全 文 ：实验与检验医学 2008年2月 第26卷 第1期
·实验研究·
菝葜为百合科菝葜属植物(SimlaxchinaL)根状
茎,能消肿解毒,祛风利湿,有抗炎镇痛与抗肿瘤作
用[1～3]。菝葜中富含有菝葜皂甙B与少量的菝葜皂甙
A、C,具有抗肿瘤活性。上世纪中医常用菝葜治疗胃
癌、食管癌、直肠癌、乳腺癌、鼻咽癌等。其中以治胃
癌、食管癌效果较好[4]。本实验研究菝葜液体内、外
的抗肿瘤(U14)作用。并同时探讨菝葜辅以红色纳米
硒[5]后对肿瘤的抑制作用。
1材料与方法
1.1材料
1.1.1实验仪器 HH-4智能数显恒温水浴锅、
PH140A型培养箱/干燥箱、手提压力式蒸汽灭菌器、
LEICARM2235型切片机、YT-6C型生物组织摊烤
片机、OLYMPUS-BX-41型显微镜、AB104-N型电
子分析天平、海尔MA-2270EGC型微波炉等。
1.1.2实验动物 昆明杂交小白鼠,雌性58只,体
重18～20g,由江西中医院实验动物中心提供。
1.1.3实验药材及成分提取 菝葜由江西中医院
植物鉴定教研室鉴定。
取菝葜粗粉 300g,置 1000ml圆底烧瓶中,用
95%乙醇于水浴上加热回流提取2次,每次1.5h,过
滤,合并滤液,回收乙醇至浸膏状,即得菝葜总提物
(约16.89g)。
1.1.4菝葜液与菝葜纳米硒的配制 取菝葜浸膏
14.02g,用蒸馏水将其配成 200ml的悬浮液(即相当
于1.245g生药/ml);另取菝葜浸膏0.5g,加入0.2g红
色纳米硒配成400ml的悬浮液 (红色纳米硒浓度约
0.5mg/ml, 菝葜浓度1.25mg/ml,约合0.022g生药/
ml)。
1.1.5U14瘤株 从上海科学院药物研究所引进,
由江西中医院病理教研室定期传代保存。
1.2实验方法
1.2.1体内实验
1.2.1.1动物分组 取雌性小白鼠50只, 随机分
成5组,分别为生理盐水组、菝葜纳米硒组、环磷酰
胺组、菝葜液组、红色纳米硒组,每组 10只,分别对
其称重、标号。
1.2.1.2荷瘤小鼠的接种 取接种第7天的U14瘤
小鼠腹水,以无菌生理盐水稀释,调整细胞数约 1×
107/ml,在每只小鼠右前肢皮下注射0.2ml瘤液,制
成实体型荷瘤小鼠模型。
1.2.1.3动物给药 对分好组并接种了U14瘤体的
小鼠于第二天开始给药,生理盐水组,以 0.9%氯化
钠(0.2ml/只/天)灌胃;菝葜纳米硒组,以 0.5mg/ml菝
葜纳米硒(0.2ml/只/天)灌胃;环磷酰胺组,以3mg/ml
环磷酰胺(0.2ml/只/天)灌胃;菝葜液组,以 70.10mg/
ml菝葜液 (0.2ml/只/天)灌胃;红色纳米硒组,以
0.5mg/ml红色纳米硒(0.2ml/只/天)灌胃,连续定时
给药10天。
1.2.1.4动物取材 从给药第1天开始计算,第5
天称重一次并于第 10天对小鼠进行称重并拉椎处
死,解剖剥离瘤体,称重并量体积,然后按Ir=(1-T/C)
×100%计算其抑瘤率(T:给药组的平均瘤体重量,C:
对照组的平均瘤体重量),并同时摘取小鼠的心、脾
脏、胸腺、肝、肾(称取脾、胸腺的重量)。
1.2.1.5病理切片 将瘤组织印片,姬-瑞染色,初
步观察瘤细胞变化;其它各组织以10%福尔马林溶
液固定,石蜡包埋,制片,HE染色,光镜观察瘤组织
结构改变。
2.2体外实验 无菌条件下,将 U14瘤液用 PBS
菝葜与菝葜纳米硒体内、外抗U14瘤活性的实验研究
周志愉 1 黄越燕 2 陈水福 3 邬秋萍 1 肖 纯 1
中图分类号R28,R979.1 文献标识码A 文章编号1674-1129(2008)01-0043-03
作者单位:330006 1、江西中医学院;2、浙江嘉兴学院医学
院;3、南昌大学
[摘要]目的 探讨菝葜及其新配方(菝葜皂甙与红色纳米硒)体内、外抗肿瘤作用。 方法 小鼠体内
U14造模,经灌胃给药观察菝葜与菝葜纳米硒对小鼠体内 U14瘤体生长的抑制作用;体外实验用美兰法观
察菝葜与菝葜纳米硒对U14瘤细胞的抑制作用。 结果 菝葜与菝葜纳米硒在体外实验中对 U14瘤细胞都
有明显的抑制作用;菝葜液对小鼠体内 U14瘤体的生长有明显的抑制作用。 结论 菝葜与菝葜纳米硒的
体内、外实验均有一定的抗肿瘤活性。
[关键词]菝葜;菝葜纳米硒;抗肿瘤作用
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Experimental&LabMed.February2008,Vol26,No1
1000r/min离心 5min,去其上清液,重复 3次,再加
