全 文 ：咚 算 1 4卷 第 3期 生物化学与生物物理学报
1 92 8年 6月 人 T C人 B l ( X )H I M I C A etB IOP H Y S I C A S IN I C人
V ol
.
1 4
, N o
.
3
M ay
,
1 9 8 2
卜 I
蓖麻蚕 (A t a c u s r ic in i) 核糖体
RNA 基因片段在大肠
杆菌中的无性繁殖
吴样甫 郑仲承 江福美 储美瑾 钱肖贞 李载平
(中国科学院上海生物化学研究所 )
卜
摘 要
利用质粒 p B R 32 作运载体 , 获得了蓖麻蚕 ( A “~
r似耐 )核糖休 r R N A 基 因 (r D瓦A )
的部分片段在 .E 阅“ 中的无性繁殖株。 酶切图谱分析及 oS ut h er n 法分子杂交鉴定证明 , 重组
质粒 p A R工含有 1 . 95 M d r D N A E co R工一aB m H I 双酶切片段 ; 泌 R l 含有 2 . 6 M d 的 r D N A
aB m H l 片段 。 并测定了 aB m H I 片段与 p B R 3 2 连接方向 。
r
,
减
卜
核糖体 R N A (r R N A )基 因 (r D N A ) 由于它的生物学重要性 , 一直受到广泛重视 。 自
从 oM or w 山 等报道了非洲爪蟾 rD N A 在 eE 。 站` 中无性繁殖 (Ol o n in g )后
, 许多真核生
物的 r D N A 已被克隆。 使有可能在分子水平上研究 r D N A 的结构特点和功能的关系 , 对
于阐明基因转录的调节控制和进化都极为重要 。
已有研究发现 , 真核细胞 r D N A 是由编码 2 8 5 、 18 5 和 6 . 8 5 r R N A 基因的重复单位
串联组成的 , 中间存在空间区 。 但在结构上 , 不同生物品系之间有着相当差异 , 如研究较
为充分的爪蟾 r D N A 的结构基因部分是均一的 ,但空间区的长度有差别 , ,J ,而果蝇 r D N A
除空间区有明显差别外 , X 染色体的 28 s r R N A 基因中有不同长度的插入顺序 , Y 染色
体的 r R N A 基因中没有插入顺序 , 插入顺序和空间区 D N A 的核昔酸顺序 也有 一定变
化伽田。 Man n in g即 ,等报道了家蚕(oB 二甸劣 。 砰叼 r D N A 的克隆和物理图 ,未发现在结构基
因中有插入顺序和空间区的变化 , 因此家蚕 r D N人 重复单位的结构是均一的。 郑仲承以 ,
等最近报道了蓖麻蚕染色体 D N A 限制酶切后 氏 u t he r n 法分子杂交结果 , 并作了 r D N A
的酶切图谱 , 发现 A `at o t绍 : 初俪感 r D N A 的结构也是均一的 , 但限制酶切图谱与家蚕的有
明显差别。
本文报道了蓖麻蚕 r D N A 限制酶切部分片段在 E . o 孙 中的克隆 , 并测定了限制酶切
位点。 进一步确证了蓖麻蚕 D N A 与家蚕的明显不同 。
材 料 和 方 法k
、
(一 )菌株和培养墓
本文 1 9 8 1 年 3 月 1 8 日收到 -
本文采用以下简称 : 克隆 : e lo in o g , 无性繁殖 ; A决 氨基节青娜素; cT : 四环素 ; Ap飞 A p耐药 ; T c飞 四环素敏感;
班d : l x 1 0e 道尔顿。
邵8 生物化 学 与 生物物理 学 报 李 14卷
E
. 卯面 O e田 )介卜。 卜 r ecB c一 )由法国巴斯德研究所 K our il s k y, P . 教授赠给。 E . co 环
80 2 1 ( pB R 3 2 2 ) 由中国科学院微生物研究所赠给。
P B Y 培养基为每升含蛋白脉 8 克 、 牛肉膏 5 克 、 酵母浸膏 5 克 、 N a ol s 克 、 葡萄糖 4
