全 文 ：* 广西科技创新能力与条件建设项目“广西民族医药创新研究与产业化技术平台的建设”(编号:桂科攻 10124008 － 15);广西自然基金项
目“广西特色民族药白背叶物质基础、质量控制及活性成分药代动力学研究”(编号 2010GXNSFA013233)
＊＊ 通信作者 Tel:(0775)2827042;E－mail:jiangshoujun@ sina. com
第一作者 Tel:(0775)2827042;E－mail:915007149@ qq. com
HPLC法测定白背叶中 3 个黄酮碳苷类成分的含量*
谢巍1，杨立佼1，周伟娥1，刘泉1，刘吉成2，蒋受军1，2＊＊
(1．广西中医药大学，南宁 530001;2．广西玉林食品药品检验所，玉林 537000)
摘要 目的:建立高效液相色谱法同时测定白背叶药材中葫芦巴苷Ⅱ、异夏佛托苷、夏佛托苷 3 个黄酮碳苷类成分含量。
方法:采用 Agilent EclipseXDB－C18色谱柱(4. 6 mm × 250 mm，5 μm)，柱温 25 ℃，流动相为甲醇 － 0. 1%乙酸水溶液，梯度洗脱，
流速 1. 0 mL·min －1，检测波长 336 nm。结果:葫芦巴苷Ⅱ、异夏佛托苷、夏佛托苷 3 个成分的色谱峰均达到基线分离，其进样
量分别在 0. 026 6 ～ 5. 32、0. 024 4 ～ 4. 88、0. 024 2 ～ 4. 84 μg范围内线性关系良好(r = 0. 999 0)，平均加样回收率(n = 6)分别
为 97. 3%、100. 1%、103. 0%;不同批号的白背叶药材葫芦巴苷Ⅱ、异夏佛托苷、夏佛托的含量分别为 0. 73 ～ 7. 48、1. 25 ～ 7. 58、
1. 03 ～ 5. 89 mg·g －1。结论:本文所建立的含量测定方法经方法验证适于白背叶药材的质量检测。
关键词:白背叶;黄酮碳苷类成分;葫芦巴苷Ⅱ;异夏佛托苷;夏佛托苷;HPLC;方法验证;药材质量检测
中图分类号:Ｒ 917 文献标识码:A 文章编号:0254－1793(2015)07－1205－04
doi:10. 16155 / j. 0254－1793. 2015. 07. 13
HPLC method for simultaneous determination of
three flavonoids in Mallotus apelta*
XIE Wei1，YANG Li－jiao1，ZHOU Wei－e1，LIU Quan1，LIU Ji－cheng2，JIANG Shou－jun1，2＊＊
(1． Guangxi University of Chinese Medicine，Nanning 530001，China;2． Guangxi Yulin Institute for Food and Drug Control，Yulin 537000，China)
Abstract Objective:To establish an HPLC method for simultaneous determination of three flavone glycosides (vi-
cenin Ⅱ，isoschaftoside and schaftoside)in Mallotus apelta． Methods:HPLC was performed on an Agilent Eclipse
XDB－C18 analytical column (4. 6 mm ×250 mm，5 μm)at 25 ℃ with methanol and 0. 1% acetic acid as the mobile
phase by gradient elution，the flow rate was 1. 0 mL·min －1 and the detection wavelength was 336 nm． Ｒesults:The
baseline separation of these three components was achieved;the linear ranges of vicenin Ⅱ，isoschaftoside and