入PIMP-1640完全培养液吹打成细胞县液,调整细
胞数为 1×107/ml,吸取 0.5ml装入培养瓶,每组三
个,在对照组加入0.2ml生理盐水,其它各组分别加
入0.2ml药物(pH=7.4),分组及药物浓度与体内实验
相同,放入5%CO237℃培养箱中培养,分别在给药
1h、6h、24h后用美兰法镜下观察并计算瘤细胞的死
C数/总C数(即抑瘤率)。
2结果与分析
2.1体内抑瘤实验结果
菝葜液组的瘤重与对照组相比有较明显减轻
(P<0.05),抑瘤率为30.61%,也明显高于对照组。另
外,给药后小鼠的胸腺与对照组相比均有减轻,菝葜
纳米硒组脾脏重量与对照组相比有较明显减轻 (P<
0.01),差异极其显著。红色纳米硒组的瘤重明显小
于对照组(P<0.05),,见表1。
表1 菝葜与菝葜纳米硒对U14荷瘤小鼠的作用(x±s)
与对照组相比较:★P<0.05★★P<0.01
组别 n 瘤重(g) 瘤体积(三径之和)(cm) 胸腺重(mg) 脾脏重(mg) 抑瘤率(%)
生理盐水组
菝葜纳米硒
环磷酰胺组
菝葜液组
红色纳米硒组
10
10
10
10
9
1.96±0.61
1.66±0.42
0.67±0.20★★
1.36±0.32★
1.28±0.53★
4.02±0.55
3.89±0.55
2.37±0.62★★
3.19±0.42
3.83±0.78
82±30.8
61±21.7
31±16.6★★
65±26.5
62±27.9★
164±41
109±34★★
76±25★★
214±133
287±117
0
15.31
65.82
30.61
39.00
2.2体外抑瘤实验结果
菝葜与菝葜纳米硒在给药6h后,对U14瘤细胞
的抑制作用与对照组相比更明显,最大抑瘤率可达
98.78%。红色纳米硒组与对照组相比,在给药 1h
后,其抑瘤率就存在显著性差异,可高达59.79%。而
且红色纳米硒与菝葜纳米硒对U14瘤细胞的抑制作
用与菝葜液组相比较更迅速。见表2。
2.3病理学观察
生理盐水组瘤细胞生长活跃,可见核分裂像;菝
葜纳米硒组瘤细胞生长明显受抑,可见核溶解消失;
环磷酰胺组瘤细胞变性肿胀,核结构不清;菝葜液组
成片的瘤细胞核消失。
3讨论
肿瘤是当今世界威胁人类生命的一大疾病,其
死亡率仅次于心血管疾病而位居第二位。因此,寻
找抗肿瘤的新药是目前众多研究者的共同期望。近
年来,一些研究表明红色纳米硒有一定的抗肿瘤作
用,菝葜液也具有抗肿瘤活性。本研究(下转第 86页)
表2 红色纳米硒对U14荷瘤小鼠的作用(x±s)
与对照组相比较:★P<0.05 ★★P<0.01
组别
抑瘤率(%)
1h 6h 24h
生理盐水组
菝葜纳米硒
环磷酰胺组
菝葜液组
红色纳米硒组
4.51±1.86
5.16±3.30
5.45±2.13
5.58±0.66
56.55±3.24
7.52±2.47
82.04±2.56
36.26±3.62
66.58±3.49
89.30±10.78
82.79±7.22
94.79±1.29
96.96±1.33
98.08±0.70
97.45±1.35
图1 生理盐水组(W-G400倍)
瘤细胞生长活跃,可见核分裂像“↑”
↑
图2 菝葜纳米硒组(W-G400倍)
瘤细胞生长明显受抑,可见核溶解消失“↑”
图3 环磷酰胺组(W-G400倍)
瘤细胞变性肿胀,核结构不清“↑”
图4 菝葜液组(W-G400倍)
成片的瘤细胞核消失“↑”
↑
↑
→
→
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(上接第 44页)是采用菝葜与红色纳米硒联合应用,观
察其对体内、外U14瘤细胞的生长的抑制作用。我们
在本实验中观察到,单纯应用菝葜液或红色纳米硒
时,无论在体内实验还是体外实验中对U14瘤细胞
的生长都有明显的抑制作用,而菝葜纳米硒在体外
实验的过程中对U14瘤细胞生长有比较明显的抑制
作用,而且红色纳米硒与菝葜纳米硒对U14瘤细胞
的抑制作用比菝葜液更迅速。菝葜纳米硒对小鼠体
内U14瘤细胞的生长虽有一定的抑制作用,但与对
照组比较无显著性差异。我们认为,在体内实验过
程中,本次菝葜纳米硒中菝葜的浓度太低,未达到有
效药物浓度,因而效果不明显,如增大菝葜的浓度,
那么其抗肿瘤作用可能比单纯菝葜液或单纯红色纳
米硒的效果更好。其作用及详细机理有待进一步深
入研究。
参 考 文 献
[1]杜德极,石小枫,冉长清,等.复方菝葜抗炎、抗肿瘤及毒性研究[J].