克 。 P B Y 一ag ar 为含 1 . 2多琼脂的 P B Y 。 抗菌素琼脂为含 2 5 拜g / m 1 T 。 或 50 ” g / iln A p
的 p B Y 一吧 a r o
(二 )试剂 、 级冲液和醉
5 0 溶液 : 0 . 1 5 M N a o l 、 0 . 0 1 5万 柠檬酸钠。 D e n h a r 七溶液: 0 . 0 2多 F i e o l l ( S E R V A
脚 P e Zs) 、 0 . 0 2多 P V P (聚乙烯毗咯烷酮 。 英国进 口分装 ) 、 牛血清白蛋 白 (上海生化所东
风试剂厂 ) 。
限制酶缓冲液 : cE o R I 、 aB m H I 、 P就I 等均为 50 m万 T r is 一HOI ( p H 7 . 5) 、 10 m万
M创卫 ,声 91 11为上述缓冲液补加 6 m万 K m 。 H p al 缓冲液为上述缓冲液补加 20 m万 K OI 。
.T D N A 连接酶缓冲液为 50 m万 T irS 一HOI (p H 7 . 5) 、 10 m万 gM OI , 、 10 m万 二琉基苏糖醉 (D T T )、 10 户万 A T P e N a , 。 除 H aP l 为 M il se . aL b . I n o .产品外 , 所用酶均由我室工具
酶组研制 , T’ D N A 连接酶由冯宗铭同志提供 。
琼脂糖凝胶电泳缓冲液 : 40 m万 rT is 一H皿 (p H 8 . 0) 、 20 m万 醋酸钠 、 l m万 E D T A 。
琼脂糖凝胶浓度为 0 . 7界 。
(三 )蓖麻蚕 D N A 制备
由五龄第三天蚕分离的后部丝腺体 , 用含 0 . 05 万 T ir -S H CI (p H 7 . 5) 、 0 . 5界 S D S 的
日S C 匀浆 , 加入 N a 0 1至最终浓度为 0 . 3万 , 悬液用苯酚法抽取 D N A , 乙醇沉淀后离心收
集沉淀 , 沉淀物溶解于 5 0 -0 . 05 万 rT 此卜H皿 ( p H 7 .酌缓冲液 , 经 30 , 00 转 /分离心 30
分钟 , 吮去糖原。 清液的乙醇沉淀物溶解后 , 经经基磷灰石柱层析分部收集 , 除去 R N A ,
即可获得高分子量的 D N A 。 经电泳检测 , 分子量大于 1 x 10 “ d al 切。
(四 )质粒 p习R 吕翻 制备
按 C七功哆 n咖 报道的方法制备 。
(五 ) D万人 体外皿组 、 转化 、 孟组体 , 集 、 筛选和菌落原位杂交
1
.
D N A 体外 t 组 (1) cE 0 R I一 B a m IH 双酶切片段的体外重组 : 质粒 p B R 32 用
玉尧。 R工、 aB m H I双酶切开形成二个片段 , 经 eS Ph a r o se 4B 柱层析分离除去 0 . 2 M d 片段 ,
收集 2 . 4 M d 片段用作克隆载体。 取 2 种g 2 . 4 M d 片段与 8” g cE o R工一B a m H I 双酶切的蓖
麻蚕 D N A 棍合 , 65 ℃ 加热 5 分钟 , 冷至室温 , 在冰浴中加入 2 单位 T . D N A 连接酶 , 在连
接酶缓冲液中 8℃ 以下连接过夜。 (2) aB m H I 酶切片段的体外重组 : 质粒 p B R 32 和蓖
麻蚕 D N A 均用 aB m班 切开 , 其余操作同 (1) 。
2
. 转化 转化试验参照 Oo he n 山 ,的方法 , 略作修改 。 受体菌 0 60 在 P B Y 中生
长至对数生长早期 , 离心收集 。 菌体用 1 2/ 体积冰冷的 50 m万 O刃 ,书 o m万 ht y m in e 悬浮 , 冰浴放里 10 分钟后离心收集菌体 , 再用 1八O 体积上述溶液悬浮后备用 (冰浴中保存 ,
2 4 小时内有效 ) 。 取 0 . Zm l 细菌悬液与 0 . l m l D N A 连接样品混合 , 冰浴放置 4 5 分钟后