schaftoside were 0. 026 6－5. 32，0. 024 4－4. 88，and 0. 024 2－4. 84 μg，respectively (r = 0. 999 0);the average
recoveries(n = 6)were 97. 26%，100. 1，and 103. 0%，respectively． The content ranges of vicenin Ⅱ，isoschaftoside
and schaftoside were 0. 73－7. 48，1. 25－7. 58 and 1. 03－5. 89 mg·g －1 for Mallotus apelta from different batch num-
ber． Conclusion:The established method of determination can be used for quality control of Mallotus apelta．
Keywords:Mallotus apelta;flavonoids;vicenin Ⅱ;isoschaftoside;schaftoside;HPLC;methods validation;me-
dicinal materials quality testing
白背叶为大戟科野桐属植物白背叶 Mallotus
apelta (Lour．)Muell． Arg． 的干燥叶，又名白毛树、
野芙蓉、白林树、白面虎等;在我国主要分布于江苏、
安徽、江西、福建、河南、广西、海南、陕西、云南等
地［1］;具有柔肝活血、健脾化湿、收敛固脱、消炎止
血等功效;主要用于慢性肝炎、肝脾肿大、子宫脱垂、
脱肛、白带、妊娠水肿、耳炎、疖肿、跌打损伤、外伤出
血等［2］疾病;现代药理研究表明白背叶有一定的抗
菌、保肝、抗肿瘤、止血等药理作用［3－7］。经查有关文
献资料，国内外已有对白背叶中化学成分研究的报
道［8－11］。作者对白背叶的化学成分进行了研究，从
白背叶乙醇提取物的正丁醇部分分离得到了 3 个黄
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酮碳苷类成分，分别鉴定为葫芦巴苷Ⅱ、异夏佛托
苷、夏佛托苷，其中异夏佛托苷、夏佛托苷为首次从
白背叶药材中分离得到。据相关文献报道，葫芦巴苷
Ⅱ、异夏佛托苷、夏佛托苷具有较强的抗菌、保肝等作
用［12］，提示其可能为白背叶药材所具功效的活性成
分，通过测定白背叶药材中葫芦巴苷Ⅱ、异夏佛托
苷、夏佛托苷 3 种成分的含量可以更好地控制和评
价白背叶药材的内在质量。本实验建立 HPLC 同时
测定白背叶药材中主要黄酮类成分葫芦巴苷Ⅱ、异
夏佛托苷、夏佛托苷含量的方法，为建立全面合理的
白背叶药材质量控制和评价标准奠定基础。
1 仪器与试药
UltiMate 3000 高效液相色谱仪(Thermo Scientif-
ic);AG－204 电子分析天平(METTLEＲ TOLEDO);
HH－S6数显恒温水浴锅(金坛市医疗仪器厂);
Millipore Simplicity－UV超纯水器(美国密里博)。
白背叶由广西金秀圣堂制药有限公司提供，经广
西食品药品检验所韦家福副主任药师鉴定为大戟科植
物白背叶 Mallotus apelta (Lour．)Muell． Arg． 的干燥
叶，标本存放于广西食品药品检验所中药标本室。葫
芦巴苷Ⅱ、异夏佛托苷、夏佛托苷的对照品为自行从白背
叶药材中分离、精制而得，经MS、1H－NMＲ和13C－NMＲ确
定结构，HPLC峰面积归一化法测得纯度均大于98%。
水为超纯水，甲醇、乙腈(美国 Fisher公司)为
色谱纯，其余试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2. 1 混合对照品溶液的制备 精密称取 105 ℃干燥
