全 文 :. 基础研究 唯` : 素
凤尾兰提取物的抑菌活性及其对蒜蔓腐烂的抑制作用
陈庆敏 , 王庆国*
山东农业大学食品科学与 工程学院 (泰安 27 10 18)
摘 要 灰葡萄抱和葱腐葡萄饱引起的蒜蚤灰霉病是导致蒜荃贮期腐烂的主要病 因之一 。 采用滤纸片扩
散法研究了凤尾兰提取液对蒜墨灰葡萄抱和葱腐葡萄抱的抑制作用 , 用二倍稀释法确 定提取液的最小抑
菌浓度 ; 在常温条件下 贮藏 , 探讨不 同浓度的凤尾 兰提取物对蒜荃灰葡萄袍和葱腐葡萄袍 引起腐烂的抑
制作用 。 结果表明 , 凤尾兰提取液对灰葡萄抱和葱腐葡萄饱均有较明显的抑制作用 , 对两种菌的最小抑
菌浓度分别为 0 . 06 2 5 9 /mL 和 0
.
125 9 / m L
。 凤尾兰提取物对灰葡萄袍和葱腐葡萄抱引起的蒜姜腐烂具有较
好的抑制 、 治疗作用 , .2 5 9几 、 5 9 L/ 、 10 9 L/ 的凤尾兰提取物均能有效抑制蒜荃灰葡萄抱和葱腐葡萄抱的
侵染 , 减少蒜釜腐烂 , 其中以 10 9 L/ 的处理效果最佳 。
关键词 凤尾 兰提取物 ; 蒜釜 ; 抑菌活性 ; 灰霉病 ; 腐烂
A n t if u n g a l A e t iv ity o f uY
e c a g l o ir o s a L
.
E x t r a e t a n d it s In h ib it o yr
E f f e C t O n th e R O t O f G s r liC B O lt
C h e n Q i n g一 m in , W a n g Q in g一g u o
C o ll e g e o f F o o d S e i e n e e a n d E n g i n e e ir n g
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.
In ht i s P a P e r, th e a nt i fu n g a l a e ti v iyt o f uY e e a
g lo r i o s a L
.
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n e d b y if l te -r d i s k d i而 s i o n m e th o d , ht e m i n im a l i n h i b i t i o n e o n c e n tr at i o n (M IC )
o f uY e c a g lo r io s a L
.
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2
.
5 9 /L
、
5 9 /L
、
10 9几 uY e c a g lO r i o s a L . e x tr a c t a n d or t o f g ar l ic b o lt w a s er du e e d , t h e b e s t e fe e t w a s a t a i n e d
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·
K e y w o rd s uY e e a g lo r ios a L
.
e x tr a e t: g a r li e b o l t: a n t i fu n g a l a e ti v iyt : gr
e y m o l d : r o t
黄胫小车蝗的含量最低 , 为 2 93 . 2 m g /10 9 。 由此可
见 , 蝗虫是一种很好的天然黄酮源 。
( 2 ) 甲醇对蝗虫黄酮具有很好的提取效果 , 其
最佳提取工艺条件为 : 提取时间24 h , 料液比 1 : 30 。
黄酮的提取量为 2 9 3 . 2 m g/ l o o g 。
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: 7 一 8
-
《食品工业 》20 07 年第 4 期
味` : 索 .签础研究
蒜蔓是我国主要蔬菜品种之一 , 含有丰富的营养
物质 , 如蛋白质 、 糖类以及人体所需的元素C a 、 P 、 eF
等“ 」; 蒜蔓还含有丰富的大蒜素 , 具有较强的杀菌作
用 。 据统计 , 现阶段中国蒜蔓年贮量约 80 万 t , 是我国
目前蔬菜冷藏业中贮量最大 、 贮期最长的蔬菜品种之
一 。 但因多种原因 , 特别是微生物侵染导致的蒜蔓贮
藏期损失高达 30 % 一 40 %[ 2] , 其中由灰霉病导致的腐烂
以及蔓梢发霉一直成为蒜墓采后保鲜工作的重点3[] 。
灰葡萄抱和葱腐葡萄袍是引起蒜蔓灰霉病的主要致病
菌 , 这些病菌具有潜伏侵染的特点 。 为了抑制这些病
害 , 人们开发使用了一系列防治蒜墓灰霉病的保鲜剂
和杀菌剂 , 但是 , 一些药剂因长期使用已产生较强的
抗性 ; 同时食品安全受到人们的日益重视 , 用纯天
然 、 无毒高效的防腐保鲜剂代替化学防腐保鲜剂已成
为防治采后病害的理想选择 。
凤尾兰 (uY c a g lor ios a L )俗名剑麻 , 属于龙舌兰
科丝兰属 , 常绿灌木 , 我国长江流域各地普遍栽植 。
研究表明 , 凤尾兰提取物可防止食品败坏 , 对酵母 、
瘤胃微生物群 、 肠道菌 ig ar d i os i s 、 病毒等均有抑制作
用 4[ 一 ;e] 凤尾兰花提取液对皮肤真菌有较好的抑制作
用 l7] 。 试验研究凤尾兰叶提取物对灰葡萄抱和葱腐葡
萄抱 的抑制作用 , 以期为蒜蔓的贮藏保鲜提供新思
路 , 进一步开发新的纯天然防腐保鲜剂 。
, 材料与方法
1
.