转至 8 o7 C 水浴中放置 5 分钟 , 立即加入 2 . 7m l P B Y 。 在 3 7℃ 培养 1 小时 。 取 0 . I iln 转
化样品涂布于 A -P ag a r 上 , 3 o7 C 培养 24 小时 以上 , 计算 A rP 菌落数 。
8
. 重组体 筛选和 富集 由 p B R 32 B a m H l 切点插入外源基因使抗四 环 素 基 因
劝
湘
洲
刁
月
3期 蓖麻蚕 ( A“娜。 r `` ” ` )核糖体R N A基因片段在大肠杆菌中的无性象殖 2 8 9
性
丫
卜
灭活 , 重 组体应 为 A rP T ca , 可 以 在 A卜ag ar 和 T c一ag ar 上鉴别。 用 CE o IR 一B a m H I双
酶法克隆 , 转化菌中 80 多 以上为 A P . T .c , 因此无需富集重组体。 B a m H I 酶切重组 中
转化体极大多数为 p B R 32 转化体 。 为提高筛选效率 , 我们按 oB h ye r以 , 报道 的 方 法 ,
用 D 一环丝氨酸富集重组体。 转化样品 50 倍稀释于含 10 户g AP / m l 的 p B Y 中 , 37 0 培
养过夜。 将该培养液印 倍稀释于含 10 ” g T c/ 血 的 P B Y 中 , 370 0 培养至对 数生 长早
期 , 加入 10 照刃卜环丝氨酸 /血 , 培养 2 ~ 3 小时 , 离心收集菌体 , 用 P B Y 清洗后再悬浮
于 P B Y 中。 经过富集的样品中 , A P f T ca 菌占 85 多以上 。
4
. 含 r D N A 片段重组体的筛选 含 r D N A 片段重组体筛选采用 G ur sn et in 山 ,菌
落原位杂交法 。 这” lr R N A 按改进的 eG t沪们法制备 , 比强度为 10 7 cP m / ” 9 R N A 。 r R N A
为 285 , 1 85 , 5 . 85 的蓖麻蚕 r R N A 。 B A 一85 膜经 75 沁 乙醇浸泡 10 分钟后用无菌水漂净 ,
铺于 P B Y 一ag ar 上 , 菌落用牙签接种在膜上 , 并做复制平皿 , 37o C 培养过夜。 将膜揭下 ,
置于 O . 6 N N a OH 湿润的滤纸上 , 室温放置 10 分钟 , 移至 1 . 0万 rT i-s H ol ( p H 7 . 4 )湿润
的滤纸上 , 每 10 分钟更换滤纸 , 共三次 , 然后将膜移至 0 . 5万 rT i-s 工10 1 ( p H 7 . 4 )一1 . 5万
N a仅 湿润的滤纸上 , 10 分钟后取下膜 , 用 Z x S SO 漂洗二次 , 干滤纸上空气干燥 , 再 在
80 ℃ 真空焙干 2 小时。 然后浸泡在 D e n h a到卜3 x S O 中 68 ℃ 预杂交 6 小时 以上 , 转移至
含 D en h a t ot 3X S SO 、 0 . 5外 S D S 和 5 x 1 0气p m / m l l , 。 I r R N A 杂交液中 , 68 0 杂交 1 6 小时
以上。 杂交结束后用 6 0 0 的 ZX S SO 、 0 . 5外 S D S 溶液泡洗 2 小时 , 其间更换清洗液三次 ,
最后用 2 X SS O 漂洗二次 。 干燥后用 X一线胶片作放射自显影 。 爆光 2 ~ 3 天 即可 显 影 ,
使用增感屏一天后 即可显影 。
(六 )翻 u t h er n 法分子杂交
我们用 由 u t h e rn 山 , 法分子杂交鉴定重组质粒中的 r D N A 片段。 重组 质粒 D N A 限
制酶切开后用水平板脂琼糖凝胶电泳制作酶切图谱 (分子量标准 选 用噬 菌体 入D N A 的
CE
o R工一B a m m 酶切片段 ) , 并将该凝胶浸泡于 0 . S N N a OH 中 , 30 分钟 。再用 0 . 5对 rT 卜
H 0 1 ( P H 7
.