中成药,1989,11(12):29.
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2000,20(9):544.
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[4]巨 勇,杜 枚,贾忠建,等.防己叶菝葜化学成分研究[J].中国中药杂
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[5]张颈松,高学云,张立德,等.纳米红色元素硒的护肝、抑瘤和免疫调
节作用[J].营养学报,2001,23(1):32～35.
心理行为异常,学习注意力下降,谭美珍等[3]报道儿童多动症
的发生与体内血铅升高有关。
本文的检测结果发现,我地区儿童缺锌居第一位,占
32%,其次为缺钙,占 29.6%,缺铁占 17.5%,略低于重庆市儿
童微量元素调查水平[4]。本调查还发现,随着年龄增大,缺锌、
缺铁下降,缺钙上升。尽管生活水平日益提高,有益微量元素
的缺乏仍普遍存在,有的儿童同时有 2种或 3种微量元素缺
乏,因此从婴幼儿开始,就要保证合理膳食,多吃含铁、锌、钙
高的食物,如海带、紫菜、羊肝、牛肝、瘦猪肉等富含微量元素
铁,乳品、动物肉类、海产品、菠菜等富含微量元素锌,牛奶、
蛋类、骨汤类等富含微量元素钙。
表 3的研究结果可以看出,母乳喂养婴儿的微量元素异
常率普遍低于人工喂养和混合喂养,是由于母乳中的微量元
素,婴儿容易吸收,为了预防和纠正婴儿微量元素异常,要大
力提倡母乳喂养。
本文的检测结果发现,我地区儿童铅高占13.1%,低于河
北省保定市儿童的血铅水平[5],儿童铅超标主要表现为Ⅱ级
为主,这点与文献报道中提到的儿童血铅水平异常 90%以上
表现为轻中度血铅升高[6]相一致,且随着年龄增大,铅高比率
升高。在倡导零血铅的今天,这个问题应引起我们的重视,
随着儿童的成长,活动范围逐渐扩大,接触外界铅污染的机
会增加,导致血铅升高几率增大,要降低血铅含量,关键要加
强环境保护,降低环境中铅尘浓度。不要让儿童玩含铅的油
漆玩具,同时要加强食谱的合理搭配。有关矿物质和微量元
素与铅的关系的研究中发现,膳食营养素中锌、钙缺乏时,出
现铅中毒的概率明显增加[7],饮食中钙含量增加,则可通过竞
争钙结合蛋白而抑制铅在肠道中的吸收,锌能减少铅在人体
中的蓄积和毒性作用,纤维素和维生素 B等对促进组织中铅
的排出也有一定的作用。
儿童健康水平关系到我国人口素质,关系到中华民族的
未来,通过本地区 6种微量元素水平的调查分析,建议要大
力宣传普及科学育儿知识,各年龄阶段都要做到膳食合理,
营养均衡,政府环保部门应重视铅的污染及其危害,并采取
相应的措施,保证市民有一个不受污染的良好环境。医生应
把微量元素检查列入儿童的常规体检检查,以便了解儿童营
养素的状况,为指导和纠正营养素的缺乏提供科学依据,保
障儿童的身心健康,减少疾病的发生。
参 考 文 献
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CDC,UnitedstatesDeptofHealthandHumanServices,1991,1.
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探讨[J].中国妇幼保健,2006,21(3):358～359.
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[7]许培斌,郭洪新,王 梅,等.儿童血钙铁锌含量变化与铅中毒关系
探讨[J].微量元素与健康研究,2006,23(3):12～13.
表4 0～6岁儿童血铅分布情况
年龄组 检测人数
Ⅰ级血铅水平 Ⅱ血铅水平 Ⅲ血铅水平 Ⅳ血铅水平 Ⅴ血铅水平
人数 百分率(%) 人数 百分率(%) 人数 百分率(%) 人数 百分率(%) 人数 百分率(%)
0～12月
1～3岁
4～6岁
375
408
397
253
356
379
67.5
87.3
95.5
30
40
48
8.0
9.8
12.1
5
10
14
1.3
2.5
3.5
1
2
4
0.3
0.5
1.0
0
0
0
0
0
0
合计 1180 988 83.7 118 10 29 2.5 7 0.6 0 0
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