
酚的含量。再向上述 6 份补骨脂-肉豆蔻药对供试
品溶液中分别加入约为相应指标性成分含量 100%
表 1 补骨脂醇提液(B)、肉豆蔻醇提液(Ｒ)、补骨脂-
肉豆蔻醇提液(B-Ｒ)各共有峰峰面积比对
峰号 B峰面积均值 Ｒ峰面积均值 B-Ｒ峰面积均值
1 6295. 297 － 9151. 452
2 3282. 686 － 4643. 022
3 － 354. 984 834. 257
4 1149. 471 － 1852. 473
5 1159. 024 － 2857. 436
6 － 2037. 491 2303. 498
7 7432. 477 － 11524. 150
8 14361. 190 － 20489. 210
9 － 1596. 353 3445. 605
10 764. 368 － 1551. 513
11 － 1457. 542 2524. 639
12 29451. 960 － 42478. 280
13 6815. 230 － 9918. 511
14 204. 423 － 443. 373
15 308. 330 － 770. 574
16 － 405. 081 561. 476
17 6135. 926 － 9871. 807
18 2066. 791 － 2547. 946
19 437. 970 － 784. 593
20 27477. 850 － 37463. 450
补骨脂素、异补骨脂素、去氢二异丁香酚对照品储备
溶液，进样测定，计算加样回收率。结果得加样回收
率均在 98% ～100%之间，ＲSD 均小于 3%。
3. 3. 3 样品含量测定:取“2. 1”、“2. 2”项下处理好
的两单味药材、补骨脂-肉豆蔻药对供试品溶液分别
进行测定，进样量 5 μL，注入高效液相色谱仪，以外
标法计算样品中的补骨脂素、异补骨脂素、去氢二异
丁香酚的含量，结果见表 2。
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表 2 补骨脂、肉豆蔻与补骨脂-肉豆蔻药对样品中
指标成分的含量测定结果(n =3，mg/mL)
样品 补骨脂素 异补骨脂素 去氢二异丁香酚
补骨脂 0. 163 0. 084 －
肉豆蔻 － － 0. 036
补骨脂-肉豆蔻药对 0. 247 0. 123 0. 066
3. 4 指纹图谱各共有峰归属及其含量变化的初步
判断 由图 2 可知，3、6、9、11、16 号色谱峰为肉豆
蔻药材中化学成分峰，其中 11 号色谱峰为去氢二异
丁香酚;其他 15 个峰为补骨脂药材化学成分峰，其
中 1 号、2 号色谱峰分别为补骨脂素、异补骨脂素。
与单味药材相比，药对色谱图中峰的数目没有明显
增减，表明在现有的色谱分析条件下，各药材经组合
配伍暂未发现新的化学成分;由表 1 可知，与单味药
材相比，药对色谱图中特征峰的峰面积均明显增加。
4 讨论
4. 1 色谱条件的选择及优化 参考有关补骨脂、
肉豆蔻中成分测定的文献〔3，4〕，本实验以甲醇-水为
流动相进行梯度洗脱;本实验利用 DAD 检测器进行
全波段扫描检测分析，结果表明，该样品分别在
225、234、265、274 nm 检测处都有比较显著的特征
色谱峰，其中又以 234 nm为检测波长时所得色谱图
指纹信息最多，各色谱峰分离度较好，色谱峰的形状
也好，因此，本实验选取 234 nm 作为检测波长。本
实验还优化了流速、柱温等条件，并确定最终色谱条
件如“2. 4”项下。
4. 2 色谱峰的比较 本实验在相同的信号强度
下，对补骨脂药材、肉豆蔻药材、补骨脂-肉豆蔻药对
指纹图谱运用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统
(2004A 版)》进行叠加，结果显示肉豆蔻药材较补
骨脂药材、补骨脂-肉豆蔻药对指纹图谱信号弱，可
能是由于肉豆蔻的化学成分多为挥发性成分，在本
实验提取方法下所得肉豆蔻药材样品溶液所含成分
较少，且浓度较低。
4. 3 药对配伍前后化学成分的变化 由单味药材
及补骨脂-肉豆蔻药对指纹图谱的分析可知，该药对
配伍后暂未发现新的化学成分，但各特征峰的峰面
积增加非常显著，这些现象不仅可为补骨脂-肉豆蔻
药对配伍机制的研究提供帮助，同时也可为补骨脂-
肉豆蔻药对的使用提供科学信息。
4. 4 中药指纹图谱优势 中药是典型的复杂体
系，具有多组分与多靶点的特点，在目前对其临床疗
效了解较多而作用机制尚未完全明了的情况下，单
独依靠一两个指标化合物含量的测定来评价中药的
质量是不全面的。中药指纹图谱是一种综合的、可
量化的质量控制手段，较传统的中药质量控制方法
有整体性、可靠性。
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檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾
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41-42.
《中药材》杂志在“中国知网”发行情况:2010 年期刊机构用户总计 3196 个，国际个
人读者分布在 20 个国家和地区;2011 年期刊机构用户总计 3232 个，国际个人读者分布
在 22 个国家和地区;2012 年期刊机构用户总计 3304 个，国际个人读者分布在 21 个国家
和地区。
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