5 )
、
1
.
5万 N a 0 1浸泡 4 5 分钟 , 按 oS u t he r n 法将 D N A 转移至 B A 一85 膜上 。 焙
于 、 杂交和清洗操作均同菌落原位杂交法 。 自显影爆光 6 小时以上即可显影 。
沂 . 结 果
少 一 、 , 组质较富集及含 r D N人 片段孟组体的筛选
CE oR I
~ B a m H工双酶切重组样品获得了 7 . 5 x 1 0心 个转化菌。 菌落原位 杂交筛选 了
3
,
0 0 个菌落 , 其中有 69 个菌落显示自显影阳性斑。 再进行原位杂交检查 , 其中极大多
数仍显示阳性 (见图 l a) 。
B a m H I 酶切重组样品获得了 1 ~ 2 x 1 0“ 转化体 , 经环丝氨酸富集后 A PrT .c 菌 占
95 界 。 菌落原位杂交法筛选了 3 , 0 0 个菌落 , 其中 20 个显示阳性。 重复检查时 , 其中 16
株显示强阳性 , 2 株为弱阳性 (见图 lb)
二 、 重组质粒 p A R I
由 CE o R I es B a m H I 双酶切重组获得的含 r D N A 片段的克隆株定名为 p A R I , 分离纯
化了 6 株 p A R I D N A , 用 五沁。 R l - 卫滋m H l 双酶切后制作电泳图谱 , 并做相应的 oS u ht er n

咚
3期 蓖麻蚕 ( A“娜。 石蕊雨 )核糖体 R N A基因片段在大肠杆菌中的无性繁殖
.
分子杂交鉴定 。 图 2 为 p AR 104 、 p AR 10 5的实验结果 , 说明插入 的蓖麻蚕 D N A 片段
能与 r R N A 专一性杂交 , 确是 r D N A 的一个片段 , 分子量都为 1 . 95 M d 。
三 、 宜组质粒 p A R ,
由 B a m H I酶切重组获得的含 r D N A 片段的克隆株定名为 p A R Z。 分离 纯化 了 16
株 P A R Z D N A , 并制作 T P A R 2 1 1 的 B a m H I 、 E o R I、 P s t l 、 B a m H I一P s七I 等酶切图谱及
相应的 oS ut h e r n 分子杂交自显 影照 片 (见图 3 a) , 以及 H aP 工、 gB U 的酶 切 图谱 (图
4 )
。 对 PA丑 2 0 5 也制作 T B a m旦 I 、 cE o R I、 P s t l 的酶切图谱 (图 s b ) 。 结果说明 PA R 2 1 1
含有能与 r R N A 专一性杂交的 2 . 6 M d 片段 , 应是 r D N A 的一部分 。 由于 质粒 p B R 32
没有 H aP l 、 B gl l 切点 , 故 2 . 6 M d r D N A 片段上应有一个 P的 I 切点、 一个 H aP l 切点 、
二个 B gl H 切点 , 但没有 E co R I 切点。 由 P tS l 和 B a m H I es P s lt 双酶切形成的片段的分
子量可以推断 P st l 切点在 p A R Z n 上的位置 , 描绘 r D N A 与 p B R 32 的连接方向 , 如图
6 所示 。 各酶切片段 的分子量列于表 1 。 p A R 205 的 B a m H I 、 CE o R工酶切图谱与 p A R 2 1
相同 , 也只有一个 P s lt 切点 , 但图谱与 p A R Z n 不同 。 由 sP 七I 酶切片段分子量推测 , 应
是 r D N A 的同一片段 , 但 r D N A 2 . 6 M d 片段与 p B R 3 2 连接方向相反 。 图 5 还列 出其
余 10 株 p A R n 的 B a m H I一P st 工双酶切图谱。 都与 p A R 2 1 相同 。
B a m HI
卜
B a m H I
^
图 6
日. H I
肠
p A R Z中户R 3 22 与 r D N A 片段连接方向
A : P AB 2 1 1 残 P启丑 20 5
表 , PA R 2 1 1、 PA R 2 0 5 限制酶切片段
p
J
权
重 组 质 粒 限 制 酶 酶切片段分子景 (M d)
PA B 2 1 1 E C O R I 5
.
