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基于ITS2序列的禹州漏芦和漏芦药材基因识别



全 文 :20 16 第十八卷 第二期 ★Vol . l 8 N〇 .2
基于 ITS2 存 列 的 焉 州 漏多和漏多 药材I 因识别 *
陈 江平 \侯典云 2 , 严绪华 3 , 胡志 强 4 ,魏 蒙 \ 胡 志刚 汪 乐原
( 1 . 湖北中医药大学药学院 武汉 430065 ;2 . 河南科技大学农学院 洛 阳 47 1023 ;
3 . 武汉市中 医医院 武汉 43 00 10 ;4 . 武汉市第一医院 武汉 43 0022 ;
5 . 中 国 中医科学院中药研究所 北京 1007 00 )
摘 要 : 目 的 :应 用 ITS 2 序 列 鉴别 禹 州 漏 芦 和漏芦 药材 的真伪 , 为 临床准确 用 药提供可靠的基 因识 别
方法 。 方法 :收集 多 基原 药材 禹 州 漏芦基原物种蓝刺 头和 华 东 蓝刺 头共 1 4份样品和漏 芦药材基原物种祁
州 漏芦 8 份样品 , 经 实验获取 ITS2 序 列 , 结合 G enBan k 中 20 条相 关近缘混伪 品 序列 , 建立 以上物种 和混
伪品 的 DNA 条形码鉴定方法 ;将从市场上收集 的 1 1 份禹 州 漏 芦和 20份漏 芦 药材的 ITS2 序列 与 以上序 列
进行比 对分析和构建 系 统 N J 树。 结果 : 禹 州 漏 芦 两 个基原物种 的序 列主导单倍型相 同 ; 禹 州 漏芦和漏 芦药
材基原物种最大 K2P 距 离 均 小 于其与 混伪品的种 间 最 小 K2P 距 离 ; 系统 NJ 树分析均 能准确 区 分 禹 州 漏芦
和漏 芦 药材与 各 自 混伪品 。 药 材检测结果表明 , 1 1 份 禹 州 漏芦 中 10 份为 正品 , 1 份为 伪 品 ; 20 份漏 芦 中 2
份为 正品 , 1 8份为伪品 。 结论 : 本研究建立 了基于 ITS2 序列 的 禹 州 漏芦和漏 芦 药材 DNA 条形码鉴定方法 ,
可用 于快速鉴别 禹 州 漏 芦和漏 芦 药材真伪 。
关键词 : 禹 州 漏 芦 漏芦 ITS2 序 列 基 因识 别 近缘混伪 品
do i :10 . 1 1 842/w s t . 20 1 6 .02 .0 1 0中 图分类号 : R28 2 .5文献标识码 : A
禹州漏芦为菊科蓝刺头属植物蓝刺头 心 /i i rw/w抗脂质过氧化 、免疫促进 、改善脑功能 和抗衰老作
Za i i/o Z i zwTa u sch . 或 华 东 蓝 刺 头 Ec/i i no /wjgr sy i s i i用 因此 , 《 中华人民共和国 药典 》 1 995 年版开
H an ce 的干燥根 1 1 1 。 这两个种为 中 国特有物种 ,分始将祁州漏芦单独作为漏芦药材使用 , 故禹州漏芦
布于辽宁南部 、浙江 、 山东 、安徽 、江苏 、 福建等地区和漏芦药材需区别使用 w 。 历代本草所述漏芦药材
[2 , 3 ]
〇 漏芦始载于 《神农本草经 》 ,为菊科漏芦属植物的基原物种不尽相同 , 民间混用 、误用情况普遍 , 漏
祁州漏芦 uw/Z orum(L .)D C . 的 干燥芦的 混伪 品涉及 8 个科约 30 种植物 , 严重影 响 了
根 。 在中 国分布 的漏芦属仅有 2 个物种 , 为祁州漏临 床用药的准确性和安全性 [2] 。 因此 ,寻找一种快
芦和鹿草 /? .carthmoWed W i l l d . )D i t tr ic h[ 4 ’ 5 1 。 禹速 、简便 、可靠的 禹州漏芦和漏芦药材及其混伪 品
州漏芦曾 与漏芦均作为漏芦药材收载于 《 中华人民鉴定方法尤为重要 。
共和 国药典 》 , 近代研究表 明两者的化学成分及疗DNA 条形码技术 ( DNABar cod i ng ) 是指利用
效各有不同 , 禹州 漏芦具有 良好 的抗炎消肿 、 抗肿基 因组 中一段公认 的 、 相对较短的 DNA 片段来进
瘤 、抗病毒作用 ;漏芦具有较好的抗动脉粥样硬化 、 行物种鉴定的分子诊断新技术 。 陈士林等 [ 1° ] 提出
的以 ITS2 为主 , 为辅的药用植物条形码
收稿 日 期 : 2〇 1 5- 1 1 -29鉴定体系 已得到广泛认可 t l l ] , 目前 已成功应用于功