1 材料
1
.
1
.
1 凤尾兰鲜叶 , 采自山东省泰安市祖徕镇乐园苗
圃 ; 蒜墓 , 购于泰安市南关路蔬菜批发市场 , 挑选无
病害 、 无机械损伤 、 粗细匀称的蒜蔓为实验材料。
1
.
1
.
2 供试菌种
蒜墓灰葡萄抱 (B o r尽 t i s c i n e r e a p e sr . )购自中国普
通微生物菌种保藏管理中心 ; 葱腐葡萄抱 (B ot yr ist
al i M un n) 从荃稍中分离 , 由山东农业大学植物保护
学院张修国教授鉴定 。
1
.
1
.
3 培养基 : 马铃薯培养基 (P D )A
1
.
2 实验方法
1
.
2
.
1 凤尾兰提取液对蒜墓灰葡萄抱 、 葱腐葡萄抱的
抑制作用
1
.
2
.
1
.
1 凤尾兰提取液制备
洗净晾干的凤尾兰鲜叶用组织粉碎机粉碎 , 于圆
底烧瓶中 , 以 l : 20 的料液比加人 45 % 乙醇 (v/ v) 溶液
在 7 0 ℃的恒温水浴锅中浸提 3 h , 过滤 , 旋转蒸发仪
减压浓缩后定容 , 即为浓度为 l岁m (L指 l m L提取液中
含有 1 9凤尾兰鲜叶提取物)的凤尾兰提取液 。
1
.
2
.
1
.
2 菌悬液制备
从试管内挑取一环菌 , 接种到 P D A斜面培养基
上 , 将接种的试管放人 25 ℃ 一 26 ℃恒温培养箱内培养
7 d
。 先将 10 m L无菌生理盐水倒人长菌的试管中 , 用
接种针轻轻刮动斜面 , 漩涡振荡器振荡以使抱子分
散 、 悬浮 , 再将该悬浮液四层纱布过滤于装有玻璃
珠的灭菌三角瓶中 , 滤去培养基和菌丝 , 平板计数
确定含菌量 。
1
.
2
.
1
.
3 凤尾兰提取液体外抑菌效果的测定 : 滤纸片
扩散法 l8]
取直径 5 m m 的无菌滤纸片放人各凤尾兰提取液
中浸泡 30 m in , 取出置于无菌风下吹干 。 将各供试菌
悬液取 0 . 2 m L滴到凝固好的无菌平板上 , 无菌涂布
棒涂布均匀 , 放置 l h , 用无菌镊子夹取上述含凤尾
兰提取液且已干燥的滤纸片贴在含菌平板上 , 每个
平板内等距离贴 3片 , 以提取溶剂浸泡的滤纸片作为
对照 , 提取液及对照均设 3个重复 。 置培养箱中25 ℃
一 2 6 ℃下培养36 h后 , 测量抑菌圈直径大小 , 取其平
均值作为实验结果 。
1
.
2
.
1
.
4 最低抑菌浓度(M CI )的测定 : 二倍稀释法 19
将凤尾 兰提取液用无菌蒸馏水进行倍比稀释 ,
制备浓度为 1 . 0 0 g zm L 、 0 . 5 0 0 9 /m L 、 o · 2 5 0 9 /m L 、
o一2 5 g/ m L 、 0
.
