全 文 ：第 4 卷 第 5 期
2008 年 5 月
亚 太 传 统 医 药
Asia-Pacific T r aditional M edicine
Vo l.4 No.5
May 2008
收稿日期:2008-03-25
基金项目:广西高校人才小高地建设创新团队资助计划
作者简介:陈勇(1961 ～),男 , 广西中医学院教授 , 从事中药质量分析教学与科研工作。
复方金刚痛风颗粒中菝葜的鉴别与质量研究
陈　勇 ,王　勤 ,李　兵 ,李　立 ,潘丽娜 ,黄　颖
(广西中医学院 药学院 ,广西 南宁 530001)
摘　要:目的:建立复方金刚痛风颗粒中菝葜的 T LC 鉴别方法和含量测定方法。方法:以薯蓣皂苷元为对照品 ,
采用氯仿-乙酸乙酯(10∶1)为展开剂 , 10%硫酸乙醇溶液为显色剂 ,对复方金刚痛风颗粒中的菝葜进行了 TLC 鉴
别;采用大连依利特 C18色谱柱(Hype rsil ODS , 5μm , 4.6×250mm), 乙腈-水(90∶10)为流动相 , 流速为 1m L.
min -1 , 203nm 为检测波长 ,柱温为 35℃, 测定了复方金刚痛风颗粒中薯蓣皂苷元的含量。结果:薯蓣皂苷元斑点
清晰 ,阴性对照无干扰。薯蓣皂苷元线性范围为 0.212μg ～ 1.908μg (r=0.9999), 平均回收率为 100.50%, RSD
为 1.49%。方法灵敏度高 、结果准确 、重现性好。结论:所建立的方法简便可行 、重现性好 , 为复方金刚痛风颗粒
质量控制提供了有效途径。
关键词:复方金刚痛风颗粒;菝葜;薄层色谱法;高效液相色谱法
中图分类号:R284.1　　　　文献标识码:A　　　　文章编号:1673-2197(2008)05-043-03
　　复方金刚痛风颗粒是由菝葜 、两面针 、山银花等中药制
成 ,具有清热解毒 、活血化瘀 、养筋通络 、散寒止痛之功效 。
用于高尿酸血症 、急性关节炎反复发作 、痛风石形成 、关节
畸形 、肾实质性病变和肾尿酸结石等症 。为控制其质量 ,本
篇对薯蓣皂苷元定性定量方法进行了研究 ,对制剂中的菝
葜进行了薄层色谱鉴别 。采用 HPLC 法测定制剂中薯蓣
皂苷元的含量 ,可作为该制剂的质量控制方法。
1　材料 、仪器与试剂
1.1　材料
菝葜药材 、绵萆薢药材均为市售品经我院蔡毅教授鉴
定为百合科植物菝葜 Smila x china L .的干燥根茎和薯蓣
科植物绵萆薢Diosorea septemLoba Thunb .的干燥根茎;薯
蓣皂苷元对照品由中国药品生物制品检定所提供 ,供含量
测定用 ,批号为 1539-200001;复方金刚痛风颗粒(广西中医
学院药学院药剂教研室自制)。
1.2　仪器与试剂
A gilent1100高效液相色谱仪(美国安捷伦科技公司);
A gilentVWD紫外检测器;A gilent 色谱化学工作站;A gi-
lentA LS自动进样器;C18柱(大连依利特分析仪器有限公
司 ,Hypersil ODS , 5μm , 4.6 ×250mm);BP211D电子分析
天平(德国赛多利斯);Millipore simplicity-185 超纯水器
(美国密理博公司);SB3200-T(上海必能信超声有限公
司);LG16-W高速离心机(北京医用离心机厂);939薄层制
板器(重庆南岸贝尔德仪器技术厂)。乙腈为色谱纯 ,其他
试剂均为分析纯 。
2　菝葜 、绵粉薢的定性鉴别
取本品颗粒 5g ,加乙醇 50mL ,超声处理 30min ,滤过 ,
滤液加盐酸 5mL ,加热回流 2h ,放冷 ,回收乙醇至无醇味 ,
用石油醚(60～ 90℃)振摇提取 4次(35 , 35 , 25 , 25mL),合
并提取液 ,蒸干 ,残渣加氯仿 2mL 使溶解 ,作为供试品溶
液。另取菝葜对照药材和绵萆薢对照药材各 1g 、缺菝葜阴
性样品 、缺绵萆薢阴性样品 、缺菝葜与缺绵萆薢阴性样品
(双阴性)各 2g ,同法制成对照药材溶液 、缺菝葜阴性溶液 、
缺绵萆薢阴性溶液及缺菝葜与缺绵萆薢双阴性溶液。另取
薯蓣皂苷元对照品 ,加甲醇制成每 1mL 含 1mg的溶液 ,作
为对照品溶液。照薄层色谱法(2005 年版药典附录 V IB)
试验 ,吸取供试品溶液 、对照药材溶液 、对照品溶液 、缺菝葜
阴性溶液 、缺绵萆薢阴性溶液及缺菝葜与缺绵萆薢的双阴
性溶液各 3μl ,分别点于同一硅胶G薄层板上 ,以氯仿-乙酸
乙酯(10∶1)为展开剂 ,展开 ,取出 ,晾干 ,喷以 10%硫酸乙
醇溶液 ,在 105℃加热至斑点显色清晰 。供试品色谱中 ,在