修回 日 期 : 20 1 5- 1 2-07
*科学技术部 国 家重大新药创制科技专项子课题 ( 20 142乂0930430700 1 -02 1 ) : 中药新 药安全性检测技术与标准研究 - 中药原料药混伪 品分子
基 因鉴定技术与标 准 , 负 责人 : 胡 志刚 ; 湖北省科技支撑计 划 (研发与示 范类 ) ( 20 1 5BCA275 ) : 茯苓等 8 种湖北优势 中 药材 DNA条 形码分子
鉴定体 系构建 , 负 责人 : 胡志刚 。
* * 通讯作者 : 胡 志刚 , 博士 ,副教授 , 主要研究方 向 : 中 药 资源与分子鉴定 ; 汪乐 原 ,教授 , 主要研究方向 : 中药 资源 与 品盾研究 。
202[Wo rld, Sc i ence andTechnology/Modern izat ion of Tradi t iona lCh in ese Medic ineand Ma te ria Medica ]
世界科学技术一中医药现代化 ★专题讨论 : DNA条形码技术在中药材及其种源鉴定中的应用
劳 叶 、牡丹皮 、葶苈子 、 苍耳子等大量药材 的物种鉴后用 改 良的 CTA B 法提取植物总 DN A 。 采用通用
定 本研究采用 1TS2 序列 鉴定 禹 州漏芦和漏引 物 、 PCR 反应条件及扩增程序 对样品 总 D NA 进
芦药材及其近缘混伪 品 , 为其快速准确鉴定 、临床用行 ITS2 序列扩增 。 扩增产 物经琼脂糖凝胶电泳
药安全及资源开发利用提供可靠的基因识别方法 。检测 , 对条带单一且清晰 的 PCR 产物进行双 向测
I 材 _料序 。 测 序峰 图 用 Cod on Co d eAl ign e rV 4 . 2 .4( 美 国
C o do nCod eC o 公司 ) 进行校对拼接 , 基于 隐马尔可
本研究实验材料包括禹 州 漏芦基原物种蓝刺头夫模型 HM M e r 注释除去低质量端 , 获得 IT S 2 序列 ,
8 份 、华 东蓝刺头 6 份 , 漏芦基原物种祁 州漏芦 8 份并提交至 N CB I 得到 G en B an k 登录号 。
以及祁州漏芦同属物种鹿草 丨 份 。 所有样品经 中国2 .2 基原 物种和 市场收 集 的 药材 鉴定分析
医学科学院药用植物研究所林余霖研究员 鉴定 , 凭利 用 M EGA(M o lec u l a rE v o l u t i o na ryGe n e t i c s
证标本保存于 中 国 中 医科学院 中药研究所。 同时 ,A n a l y s i s )6 . 0 对 拼接 后 的 禹 州 漏 芦 和 漏 芦 药 材
从 Ge nBan k 数据库下载 2 0 条相关近缘混伪 品序列 ,基原 物 种 及 其混伪 品 ITS 2 序 列 进 行 比 对 分 析 ,
所有序列 经查阅 文献验证 , 确 保准确 可靠 [ 1 ° ’ 1 6 _ 1 8 ] 。计 算 种 内 和 种 间 K 2P (K imu ra2 -p aram e t e r ) 距
禹 州漏 芦 和漏芦药材基原物种及其近缘混伪品的离 , 并将 序列 提交到 中 药 材 D N A 条 形码 鉴定 系
I TS 2序列信息详情见表 1 。统 ( h t t p : / /www . t cm b arc ode . cn/ c h i na/ ) , 用 于 后 续
2 方法研究 。 将从市场上 收 集 的 1 1 份 禹 州 漏芦药材 ( 编号 : YC 0004Y P0卜 1 1) 和 2 0 份 漏 芦 药 材 ( 编 号 :
2 . 1D NA 提取 、 PCR 扩增及测序 和数据 处理Y C0 0 0 3 YP0 1 -20) 的 IT S2 序列 导人到 中药材 D N A
用 75 % 乙 醇擦拭 实验 样 品 表面 , 取 禹 州 漏芦条形码鉴定 系统进行最大相似度 比对鉴定 , 并结合
基原物种蓝刺头 、华东蓝刺头和漏芦基原物种祁州两种 药材基原物种 及其混伪 品 的 ITS 2 序列 共 同构
漏芦叶片各 3 0m g , 鹿草根茎 5 0mg 。 用球磨仪 (德建系统 N J(N e igh b o rj o i n i n g ) 树 , 以 检测两种药材
国 R et s c hMM 400 公司 ) 研磨 2m i n ( 30 次 /s ) , 然的真伪 。