2
B a m H I 2
.
6 2
.
6
P s t l 2
.
9 2
.
3
P时工+ B a m H工 2 . 2 1 . 93 0 . 6 7 0 . 4
B g l l l + B a m H I 2
.
6 2
.
0 0
.
2 4 0
.
2 6
H P
a l 5
.
2
PA R 2 0 5 E CO R I 5
.
2
B a m H I 2
.
6 2
.
6
P毗 I 4 . 1 1 . 1
29 2生 物化学与生物 物 理 学 报 1 4卷
讨 论
一 、 pA RI和 pA R Z分别含有能与蓖麻 蚕 r R NA 专一性 杂 交的 1 .弱 M dEC oRI -
Bam I H DA N片段和 2 . 6M dBam HI片段 , 证明他们都是 r D N A 的部分片段 。
二 、 对已经获得的 6 株 p A R 1 D N A 的 卫沁。 R l一B a m H I 酶切检查 , 发现 被克 隆的
r D N A 片段的分子量均为 1 .弱 M d 。 参照郑仲承等依据染色体 D N A 酶切后分子杂交制
作的蓖麻蚕 r D N人 物理图 , 以及我们在另文即 ,中报道的蓖麻蚕 r D N A 完整基因的克隆和
物理图 , 可以认为用 B的 R l e B a m IH 双酶切 , 由每 个 r R N A 基因 单位只 能 得到 一 种
1
.肠 M d 片段的克隆株。 这来自不同 r R N A 基因单位的 6 株 p A R I 插入片段 , 大小完全
一致 , 表明不同基因的这个片段可能是均一的 。
三 、 郑仲承报道 A `沁仇绍 犷倪山丽 r D N A 有二个 aB m IH 切点 , 产生分 子 量 为 2 . 6 M d
和 4 . 4 M d 二个片段 。 我们对 16 株 p A R Z 检查 , 发现都插入有与 r R N A 专一 性 杂交 的
2
.
6 M d 片段 。 酶切图谱分析分别属于 p A R Zn 、 p A R 205 两种联接方向。 尚未筛选 到
4
.
4 M d 片段的克隆株 , 可能由于 2 . 6 M d 片段被克隆的机率要高得多 , 而我们没有筛选全
部重组株 。
16 株 p A R Z 的 aB m H I es P S杠 双酶切图谱表明 , 插入的 B a m H I一B a m H I 2 . 6 M d 片 段
不仅大小均一而且 sP lt 酶切位点也都一致 , 说明在 r R N A 基因内这个片段可 能是 均 一
的。
p A R 21 1 的 aB m H -I P st l 双酶切产生的 0 . 4 M d 片段 来 自 r R N A 基 因 , 但 不 能 与
r R N A 杂交 (图 8a ) , 可能是 r D N A 的非结构基因部分 , 或是在转录后加工 中被切去 的 部
分。
四 、 我们的结果说明以上得到的克 隆组 印A R I 组和 p A R Z 组) 各 自携带 的插 入
片段都是均一的 。 A 云艺。吮绍 , 初休感 r D N A 的CE oR I、 B a m H I酶切位点都和 Man in n g 报道
的 刀洲动夕劣 ” 筑冲感 r D N A 有明显差别 , 而且前者有 sP 订 切点 , 后者没有。 由于 用 克隆 的
r D N A 片段制作酶切图谱 , 足以识别 0 . 2 M d 分子量大小的片段的存在 , 在 p A R 2 1 中没
有见到有类似大小的 P时I se P s t l 酶切片段 , 可以认为 , 这里只有一个 P s七I 切点。 郑仲承等
报道的 P的 I 酶切结果 , 仅有一个 7 . O M d r D N A 片段 。 我们认为 P就 I 片段应是一个完整
的单位。 因此可 以用 P tS l 酶切来克隆完整的 r D N A 单位 , 另文助 , 将报道蓖麻蚕 r R N A
基因完整单位的克隆株及其物理图 。
本工作承上海药物研究所脂给卜环化丝氛酸 , 我室工具酶组提供限制酶 , 冯宗铭同志提供 T ` D N A 连接酶 , 特
此一并致谢。
口
闷
气
协
3期 蓖麻蚕 ( A“ ~ “ 瓜 )核榕体 R N 人基因片段在大肠杆菌中的无性繁殖 93 2
七 参 考 文 献
户
李
-
户
一七
卜
〔 1] M or r o w, s . r . et al . 取户。 t 1O n an d tr a叹 ir tP io n o f eu 恤yr 口喊c D N A ln 肠 `知分初万自 C 旧` . 尸洲沁 . y 口 t
刁`团 . 吕面 . U习A . , 19 74, 孔 , 17 43 .