与对照药材色谱相应的位置上 ,显相同颜色的斑点;在与对
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照品相应的位置上 ,显相同颜色的斑点;而在缺菝葜与缺绵
萆薢的双阴性对照品色谱处无此斑点 ,结果见图 1。
1～ 2供试品;3绵萆薢对照药材;4菝葜对照药材;5缺菝葜药
材阴性对照品;6缺绵萆薢药材阴性对照品;7缺菝葜与缺绵
萆薢双阴性对照品;8薯蓣皂苷元对照品.
图 1　菝葜 、绵萆薢薄层鉴别色谱图　
3　含量测定[ 1]
3.1　色谱条件
色谱柱:C18柱(大连依利特分析仪器有限公司 , 5μm ,
4.6×250mm);流动相:乙腈-水(90∶10);流速:1.0mL/
min;检测波长:203nm ;柱温:35℃;进样量:10μl理论塔板
数按薯蓣皂苷元峰计算应不少于 8000。
3.2　对照品溶液制备
精密称取薯蓣皂苷元对照品适量 ,加乙腈制成0.108
mg/mL的薯蓣皂苷元对照品溶液 。
3.3　供试品溶液的制备
取本品颗粒适量 ,研细 ,取约 5g ,精密称定 ,置圆底烧
瓶中 ,加乙醇 80mL ,加热回流提取 2h ,滤过 ,加盐酸 10mL ,
加热回流水解 2h ,回收溶剂至约 50mL ,用石油醚振摇提取
4次(35 , 35 , 25 , 25mL),合并提取液 ,水浴蒸干 ,残渣加乙
腈溶解并移入 2mL量瓶中 ,加乙腈至刻度 ,摇匀 ,作为供试
品溶液 。同法制成缺菝葜与缺绵萆薢双阴性溶液。
3.4　方法学考察
3.4.1　标准曲线制备
精密称取薯蓣皂苷元对照品 10.60mg ,加乙腈使溶解 ,
定容至 100mL量瓶中 ,再精密量取此溶液 2、6、10 、14 、18
(mL),分别置 25mL 量瓶中 ,加乙腈至刻度 ,摇匀 ,即得 。
分别精密吸取上述溶液各 10μl ,注入液相色谱仪 ,测定 ,以
薯蓣皂苷元峰面积(A)为纵坐标 ,薯蓣皂苷元进样量 (μg)
为横坐标做回归计算得回归方程 Y=6.1152C-2.8888 , r
=0.9999 ,结果表明薯蓣皂苷元对照品进样量在 0.212 ～
1.908μg之间与峰面积值呈现良好的线性关系 ,标准曲线
见图 2。
3.4.2　精密度试验
图 2　薯蓣皂苷元工作曲线图　
精密吸取薯蓣皂苷元对照品溶液(0.108mg/mL)10μl ,
连续进样 6 次 ,分别测其峰面积值 ,其平均峰面积值为
651.54 ,RSD为 1.37%,表明仪器精密度良好 ,结果见表 1 。
表 1　精密度试验结果
进样次数 峰面积(A) 平均峰面积(A) RSD(%)
1
2
3
4
5
6
654.99
644.14
664.19
653.61
638.69
653.61
651.54 1.37
3.4.3　稳定性试验
取同一供试品溶液 ,每隔 4h分别进样 10μl ,测定薯蓣
皂苷元峰面积值 ,计算 RSD=0.31%(n =6),表明供试品
溶液在 24h内保持稳定 ,结果见表 2。
表 2　稳定性试验结果
时间(小时) 峰面积(A) 平均峰面积(A) RSD(%)
0
4
8
12
16
24
638.84
640.21
639.56
635.72
635.48
637.21
637.21 0.31
3.4.4　重复性试验
精密称取同一批号供试品各 6份 ,按样品测定项下方
法进行测定 ,结果见表 3。
表 3　重复性试验结果
序号 含量(mg/g) 平均值 RSD(%)
1
2
3
4
5
6
0.04659
0.04555
0.04436
0.04299
0.04538
0.04589
0.04513 2.82
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3.4.5　加样回收率试验
取已测薯蓣皂苷元含量的供试品干燥粗粉约 2.5g ,精
密称定 ,分别精密加入一定量的对照品溶液 ,按供试品溶液
制备方法制备待测溶液 ,按上述色谱条件测定 ,计算加样回
收率 ,结果见表 4 。
表 4　加样回收率试验结果
序号 原有量(mg)
加入量
(mg)
测得量
(mg)
回收率
(%)
χ
(%)
RSD
(%)
1
2
3
4
5
6
0.1130
0.1148
0.1147
0.1149
0.1131
0.1128
0.11
0.11
0.11
0.11
0.11
0.11
0.2230
0.2248
0.2247
0.2249
0.2231
0.2228
102.31
99.95