表 丨 禹 州漏芦和漏芦药材基原物种及其近缘混伪 品 ITS2 序列信息

基原物种拉丁名凭证标本号样品来源GenBank 登录号
廿 土 ^HB3457MT01 -0 3北京松山 、 中国 医学科学院药用KU 1 28435 -37蓝刺 头挪—婦0-HB3457MTO5-09植物 园 、安徽亳州KU 1 2843943
球序蓝刺 头sp/wzeracep/ia/ iis GenBank GU I 1 654 1 GU I 164 85AY538637
华 东蓝刺头£HB345 8MT0 1 -06山 东青岛 、福建莆田 、辽宁鞍山KU 1 28429-34
长毛蓝刺 头E. GenBankGU 1 16552AY 538645
砂蓝刺头 GenBank GU 1 1 65 10
矮蓝刺头£ /mm必GenBank GU 1 165 14AY538635
全缘叶蓝刺 头E.integrifol im GenBankGU 1 1 65 17
丝毛蓝刺头E.nanus GenBank GU I  1652 8AY538654
硬叶蓝刺 头E.rhv GenBank GU I 1 6544 AF3 1 9 1 28L35 882
大蓝刺头ia/ossiowGenBankAY5386 3 1
天山蓝刺头細wc/wznims GenB ank GU 1 1 654 5
祁州 漏芦Rhaponticumun^flommHB3083MT05- 12 、,可^ J 国 安 丨
、KU 128444-5 1
祁州 漏芦H miflorumGenBank FJ980340GQ4345 15DQ3 109 32
鹿草HcanhamoidesHB 3457MT0 1新疆乌鲁木齐KU 1892 1 8
虎草 GenBank DQ3 1 0933
[ WorldSc ienceandTechnology/Modernizat ion of Tradi ti ona lCh ines eMed ic in eandMa t eria Medica ]203
20 1 6 第十八卷 第二期 * V〇1 . 18 N〇 .2
3 基原物种鉴定结果与分析K 2P 距离及其与混伪品 的种 间 K2 P距离 ,详见表 4 。
, , . , . _± 由 结果可知 , 禹州漏芦药材最大 K2P距离 ( 0 .0046 )
3 . 丨 1 丨
’ 卜 2
^^列 5^ 「位 , . ' 、^3 析 、^、 小 于其 与混伪 品 的最小 K2P 距离 ( 0 .0 1 40 ) ,平 均禹 抑 刺头 和十J蓝, 1 4K2P 距 离 ( 〇 ?_7)、于 其与混伪 品 的种 间平 均水序



序列 比 ■ 后长 2 2 0bp , 有 2 | 单仏^K2P 距离 ( 0 . 1469) ;漏芦药材最大 K2P距离 (0 .0 1 85 )S 于华 东蓝刺 头 的 6 水 序 列均 为 A 1 埋 ’ 且两 |、物
=K2 P 距 离 (0 . 0075) 小 于其与 混 伪 品 的种 间 平均种 为整体进竹后4分析 …了位乂 表tf I K2 P 距离 (0 . 25 02 ) , 这说 明 K2 P 距离 可 以 将禹 州基 属混伪 品 1 6 条 I TS2 序 列 中 , 、 ) 、 ? 生和漏与其混伪品区分开 。
5 5 个变异位点 。
漏芦基原物种祁 州漏芦共 1 1 条序列 , 序列 比对4 市场收集药材结果鉴定分析
后 长度为 22 2b P

