全 文 ：图 6　假杜鹃叶表面撕片图
1.上表皮细胞　2.下表皮细胞及气孔　3.非腺毛　4.腺
鳞　5.含钟乳体细胞
3　讨论
　　上述结果显示 ,假杜鹃无论是其性状 ,还是显微
结构均体现了爵床科植物的典型特征。如其单叶对
生 ,叶 、茎的表皮细胞内含钟乳体 、直轴式气孔等。
但在药材性状中 ,萼片边缘具刺状小齿是其重要特
征。其根 、茎 、叶显微构造亦都符合双子叶植物构造
特征 ,但假杜鹃各部薄壁细胞中均含草酸钙针晶 ,根
中初生木质部木化程度高 ,与次生木质部分界明显 ,
茎中内皮层明显 ,具凯氏点 ,叶上下表皮具腺鳞及非
腺毛 ,腺鳞的形态 、非腺毛的外壁具疣状突起等均可
作为鉴别假杜鹃的重要特征 。
参 考 文 献
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山慈菇及其伪品的蛋白质电泳鉴别
刘　苗1 ,杜森山 1 ,王海南 2 ,周　英1, 3＊
(1.贵州大学生命科学学院 ,贵州 贵阳 550025;2.国家食品药品监督管理局药品审评中心 ,北京 100038;
3.北京大学天然药物及仿生药物国家重点实验室 ,北京 100191)
　　摘要　目的:建立山慈菇与其伪品的蛋白质电泳鉴别方法。方法:采用聚丙烯酰胺凝胶电泳技术 , 对山慈菇正
品和伪品丽江山慈菇 、金果榄 、白芨 、山兰进行鉴别分析。结果:山慈菇蛋白谱图有 3条特征性谱带 ,与其伪品蛋白
谱图具有明显的差异。结论:蛋白质凝胶电泳是鉴别山慈菇与其伪品的一种科学 、简便 、快捷的方法。
关键词　山慈菇;伪品;凝胶电泳;鉴别
中图分类号:R282.5　　文献标识码:A　　文章编号:1001-4454(2009)05-0698-02
收稿日期:2008-12-25基金项目:贵州省中药现代化专项基金([ 2007] 5021)作者简介:刘苗(1982-),女 ,硕士研究生 ,研究方向:天然产物与生化药学。＊通讯作者:周英 , Tel:0851-3854677, E-mail:yingzhou71@ 126.com。
　　山慈菇为兰科植物杜鹃兰 Cremastraappendicu-
lata(D.Don)Makino、独蒜兰 Pleionebulbocodioides
(Franch.)Rolfe或云南独蒜兰 Pleioneyun-nanensis
Rolfe的干燥假鳞茎 。前者习称 “毛慈菇 ”,后二者习
称 “冰球子”〔1〕 ,主产于贵州 、四川 、云南等长江以南
各省区 。山慈菇始载于唐 《本草拾遗》 ,具有清热解
毒 、消肿散结的功效。临床上山慈菇作为抗肿瘤药
物使用 〔2〕 ,由于用量大 、价格高 ,市场上出现大量伪
品如丽江山慈菇 、金果榄 、白芨 、山兰等 〔3〕 ,严重影
响了临床疗效 。为合理利用山慈菇 ,减少临床用药
隐患 ,有必要建立一种快速 、简便的鉴别山慈菇及其
伪品的方法。本实验采用蛋白凝胶电泳〔4〕法 ,通过
观察蛋白谱图可达到快速鉴别。
1　材料与仪器
1.1　材料　杜鹃兰 、独蒜兰 、丽江山慈菇 、金果榄 、
白芨 、山兰药品均购自贵阳中药材市场 ,由贵州省信
邦制药公司贺定祥工程师鉴定。所用试剂均为分析
纯。
·698· JournalofChineseMedicinalMaterials　　第 32卷第 5期 2009年 5月
DOI :10.13863/j.issn1001-4454.2009.05.037
1.2　仪器　800型台式离心机(上海机械十厂),
DYY-Ⅲ -4型稳压稳流电泳仪(北京六一仪器厂),
DYY-Ⅲ -4型圆盘电泳仪(北京六一仪器厂), HH-
S2S型数显恒温水浴锅(上海亚荣生化仪器厂)。