0 6 2 5 g zm L和0 . 0 3 1 3 g/ m L的稀释液 。
用无菌吸管分别吸取 2 m L稀释液加人到无菌培养皿
中 , 然后每皿倒入巧 m L一 20 m L培养基 , 充分混匀 ,
静置凝固后 , 制成含样品平板 。 在平板内加人 .0 2 m L
菌悬液 , 用无菌涂棒涂布均匀 , 置 25 ℃一26 ℃下培养
一定时间后 , 观察菌的生长情况 。 另取一相同的稀
释系列 , 不接种任何菌作为对照 , 以完全没有菌生
长 的最低提取物浓度为该提取物的最低抑菌浓度 。
每个浓度及对照均设三个重复 。
1
`
.2 2 凤尾兰提取物对蒜墓腐烂的抑制作用
1
.
.2 2
.
1 不同浓度凤尾兰提取物的配制
按 1 . 2 . 1 . 1配成浓度为 2 . 5 gl L 、 5 9 /L 、 10 g/ L和 1 5
留L的供试样品 。
1
.
.2 .2 2 供试蒜墓处理
供试蒜蔓表面用 75 %酒精消毒 , 并经 30 m in 的紫
外线照射 。
1
.
.2 .2 3 凤尾兰提取物对蒜墓腐烂的抑制作用 10 一川
(l )保护作用 : 先将蒜荃浸泡于 .2 5 、 5 、 or 留L的
凤尾兰提取物中1 m in , 晾干后分别浸人浓度为 1 x 10 7
c fu Zm L的灰葡萄抱 、 葱腐葡萄抱菌悬液中约 1 m in , 取
出晾干 , 装人普通聚乙烯袋于常温下贮藏 , 7 d后统
计发病率和腐烂指数 。 对照为只接种灰葡萄抱和葱
腐葡萄抱的蒜蔓 , 每个处理均为20 根蒜墓 , 设三个
重复 。
( 2) 治疗作用 : 先将蒜荃浸泡分别浸入灰葡萄
抱 、 葱腐葡萄抱的菌悬液中约 1 m in , 晾干后分别
浸泡于 .2 5 、 5 、 10 9几的凤尾兰提取物 1 m in , 取出
《食品工业 》20 07 年第 4期 * 通讯作者
. 基础研究 味` : 素
晾干 , 装人普通聚乙烯袋于常温下贮藏 。 7 d后统
计发病率和腐烂指数 。 对照为只接种灰葡萄抱和葱
腐葡萄抱 的蒜蔓 , 每个处理均为 20 根蒜蔓 , 设三个
重复。
1
.
3 测定指标
长菌的蒜蔓根数
;…脑、nCU门.峪,、,J罗、翻婆聋粼
发病率% 二 蒜蔓总根数
x 10 0
Ck 】 2 3
: 5
.
0 留L处理 ; 3 : 10 创L处理
* 、 一` 。 , 艺腐烂果 (腐烂级别 x 该级别根数 )腐烂指数% = 竺坚牛妾升瞿黑半奖井共奖半望鉴翌 xl OO` ” ` 一 ’ - -一 蒜蔓总根数 x 最高腐烂级别
O级 : 无长霉 ; 1级 : 长霉部分的长度小于25 %
蔓梢长度 ; 2级 : 长霉部分的长度占总 墓梢长度
的 2 5 % ~ 5 0% ; 3级 : 长霉部分的长度大于墓梢的
5 0%
。
1
.
4 数据分析
试验数据采用 SSP S l . 5进行分析 。
2 结果与分析
2
.
1 凤尾兰提取液对葱腐葡萄抱 、 蒜墓灰葡萄抱 的
抑制作用
表 1 凤尾兰提取液对两种菌的抑菌作用
图 , 凤尾兰提取物对蒜鑫灰葡萄抱侵染的保护作用
从图 1可以看 出 , 不同浓度 的凤尾兰提取物处
理均能抑制蒜蔓灰葡萄抱对蒜墓的侵染 。 对照的腐
烂指数高达4 .6 67 % , 而 .2 5 岁L 、 5 留L 、 10 留L处理的
腐烂指数分别为 2 .4 97 % 、 28 . 3 % 、 1 7 . 2 2% , 均显著
低于对照 (p < 0 . 0 5 ) : 10 9 /L的处理显著低于2 . 5 9 / L和
5 9 /L处理 (p < 0 . 0 5 )。 2 . 5 9 / L 、 5 9 /L 、 10 9 / L处理的发
病率分别为43 . 3% 、 4 0% 、 30 % , 均显著低于对照的
70 % (P 0<
.