【2] Wel a ue 乌 P . K . et 目 . 人功 p五五ed 五加 s o m幻 D N A f r o m X ef 岭户翔 乙侧州白 h a 加et or ge n eO “ 8 1冲ae r le n gt 加 .
谊卜近 . , 19 74, 孔, 邵 23 .【3 〕 W e刀匕ue r, P . K . 助 d R伙刁 e乙 B . H . A o m aP r l s姐 记 切 e B t r u c nt ar 】。 r g an i业 it on Of a m户 if de 五加 s o m a l .
D N A f加 m X印叼必招 饥祖泳` a dn X枷别贴 友绍劣妇 . J . 皿碗 . 召仍 1 . , 19 75 , 时 , 15 1 .
[ 4 ] W
e al u e
r , P
.
K
.
et al
.
T五e
ar
n ge m
e
nt o f le
n
gt h 加et or g e en i ty i n er 加a t i n g u n i切 o f a m沙 6 ed a n d
比or m叨om al 对 b 哭 oma l D N人 f or m X e舶到” 乙鲜吻 . 访闭 . , 19 76 , 1肠 , 拐 .7〔 5 」 M a d e n , B . E . H . a n d T a到沁f, K . N at u er of 切 e ir ob os m叭 B N A tr a acn ir 卜泣 全or m 场 e X an d y 比 or m -o
os m e s o f肠 OS叩 h初 饥 e乙。 儿。夕郎 t盯 . 幼诏 · , 1 9 74 , 幼0 , 5 1 .
[ 6 〕 aT r ot f , K . D . a n d D a w id , 1 . B . S i m i la r i饭es a n d d i f e er n “ 拍 i n 比e trS u e t u r . o 吏 X a dn y 曲 or m咖 m e
r R N A ge
n印时 刀阳砚少天翻 . 刀口云娜 , 1 9 7 6 , 到幼 J 2 .7
[ 7 ] e l , 阳 r , D . M . a n d H o gesn
,
D
.
S
·
A n ovel ~
n g e m e n t of 伽 18 a n d 2 8 8 哟ue cne i n a 功钾a it n gu山 t of 价 0 5卯而召。 恻如印 a 公, r D N A . C翻 , 1 9 7 7 , 1 0 , 1 6 7 .
[ 8 〕 W h iet, R . L . a dn H gO esn
,
D
.
5
.
R l o P am P
i鳍 o f ht e 18 a dn 28 5 哟 ue n “ ” i n ht e l o n g a n d 曲 o rt
er 户姐七n g u n i切 of 汤OS O p h沥惚裕几叩此 t分 rD N A . elC z, 19 7 , 10, 17 .7
[ 9 ] W e血 u e r , P . K . ` n d D a w i d , I · B · T he st r u e tuar l or g a n加饭O n 记 r i bo O8 m a l D N人 访 rD OS 印为` 冶 公记卜侧献粉` 时份 . 山召, 1 9 7 7 , 1 0 , 1 9 3 .
〔功〕 M a n ` 刀 .9 R . P . et 心 . T加 创 n 朋 为 r 185, 5
.
8
a n d 285 踢 N A 讨 刀妙协勿了 ” “ 甲 . a er o r g a D汤叭 初 ot
恤 dn e m加 sp幽 o f u山加 r m BI n gt 五 . G曰切 J 1 9 7 8, 4 , 1 5 3 .