2　方法
2.1　试剂配制和凝胶的制备
2.1.1　试剂配制:单体交联剂:称取丙烯酰胺
30.0g, N-N亚甲基双丙烯酰胺 0.8 g,置于棕色瓶
中 ,加蒸馏水溶解并稀释至 100mL,冰箱保存;分离
胶缓冲液:用 0.5mol/L三羟甲基氯基甲烷(Tris)和
0.04mol/L乙二胺四乙酸(EDTA)缓冲液 ,调节 pH
值为 8.9;加速剂:四甲基乙二胺(TEMED);催化
剂:10 g/100 mL的过硫酸铵溶液;电极缓冲液:0.4
mol/L硼砂缓冲液;固定液:13%三氯乙醇;染色液:
称取考马斯亮蓝(R-250)0.5 g加 95%乙醇 90 mL,
冰醋酸 10mL,用蒸馏水稀释至 4倍;洗脱液:0.25
mol/LNaCl;保存液:取冰醋酸 7.5 mL、甲醇 5 mL,
加蒸馏水至 100mL。
2.1.2　凝胶配制:取分离胶缓冲液 1.0 mL、单体
交联剂 2.1mL、催化剂 0.1 mL、加速剂 0.01 mL,加
蒸馏水至总体积 10.0 mL,使丙烯酰胺凝胶浓度达
6.3%。
2.2　装柱　先将胶管封好底 ,将配制好的分离胶
液注入胶管内约 70 mm,在凝胶表面轻轻加一层正
丁醇 ,用于隔绝空气 ,使胶面平整 。室温静置约 60
min。
2.3　样品液的制备　取实验药材粉末各 0.5 g,加
电极缓冲液 5 mL,研磨成匀浆 ,静置 30 min,转移至
离心管中 , 3 000 r/min,离心 15 min,取上清液 0.5
mL加入 0.05%溴酚蓝示踪指示剂 2滴 ,混匀备用 。
2.4　上样与电泳　将胶管封底去掉 ,放入圆盘电
泳槽中 ,套紧 ,电泳缓冲液加入圆盘电泳上 、下槽中 ,
电泳缓冲液要盖过胶管口 ,用微量进样器吸取样品
液 20μL加入胶管电极缓冲液与浓缩胶之间的界面
上 ,开始电泳 。初期为 1 mA/管进行电泳 ,当指示染
料进入分离胶后 ,按 3.5 mA/管进行电泳 ,待示踪指
示剂行至距末端 0.5 cm时 ,关闭电源 , 全程约 40
min。
2.5　染色与脱色　电泳结束后 ,取出胶条移至大
培养皿中 ,蒸馏水漂洗 2次 , 置固定液中固定 10
min,用蒸馏水冲去残留缓冲液和固定液 ,于 90℃染
色液中染色 10min〔5〕。
蒸馏水洗去凝胶表面附着的染料 ,在 50℃洗脱
液下反复洗脱 ,至背景清晰为止 ,置保存液中分析。
3　结果
山慈菇正品杜鹃兰 、独蒜兰蛋白谱带在 Rf值小
于 0.35处有 2条二级谱带和 1条一级谱带相同 ,它
们具有一定的相似性 ,但与其伪品丽江山慈姑 、金果
兰 、白芨 、山兰的蛋白电泳谱带有明显差异。电泳结
果见图 1。
图 1　山慈菇及其伪品蛋白凝胶电泳图谱
1.杜鹃兰　2.独蒜兰　3.丽江山慈姑　4.金果榄　5.白
芨　6.山兰
4　结论
4.1　电泳图谱显示 ,山慈菇正品的电泳谱带有 2
条二级谱带和 1条一级谱带相同 ,由于正品山慈菇
存在亲缘关系 ,推测这 3条蛋白谱带为山慈菇的特
征谱带。而其他 4种伪品蛋白谱带与山慈菇谱带均
有明显差异 ,因此蛋白质谱带的不同 ,可以作为山慈
菇与其伪品的鉴别依据 。
4.2　山慈菇药材的蛋白质种类是稳定的 ,因为山
慈菇是靠块茎来保持植物的遗传特征的 ,这在理论
上是有根据的 〔6〕 ,且本研究的蛋白质电泳图谱也反
映了植物种间的联系与差别 。本实验方法操作简
单 ,药材用量少 ,将伪品的鉴别时间从 30 h以上缩
短到 2 h左右 ,具有一定的实用性。
参 考 文 献
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