有 7 个单倍型 , 产生 5 个变則立
4 . 丨 序 列 比对鉴定结果点 , 见 表 3 。 祁州 '漏 户 ^關物賴早 白勺 2 条 I TS 2禹 州 漏 芦药材 (编 号 : YCOO 〇4YP0 1 - 1 1) 和 漏序

共产生 变异 丨乂点 。芦药材 ( 编号 : YC 000 3 Y I>0 1 -20 ) rrS2 序 列 的 最大
3 - 2距 尚 分 '斤
八化沛 如 从從 山相似度 比对鉴定结果 中 , 1 0 份 禹 州漏芦药材 可 比对基于 MEGA 6 . 0 分析两种药 材基原物种 的种 内 、
,、 丨 ,到其基原物种 蓝刺 头或华东 蓝刺 头 , 1 份 比对到其
它科 属 物种 ; 2 0 份 漏芦药材 中 , 2 份 可 比 对 到其基
产 2 蓝剌 ■ ITS 2賴魏&点 .■原物种祁 州漏芦 , 1 8 份比对到其它科属物种 。 比对
^^ ^^E___ 结果详见表 5 。KgriimiA l (6) C
eZ^ M (7)*4 .2N J 树鉴定结果
—A2( l ) T 針 ITS2 序列_ 的雜_中 , 禹 州
-漏觸
, , ?T" ; ' . ,A ^^  ̄  ̄基原物种蓝刺头和华东蓝刺头聚为一支 ,漏芦的基原
一行碱i相 同 。 物种祁州 '漏芦单独聚为一支 , 月?均能与它们的 '混伪 品
区分开 。 1 1 份 禹州漏芦药材 中有 1 0 份与基原物种

表 3 祁州漏芦
^^#序列变异位£聚为一支 , 1 份在其它支上 ; 20 份漏芦 药材 中 只有 2单哼型__^__ _Z^P__ _1 85 -b-P . .份聚到基原物种 的支上 , 1 8 份分散在其它支上 。
B l ( 3)CTCAG
B2(2)****A5讨论
h i ’*^* 5 . 1ITS2 序 列 鉴定 禹 州 漏 芦 和 漏 芦 药 材 基原物种B4


)T *S GA
B 5( l )T*GRA的 准确 性和可 罪 性
B 6( 1 )*,* *R 本研究表明 , 基于 ITS2 序列可将禹州 漏芦的基
37 ( 1 )*CGGA原物种蓝刺头 和华东蓝刺头与 漏芦的基 原物种祁
注 :括 号 里 面 数字代表单倍型 序 列 条数 , ” 表示 与 第 - 行
’州漏 户 区 分开 ’ 且均能 与各 自 的 混 伪品 区分开 ; 蓝
碱基相 同 , S 和 R 为 简 并碱基 ( S : G/C , R : A /G ) 。刺头和 华东蓝刺头在 NJ 树上聚 为一支 , 且主导单
倍型相 同 , 故将其作为整体进行分析 。 ITS2 序列变