99.28
101.88
98.61
100.96
100.50 1.49
3.5　样品测定
分别取不同批号的复方金刚痛风颗粒供试品干燥粉末
约 5g ,精密称定 ,按供试品溶液制备方法制备 ,注入高效液
相色谱仪 ,测定峰面积值 ,以外标一点法计算薯蓣皂苷元的
含量 ,结果见表 5 。
表 5　复方金刚痛风颗粒中薯蓣皂苷元含量(n=3)
批号 含量(%) RSD(%)
20060103 0.04513 0.32
20060104 0.04540
20060105 0.04519
图 3　薯蓣皂苷元对照品 HPLC色谱图
a为薯蓣皂苷元　
图 4　复方金刚痛风颗粒供试品 HPLC色谱图
a为薯蓣皂苷元　
图 5　缺菝葜与缺绵萆薢双阴性供试品 HPLC色谱图　
4　小结与讨论
(1)在菝葜 、绵萆薢的薄层鉴别及薯蓣皂苷元的 HPLC
含量测定中 ,因为菝葜 、绵萆薢中均含有薯蓣皂苷元 ,所以
采用缺菝葜与绵萆薢的双阴性供试品作对照 。
(2)在薯蓣皂苷元的 HP LC 含量测定中 ,在制备供试
品溶液时 ,分别用氯仿 、石油醚以及醋酸乙酯进行萃取 ,结
果表明以石油醚(35 ,35 ,25 ,25mL)直接萃取 4次的效果最
优。本品薯蓣皂苷元的含量测定在供试品溶液制备时需进
行水解 ,然后用石油醚分次萃取 ,这是测定样品中薯蓣皂苷
元含量最佳的方法 ,但处理过程中的步骤较多 ,会使方法的
重复性变差 。
参考文献:
[ 1] 　国家药典委员会.中国药典(2005 年版　一部).北京:
化学工业出版社 , 2005:216 , 116 ～ 117 , 21～ 22.
(责任编辑:陈涌涛)
Study on Identification and Quality for Smilax China L of
Compound Gout Granules
CHEN Yong ,WANG Qin , LI Bing ,LI LI , PAN Li-na , HUANG Ying
Abstract:Objective:To e stablish TLC identification method and H PLC assay method for Smilax China L of compound gout
gr anule s.Methods:Smilax china L w ere identified by TLC respectively , using dio sg enin as r efe rence substances , and (10∶1)as
mobile phase s.Dio sgenin w ere determined by HPLC using the H per sil ODS rever sed-phase colum n o f C18(4.6×250mm , 5μm),
the mobile phase was a combination o f acetonitrile and water(90∶10)a t the flow ra te of 1.0m L·min-1 , and the eluate was moni-
to red with UV absorption at 203nm , retention at 35 deg rees.Result:The T LC chromatog rams o f dio sg enin w ere of clearness ,
good separa tion , and no inte rference.The diosgenin contents in Com pound gout g ranules by HPLC , in the linear r ange of 0.212μg
to 1.908μg(r=0.9999)and the recove ries o f 100.50%(RSD=1.49%).Conclusion:The established methods are simple , feasible
and reproducible.This study pro vide a method for the quality contro l of compound gout g ranules
Key words:Compound gout g ranules;Smilax China L;TLC;HPLC
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