05 )
, 但它们之间无显著差异 (P >0 . 05 )。 这说
明凤尾兰提取物可有效抑制蒜墓灰葡萄抱对蒜蔓的侵
染 , 从而对由蒜蔓灰葡萄抱引起的蒜蔓腐烂起到较好
的保护作用 。
.2 .3 2 凤尾兰提取物对蒜蔓灰葡萄抱侵染的治疗作用
提取液 抑菌圈直径 /~
凤尾兰提取液
4 5% 乙醉
葱腐葡萄抱
1 1
.
8
蒜荃灰葡萄袍
17
.
0
注 : “ 一 ” 表示无抑菌圈 。 试验中葱腐葡萄袍为 4 2 x 10 , C fo / rnL ,蒜荃灰葡萄袍为 2 . 3 x l o 7 C fu / m L o
由表 1可知 , 凤尾兰提取液对蒜墓灰葡萄抱 、 葱
腐葡萄抱抑菌圈直径分别达到 17 . 0 m m和 n 名 m ;m 表
明凤尾兰提取液对蒜蔓灰葡萄抱和葱腐葡萄抱有较明
显的抑制作用 。
.2 2 凤尾兰提取液对葱腐葡萄抱 、 蒜墓灰葡萄袍的
最低抑菌浓度 (M cI )
表2 不同凤尾兰提取液浓度对两种菌的抑菌作用
戮…自; 、 、…誊, 、
“ ;谴 ,噜~塌`一嚷一 2嚎噶噶we叠
ck 对照处理 ; l : 2 5 留L处理 ; 2 : 5 。 留L处理 : 3 : 10 9几处理
0刀3 1 3
g / n 1 L
+ 十
0
.
0 6 2 5
g八11 L
+
0 1 2 5
g / m L
0
.
2 5 0
g / m L
0
.
5 00
g / 1 l l L
1
_
0 0
g / n 1 L
示无菌生长 , “ + ” 表示有少量生长 , “ 十+’ ’ 表示
有大量生长 。 试验 中葱腐葡萄抱为 5 . 2 x l丁 C fu /m L , 蒜妥灰葡萄袍
为业兰 I Di `鱼 /mL 。
_
由表 2可知 , 凤尾兰提取液浓度大于 0 . 125 9 /m L
时 , 葱腐葡萄抱和蒜墓灰霉病菌均没有生长 ; 浓度
为 .0 0 6 2 5 9 /m L时 , 葱腐葡萄抱有少量生长 ; 浓度为
.0 03 1 3 9m/ L时 , 蒜墓灰葡萄抱有少量生长 。 由此可
见 , 凤尾兰提取液对蒜蔓灰葡萄抱和葱腐葡萄抱的
最小抑菌浓度 (M IC )分别为 0 . 0 6 2 5 g/ m L和 0 . 12 5 留m L O
.2 3 凤尾兰提取物对蒜墓腐烂的抑制作用
.2 3
.
1 尽握兰提取物对蒜蔓灰葡萄抱侵染的保护作用
图2 凤尾兰提取物对蒜落灰葡萄抱侵染的治疗作用
由图 2可知 , 凤尾兰提取物的各浓度处理对蒜
荃灰葡萄抱的侵染均有一定的抑制效果 , 2 . 5 9几 、
5 岁L 、 10 岁L处理的腐烂指数和发病率均小于对照 ,
而且随着浓度的升高 , 治疗作用越明显 。 10 9 L/ 处
理的腐烂指数和发病率显著低于 2 . 5 9几和对照处理
(P < .0 05 )
, 腐烂指数只有对照的约 l3/ , 发病率约为对
照的40 % 。 但 .2 5 留L和5 岁L处理与对照之间无显著差
异 (P > .0 05 )。 说明凤尾兰提取物对蒜荃灰葡萄抱的侵
染具有一定的治疗作用 , 以 10 叭的处理效果最好 。
.2 .3 3 凤尾兰提取物对葱腐葡萄抱侵染的保护作用
)…鬓; : 、 {…昌, ,
:{僵一倡一瓜 “ 2嵋一渭一噜粤
ck: 对照处理 : 1 2 5叭处理 : 2: 5。留 L处理 ; 3: 10 9几处理
图 3 凤尾兰提取物对葱腐葡萄抱侵染的保护作用
《食品工业 》 20 07 年第 4期
唯` :素 . 基础研究
由图 3可以看出 , 凤尾兰提取物的各浓度处理
对葱腐葡萄抱均表现出较好的抑制效果 。 2 . 5 9儿 、
5 9几的腐烂指数分别为 2 6 . 1 1% 、 2 . 2 2% , 与对照
(3 8
.