至恒重的葫芦巴苷Ⅱ13. 3 mg、异夏佛托苷11. 2 mg、夏
佛托苷 12. 1 mg，置于 25 mL 量瓶中，加适量 70%甲
醇水溶液超声使溶解并稀释至刻度，摇匀，制成每
1 mL分别含葫芦巴苷Ⅱ0. 532 mg、异夏佛托苷 0. 488
mg和夏佛托苷 0. 484 mg的混合对照品溶液。
2. 2 供试品溶液的制备 取白背叶药材粉末(24
目)约 1. 0 g，精密称定，精密加入 70%甲醇水溶液
20 mL，称量，加热回流提取 1. 5 h，放冷，用 70%甲
醇水溶液补足减失的量，滤过，取续滤液经 0. 45 μm
微孔滤膜滤过，即得。
2. 3 色谱条件 采用 Agilent EclipseXDB－C18色谱柱
(4. 6 mm ×250 mm，5 μm)，流动相为甲醇(A)－0. 1%
乙酸水溶液(B)，梯度洗脱(0 ～10 min，20%A;10 ～50
min，20%A→80%A;50 ～ 51 min，80%A→20%A)，流
速 1. 0 mL·min －1，检测波长 336 nm，柱温 25 ℃，进样
量 10 μL。采用外标法计算含量，理论塔板数以葫芦
巴苷Ⅱ计算应不低于 5 000，异夏佛托苷与夏佛托苷的
分离度分别为 2. 01、2. 29。葫芦巴苷Ⅱ、异夏佛托苷、
夏佛托苷的检测下限分别为 0. 019、0. 210、0. 172 mg
·L －1，定量下限分别为 0. 038、0. 420、0. 344 mg·L －1。
在上述条件下，对照品及样品色谱图见图 1。
图 1 混合对照品(A)和白背叶(B)HPLC色谱图
Fig． 1 HPLC chromatograms of mixed reference substances(A)and Mallotus apelta(B)
1．葫芦巴苷Ⅱ(viceninⅡ) 2．异夏佛托苷(isoschaftoside) 3．夏佛托苷(schaftoside)
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2. 4 线性关系考察 精密吸取“2. 1”项下混合对照
品溶液(每 1 mL中含葫芦巴苷Ⅱ0. 532 mg，异夏佛托
苷 0. 488 mg，夏佛托苷 0. 484 mg)0. 5、1、2、3、5 和 10
mL，分别置 10 mL量瓶中，用甲醇定容至刻度，摇匀，
分别进样 10 μL，以测得的相应信号(峰面积)对被测
物质的量作图，得到葫芦巴苷Ⅱ、异夏佛托苷、夏佛托
苷的回归方程:
Y =10. 29X +0. 282 9 r =0. 999 0
Y =11. 17X +0. 166 1 r =0. 999 0
Y =10. 42X +0. 019 1 r =0. 999 0
线性范围分别为 0. 026 6 ～ 5. 32、0. 024 4 ～ 4. 88、
0. 024 2 ～4. 84 μg。
2. 5 精密度试验 取白背叶药材(批号 011198)粉
末约 1. 0 g，精密称定，按“2. 2”项下方法制备供试品
溶液，连续测定 6 次，记录峰面积。结果葫芦巴苷Ⅱ、
异夏佛托苷、夏佛托苷峰面积的 ＲSD分别为 0. 39%、
0. 05%、0. 04%;再取同一份白背叶供试品溶液，分别
于溶液制备后第 1、2、3、4、5、6 d 同法进样，记录峰面
积。结果葫芦巴苷Ⅱ、异夏佛托苷、夏佛托苷峰面积的
ＲSD分别为 0. 59%、0. 18%、0. 19%，结果表明仪器在
日内和日间精密度良好。
2. 6 稳定性试验 取同一份白背叶供试品溶液，分
别于溶液制备后 0、2、4、12、24 h 进样测定，记录各成
分峰面积的 ＲSD。结果葫芦巴苷Ⅱ、异夏佛托苷、夏佛
托苷峰面积的 ＲSD分别为 0. 29%、0. 09%、0. 12%(n
=5)，表明 24 h内供试品溶液稳定性良好。
2. 7 重复性试验 取同一批白背叶药材(批号
011198)粉末 6份，每份约 1. 0 g，精密称定，按“2. 2”
项下方法制备供试品溶液，分别进样10 μL，记录峰面