表 丨属細扁简概細为品 1 距离
 异分析可知 , 两个药材 的基原物种与 同属 混伪品种
类别最sr 最nr 间变异位点数均明 显大于其种 内 变异位点数 。 ^W6 .— 0一 距_ 明 , 禹賴芦_芦的_最大 (平均 ) K2P
距离均小于 它们与各 自 混伪 品 的 种 间最小 ( 平均 )
混伪品
一°*281 8°-0 14 0° * 146 9K2P 距离 。 从构建 的 NJ 树可知 , 两种药材 的基原
漏 芦 药材0 .01 8 50 .00000 .0075物种均单独聚为一支 。 综上可知 , ITS 2 序列能将两
漏芦药材与混伪品0 .3 0320 .02330 .2502种药材基原物种 与各 自 的混伪品区分开 。
204[WorldSc ience andTechnology/Mo de rn izat io nof Tradit iona lCh inese Medic ineand Mat eria Medi ca ]
世界科学技术一中医药现代化★专题讨论 : DNA条形码技术在中药材及其种源鉴定中的应用
表i 禹 州 漏芦和漏芦药材 ITS2 序列比对鉴定结果"鉴定结果
药材编号药材来源 基原物种拉丁名 基原物种中文名
YC0004YP0 1 河南郑 州Ardisia cremita朱砂根
YC0004YP02河南 禹 州 E. latifolius/E. grijsi i 蓝刺 头 / 华 东蓝刺 头
YC0004YP03 河南洛阳E . kuifolius/E. grijsi i蓝刺头 / 华 东蓝刺头
YC0004YP04河南洛阳 E .I cUifoli us/E. grijsi i 蓝刺头 / 华东蓝刺头
YC0004YP05 安徽亳州E . kutfolius/E. grijsi i蓝刺头 / 华东 蓝刺头
YC0004YP06安徽亳州 E.kuifolius/K grijsi i 蓝刺 头 / 华东 蓝刺 头
YC0004YP07 安徽亳州E. kuifolim/E. grijsi i蓝刺 头 / 华 东蓝刺头
YC0004YP08安徽亳州 E.kuifolius/K grijs ii 蓝刺 头 / 华 东蓝刺 头
YC0004YP09 安徽亳州E.kuifolius/E. grijsi i蓝刺头 / 华 东蓝刺头
YC0004YP 1 0安徽亳 州 E.kutfolius/E. grijs ii 蓝刺头 /华 东蓝刺 头
YC0004YP 1 1 安徽亳 州E. kdifoli us/E. grijsii蓝刺头 /华 东蓝刺头
YC0003YP0 1>可北保定 A nemone hupehens is 打破碗花花
YC0003YP02 河北安国A .hupehens is 打破碗花花
YC0003YP03安徽亳州 A .hupehens is打破碗花花
YC0003YIW 河南禹 州Ah upehemis 打破碗花花
YC0003YP05河北保定 A . h upehens is 打破碗花花
YC0003YP06 河北保定Sanguisorbaofic inal is先输
YC0003YP07安徽亳 州 S.ofidrud is地输
YC0003YP08 安徽亳州S. oficinalis 驗
YC0003YP09甘肃陇西 A .hupehens is 打破碗花花
YC0003YP 10 河南郑州Chaetoserisroborowski i川甘毛鱗菊
YC0003YP 1 1东北沈阳 Ah upehens is 打破碗花花
YC0003YP 12 安徽亳州A .h upehe t is is 打破碗花花
YC0003YP 13安徽亳州 A .h upehens is打破碗花花
YC0003YP 1 4 安徽亳州A .h upehens is 打破碗花花
YC0003YP 15安徽亳州 Ahupehens is 打破碗花花
YC0003YP 16 四川 成都K un lfonim祁 州 漏芦
YC0003YP 17安徽亳 州 It 祁州 漏芦
YC0003YP 1 8 安徽毫 州 .Ahupe fwm is 打破碗花花
YC0003YP 19安徽亳 州 A .hupehensis打破碗花花