8 9 % )有显著差异 (p < 0 . 0 5 ) ; 1 0 9 / L处理的腐烂指
数为 7 . 2 % ; 低于对照的 l 5/ , 与对照有极显著差异
(P < .0 01 )
。
.2 5 9几 、 5 9L/ 处理的发病率分别为 50 % 、
4 8
.
3 3%
, 与对照 (6 5% )差异不显著 (P > 0 . 0 5 ) : 10 9 /L处
理的腐烂指数为 2 0% , 低于对照的 13/ , 与对照有极
显著差异 (P < .0 01 )。 这说明凤尾兰提取物可有效抑制
葱腐葡萄抱对蒜蔓的侵染 , 从而对由葱腐葡萄抱引起
的蒜蔓腐烂起到较好的保护作用 , 其中以 10 9L/ 的处
理效果最好。
.2 .3 4 凤尾兰提取物对葱腐葡萄抱侵染的治疗作用
李,砖浑卿臃 …hanU0、;勺-郁华必知婆
ck
: 州狱处理 : I : 2 5 g L 处理 : 上 s o g L 处理 : 3 10 罗 L 处即
图4 凤尾兰提取物对葱腐葡萄抱侵染的治疗作用
由图4可以看出 , 凤尾兰提取物的各浓度处理对
葱腐葡萄饱均有一定的治疗作用 , 且随着处理浓度
的增大 , 抑制效果增强 。 2 . 5 9几 、 5 9L/ 处理的腐烂
指数分别为 3 34 % 、 24 , 67 % , 与对照 (38 . 89 %) 有显著
差异 (p < 0 . 0 5 ) ; 10 9 /L处理的腐烂指数为 16 . 1 1% , 与
对照有极显著差异 (P < .0 01 )。 2 . 5 留L 、 5 岁L处理的发
病率分别为4 .6 67 % 、 4 0% , 与对照 (65 % )有显著差异
(P 0< .05 )
; 10 妙处理的发病率为 36 . 67 % , 与对照有极
显著差异 (P < .0 01 ) 。 说明凤尾兰提取物对葱腐葡萄抱
的侵染具有较好的治疗作用 , 其中以 10 留L的处理效
果最好 。
3 结论
凤尾兰提取液对灰葡萄抱和葱腐葡萄饱均有较
明显的抑制作用 , 对两种菌的最小抑菌浓度分别为
o
·
0 6 2 5 g/ m L和0 . 12 5 留m L 。 凤尾兰提取物对灰葡萄抱
和葱腐葡萄抱对蒜蔓的侵染具有较好的保护和治疗作
用 , .2 5 留L 、 5 留L 、 10 留L的凤尾兰提取物均能有效
抑制蒜蔓灰葡萄抱和葱腐葡萄抱的侵染 , 减少蒜蔓腐
烂 , 其中以 or 岁L的处理效果最佳 。
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秋奋研究友现卡姆果宫舍动能成分
秘兽专家研究发现 , 生长在该国亚马逊雨林地区
的奇特植物卡姆 , 具有很高的经济价值和良好的开发
前景 。
据报道 , 卡姆果实如葡萄般大小 , 外皮呈紫红
色 , 果肉呈黄色 , 果实含有丰富的生物类黄酮和其他
天然植物成分 , 包括多种维生素及人体必需的铁 、 锌 、
锰 、 碘 、 硅 、 镁 、 钾和磷等多种矿物质 。 此外 , 卡姆
果还含有丝氨酸 、 撷氨酸和白氨酸以及特有的植物营养
素 。 卡姆果还能强化免疫系统 , 帮助修复结缔组织 , 缩
短痊愈期 。
目前 , 世界上用卡姆果制成的产品有冷饮 、 酒类 、
食用醋和营养药剂等 。
《中国食品报 》 2 0 0 7 一 5 一 2 8
《食品工业 》20 07 年第 4 期