积，并计算含量。葫芦巴苷Ⅱ的平均含量为 3. 30 mg·
g －1，ＲSD为 1. 8%;异夏佛托苷的平均含量为 4. 07 mg
·g －1，ＲSD 为 0. 93%;夏佛托苷的平均含量为 3. 24
mg·g －1，ＲSD 为 1. 6%。结果表明该方法重现性良
好。
2. 8 加样回收率试验 精密称葫芦巴苷Ⅱ对照品
16. 5 mg，异夏佛托苷对照品 20. 23 mg，夏佛托苷对照
品 16. 2 mg，置 200 mL量瓶中，加适量甲醇超声使溶
解，并稀释至刻度，摇匀，即得混合对照品储备液;精
密称定已测定含量(每 1 g 中含葫芦巴苷Ⅱ3. 30 mg，
异夏佛托苷 4. 07 mg，夏佛托苷 3. 24 mg)的多白背叶
药材粉末 6 份，每份约 0. 5 g，精密称定，分别精密加
入上述混合对照品储备液 20 mL，按“2. 2”项下方法
制备供试溶液，分别进样10 μL，记录葫芦巴苷Ⅱ、异夏
佛托苷、夏佛托苷的峰面积，计算它们的量，求得回收
率。结果样品中葫芦巴苷Ⅱ、异夏佛托苷、夏佛托苷平
均回收率(n = 6)分别为 97. 3%、100. 1%、103. 0%，
ＲSD分别为 1. 9%、1. 7%、1. 3%。
2. 9 样品含量测定 取 6批不同批号的白背叶药材
粉末，每份约 1. 0 g，精密称定，按“2. 2”项下方法制备
供试品溶液，分别进样 10 μL 进行测定，记录葫芦巴
苷Ⅱ、异夏佛托苷、夏佛托苷的峰面积，并计算含量，结
果见表 1。
表 1 白背叶药材中 3个黄酮碳苷成分的
含量测定结果(mg·g －1，n =3)
Tab． 1 Determination of three flavonoid glycosides
in Mallotus apelta
批号
(batches)
葫芦巴苷Ⅱ
(viceninⅡ)
异夏佛托苷
(isoschaftoside)
夏佛托苷
(schaftoside)
011987 1. 89 1. 42 1. 13
011991 1. 85 1. 25 1. 03
011993 7. 48 7. 58 5. 89
011995 5. 20 5. 58 4. 41
011996 0. 73 1. 42 1. 08
011998 3. 30 4. 07 3. 24
3 讨论
3. 1 供试品溶液制备方法的选择 本研究优选了不
同提取条件制备供试品溶液，采用单因素变量法，考
察了不同提取方法(超声提取、回流提取)、提取溶剂
(甲醇、乙醇和 70%甲醇水溶液)、提取时间(30、60、
90 min)、溶剂用量(10、20、30 mL)和药材粉碎度(10、
24、50目)对白背叶药材中 3 个黄酮碳苷类成分提取
率的影响。结果表明白背叶药材粉末(24 目)1. 0 g，
加 70%甲醇 20 mL，加热回流提取 1. 5 h，即能将 3 个
黄酮碳苷成分提取完全。
3. 2 色谱条件的选择 葫芦巴苷Ⅱ和异夏佛托苷、夏
佛托苷的极性相差较大，曾用甲醇 －水(24∶ 76)等度
洗脱［11］，发现异夏佛托苷、夏佛托苷色谱峰的保留时
间较长，改用梯度洗脱条件，各成分出峰时间比较适
中，且峰分离度较好，因此选择甲醇 － 0. 1%乙酸水溶
液作流动相，进行梯度洗脱。
3. 3 小结 本实验建立了 HPLC同时测定白背叶药
材中主要黄酮类成分葫芦巴苷Ⅱ、异夏佛托苷、夏佛托
苷含量的方法，并测定了 6 批不同来源白背叶药材
中葫芦巴苷Ⅱ、异夏佛托苷、夏佛托苷 3 个黄酮碳
苷类成分的含量。结果表明:不同来源白背叶药
材中 3 个黄酮碳苷类成分的含量有一定差异性。
提示采用多指标定量方法，能更好地控制白背叶
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药材的内在指标。
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(本文于 2014 年 10 月 15 日收到)
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