YC0003 YP20 安徽亳 州


4 .
—— 打破碗花花

5 . 2 丨TS 2 序 列 检测 市场收 集 的 禹 州 漏 芦 和 漏 芦 药为混伪品 , 而无需 明 确 其基原物 种 , 因此该方法适
材真伪 的 可行性用 于禹 州漏芦 和漏芦药材 的真伪检测 。 随着 中药材
基于序列 相似性比对和 系统 N J 树对两种 药材DN A 条形码鉴定系统数据库的不断完善 , 对于药材
真伪鉴定的结果均表明 , 1 1 份禹 州漏芦药材 中 , 1 0检测 的物 种鉴定结果将更加稳定可靠 。
份为正 品 , 1 份为混伪 品 ; 2 0 份漏芦 药材 中 , 只有 25 . 3 中 药 材 D N A 提取方 法的 选择
份 为正 品 , 其余均为 混伪 品 。 需要说 明 的是 , 本研DNA 提取是 中药材 D NA 条形码鉴定 的首要环
究 目 的是检测药材真伪 , 而不侧重对药材混伪品进节 , 能 否获得 符合要求 的高质量 D NA 是决定 D NA
行基原物种溯源 ;故对于 ITS 2 序列 比 对结果 为其它条形码鉴 定能否成功 的关键 因 素 1M 1 。 常用 的动植
科属物种 的市场 收集 的药材样品 , 本研究 只认为其物总 D NA 提取方法有试剂 盒法和 C TA B 法 。 试剂
[ World Sc ienceandTechno logy/Mode rnizat ionof Trad it io nal Ch inese Medic ine andMat er iaMedica ]2 05
2 0 1 6 第十八卷 第二期 ★ V〇 1 . 1 8 No .2
盒法具有快速 、 方便 、避免有机溶 剂污染等优点 , 但和准确使用造成极大隐患 ,传统鉴定方法 已 经难 以
是成本偏高 ; 且根据曹琳等 1 2 1 1 和 罗焜等 1 22 1 等的研满足药店 、 医院 、企业等各行业对药材进行快速 、标
究 ,试剂盒对 DNA 降解严重的 中药材不太适用 。 本准化鉴定 的需求 ,建立新 的检测方法对市售药材真
研究采用改 良的 CTA B 法配制 DNA 提取试剂 ,用于伪进行监管十分必要和迫切 | 23 ’ 24 1 。 DN A 条形码技
提取 禹 州漏芦和漏芦两 种根茎类药材 及其叶 片的术在 物种鉴定上具有快速 、 准确 、 高效和 通用性等
DN A , 序列扩增成功率为 1 0 0% , 测序 峰 图质量高 , 特点 , 并且不受药材生长年限 、药用 部位 、植物性状
这表明 改 良的 C TA B 法适用于根茎类药材及其叶片和研究者鉴别经验等因 素 的影响 , 基于通 用的标准
的 DNA 提取 ,且大大降低 了 获取高质量 DNA 的成化技术流程可 以实现对 中药材真伪 的快速 、 准确鉴
本 。 随着 DNA 条形码鉴定 中药材技 术的不断普及 , 定 , 非常适用 于对市售药材 的真伪进行监管 。 中药
运用改 良 的 CTA B 法提取药材 D NA 的方法将实现材 D NA 条形码分子鉴定指导原 则 已 经被纳 人 《 中
标准化流程 。华人民共和 国药典 》 , 为 中药 材基原物种 的 鉴 定提
5 .4DNA 条形码技术对市售 药材进行监管 的 可行性供 了 强有 力 的技 术 支撑 1 2 5 ’ 2 6 1 。 目 前 , D MA 条形码
本研究对市场流通的 禹 州漏芦和漏芦药材真伪技术 已成功用于枸杞子 、 羌活 、红景 天 、矮 地茶和老
鉴定结果表 明 , 两种 药材均存在混伪情况 , 其 中 漏鹳草等药材的真伪检测 | 27 -2 9] 。 随着 中药材 D NA 条
芦药材尤为严重 。 市售药材 品种混乱给 中 药安全形码鉴 定系统的推广应用 , DN A 条形码技术将满足
t▼r*^^ CO^^
^^§i§^^^
雇


YC0003YP 0 6 〕 ̄


 j「 _ ■—Y C0004 YP09 &
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图 2 基于 ITS 2 序 列的市场收集的 禹 州 漏芦和漏芦药材及其混伪 品 NJ 树
注 : l 5〇 〇 t S rap 丨 000 次重 复 , 枝上数值仅显示 自 展支持 率> 5 0 % , “ ▲ ”表 示 禹 州 漏 芦 药 材基 原物种 ; “ 鲁 ” 表示 漏 芦 药材基原物种 ;
“& ” 表示市场 收集 的 禹 州 漏芦 药 材 ; 表 示市 场 收集 的 漏芦 药 材 3
206[Wor ldSci ence a ndTechn ology/Mode rn iza ti onof Trad it iona lChineseMedic i neandMat eria Medi ca ]
世界科学技术一中医药现代化 ★专题讨论 : D NA 条形码技术在中药材及其沖源鉴定中的应用
不 同行业人员对 中药 材快速 、标准化真伪鉴定的需致谢 :感谢新疆维吾尔 自治 区 中药民族药研究所贾
求 , 实现对市 售药材的快速 、 准确 鉴定 , 为保障市售晓光研究员和 卿德刚 研究员 为本研究提供部分实
药材质量和临床用药安全提供技术支持 。验材料 !
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[ Wo rld Science andTechn o logy/Mode rnizat ion ofTradit iona lCh i ne seMed ic in eandMat eriaMed ica ]207
20 1 6 第十八卷 第二期 ★ Vol. l 8 No .2
Iden t ifica ti ono fEch i no p s i sRa d ixa n dRh ap o n t ic iR ad i xU s ingITS 2Sequ enc e s
ChenJi angp ing