〔1月 郑仲承等: 蓖麻蚕核搪体核搪核酸基因的限制性内切酶酶切图潜 . 遗伶学报 , 1 981 , 8 ( 3) , 2 0 .3
【12 〕 C七lm an , 人 . et al . RaP id uP ir 五ea 幼on of p俪m id D N劫 b y hyd or xy a砰 t iet ho or 毗切g r a Ph y . 刀盯 . .J石宜沁加仇 . , 1 9 78 , . 1 , 3 0 3 .
[ 1 3 ] O北e n , 8 . N . e t al . N o n e b or m os m a l a int b io 饭0 了妇日15协 cen i
n b的et r i a : eG n 的 i c 幼 a sn 全b r 口 . t i o n o 吏
丑那加” 初为勿 C碗` b y 石卜全创加 r D N A . 尸 r “ . N at . 通“ 日 . 名时 . U S A . , 19 72 , 即 , 21 10 .
1[ 4 1 石的 il va r, P
.
et al
. 伪朋七our it on a n d 比 a acr et r主皿饭姐 of D O w C IO苗鳍 帕 b jC】的 . 口即招 , 1 97 乞 , 拓 .
[ 15〕 Gur an et i n , M , a n d H go n 倪吗 D . 8 . Co l o n y h y b r i di . t l on : A 功 e tb do f o r 比 e iso la t io n o f c fo n叻 D X A
七b a t CO n 仪` n a s到契迈e ge ne . 尸r “ . N时 . A c心 . 绷 . U 习乙 , 19 75 , ” , 39 61 .
[ 16〕 G at 马 M . J . a班 川加 n b u r g , L . G . T b e use o f R N A h be z喊 初 ` 加 w i th i od i n于 12 5 s n m o leC u la :五y b ir d i吕 a饭on el 钾ir me n et . 别沈万`仍 . 刀勿 p为尹 . 通时伪 19 72 , 朋 . , 48 .5
[ 1 7 ] s o u比e丈 n , E · M . 块俪幻on of s环 c迁e 既吸u e n咖 翻m o gn D N 人 f r a g m e n 切 se P a r a目 b y g e l e leC 址。 Ph o栩运·
J
. 皿改 . 别碗 . , 19 75 , 98 , 50 .3
【18 ) 吴祥甫、郑仲承等: 待发表。
卜、
巨
卜
气
已
翔
2洲 生 物化 学 与 生物物 理 学 报 14 卷
L C ON IN G OF R ESR T T IC ION F R A G MN ET SF OTH E
R B I O S O M人L R N A G EN E OF S IL K WR O M
AT T A C习 SR尤 71盯 N H I E S C ER ( I牙打滩 C OL J
W uX 工人N o
一
F uZ H N E GZ 且 N o G一H N E GJ x人N eF u一 M Ez
OH u M EI
.
J IN 印翻 X认。 一zH EN L IT sA卜 PN I G
《Z彻 t i以召 o jB宜记加卿t叫 , A CQ山仍幻 及放泊 , 名如匆加`)
.
A B S T R A O T
U s l n g t h e lP as m id PB R 3 2 2 as
a v ce otr
,
cE
o R I一 a m H I a n d B a m且 1 r e s七r i e t i o n
丘昭me n切 of t h e r ibo so m al R N A g e n e (r D N A ) fr o m t h o s ilk w or m A “ ao 二 , 初俪感
(尸入感弘阅 , 协 。 9. `入协 犷初伽叼 h va e b拍 n cl o n de 恤 E . 。。肠 . T he ag ar ose ge l le ce tr 。 -
Ph o r e七i c an aj y s is fO ser 七ir e t i o n fr ag m en t s fr o m 场 b r id P las m id P A R I a n d PA R Z a n d
助 u ht em h y b idr iaz 七i o n i n d iaC切 t h a t PA R I a n d P A R 2 e o n iat n ser l托℃ t i v e ly a 1 . 9 5 M d卫拓。 R l一 aB m R I fr ag m e n七 a n d a 2 . 6 M d B a m H I fr ag m e n七. T h e d i r ce t i o n o f r D N A
aB m m 2
.
6 M d 还 se r仪吐 fr ag m e n t h a s be n d e t e r m i n e d .
.
叫
月ō闷. 月
月
白