,HouDianyun2 ,YanXuh ua 3 ,HuZh iq iang

,WeiMeng 1,
HuZh iga ng 1 ' 5,Wang Leyuan 1
(1 .Co l legeofPha rmacy ,Hu be iUnivers i tyof Ch ineseMedic ine ,Wuha n43 0065 ,Ch ina;
2 .Co l legeof Agr ic ul tu ra l ,HenanUnivers i tyof ScienceandTec hno logy,Luoyang47 1 02 3,Ch ina;
3 .WuhanCi tyCh ine seMedic in eHosp i ta l,Wuh an43001 0,Ch ina;
4 .F i rs tHosp i ta lofWuhan,W uhan43 0022 ,Ch ina ;
5.Ins t i t uteof Ch in es eMa te r iaMed ica ,Ch inaA cademyof Ch ines eM ed ica lS cien ce s ,Be ij ing 1 00700,Ch ina )
Ab strac t :Th i ss tu d ya i med to ide nti fyE ch in op s i sRad i xan dRhap on t i c iRad i xu s in gITS2s equ ence s , i no rde r
top rov ideare l iabl em e thodforc l in ic a lac cu ra t emed i ca t i onbygen erecogni t i on .Fo u rt eensam p le so fEchi nop s
la t ifo l i usTau schandE .gr ij i s i iH an c efromth eo ri g i n- sp ec i eso fm u l t io r i g int rad i t io na lC h i n e s emed i c i n e
E ch in op s i sRadi x ,ande igh ts amp le sofRhapon t i cumun iflo rum(L . )DCfromt heori gin— spe c i eso fRha pon t i c i
R ad ix ,wer ec o l l e c te d .IT S2 seq uen ce sw e reacq u i redbas edo ns t an darde xp e r im ent s ,wh i l eD NAbarc od ing
s ys t emfo r th em a t e r i a l sw a se s t ab l i sh edth rou ghcom b i n i n gtwen tys equ e nce so f re la t i vead u l t eran t sfro m
GenBan k .B asedonDNAb arc odi ngsys te m ,wede t ec t ede lev ensamp l eso fE ch inop s i sRa dixandtwen tysamp le s
o fR h apon t ic iRad i xfromth em ar ke t .Asare su l t ,t hes equ en ce softwoo r ig in- s p e c i e so fE chin o ps isRa d i x
s h aredthes am edo m ina nthap lo ty pe .T hem ax imumi nt ra  ̄ spec i fi cK2Pgene t icd i s tan c eb e tweenE ch ino p s i s
R ad i xan dRhap on t i c iRad ixwasle ssthant hem i n imumin t er- spe c i fi cK2Pgene t icdi st ance .Theana ly s isof
i n t ra- sp ec ifican dgen e t icdi ve rge nceandNJ t reesh ow edth a tE ch in op s i sRad ixandR hap on t i c iRad i xw e re
s epara tedfromth e iradu l te ran tsobv io us ly .Am onge le vens amp l eso fEch in op s i sRad ix ,te no fth emwe regen u i ne
wh i l et herem a i ni ngon ewa sfak e .Howev e r ,am ongtwe n t ysam p l eso fRh ap on ti c iRad i x , twow e reg e nu i ne
a ndth erema i n inge igh te enw erefak e . I twa sc on clu d edth a t ,inth i ss tu dy ,th eDNAb arc od in gte ch n i qu efor
i de n t i f i ca t i ono fE ch in op s i sRad i xan dRh ap on t i c iRad i xwa ssu c c e ssfu l lye s tab li sh edo nt heb as i sof ITS 2
s equ en c e s ,wh i c hwasap owe r fu ltoo lindi s t in gu i sh i ngC h i n e s em e d i c i ne si nthemark e tp l ac e s .
Keywo rd s :E ch i nop s i sR ad i x ,Rhap on t i c iR ad ix ,IT S2seq uen c es ,gen erec ogn i t i on ,adu l tera nt s
(责任编辑 : 马雅静 张志华 , 责任译审 : 朱黎婷 王 晶 )
208[World Sc i en ceandTechnology/Mo de rnizat ionofTradi t io nal Ch ineseMedic ine andMa teria Medi ca  ̄]