全 文 ：收稿日期: 2003- 11- 26
作者简介:马晓彤( 1970- ) ,女,辽宁葫芦岛人,工程师,学士,研究方向:中药质量标准。
薄层扫描法测定清热止泻散中菝葜皂甙元含量
马晓彤1,李 强2
( 11 沈阳卓越和发医药有限公司, 辽宁 沈阳 110002; 21 辽宁广通医药有限公司 ,辽宁 沈阳 110001)
关键词:清热止泻散; 菝葜皂甙元;薄层扫描
中图分类号: R28411 文献标识码: B 文章编号: 1000 - 1719( 2004) 02 -0158 - 01
清热止泻散由黄连、知母、玄参等十余味中药经
提取加工制成, 具有清热止泻之功效, 为确保其疗
效,本文采用薄层扫描法测定组方中知母中菝葜皂
甙元含量,经方法学考察,方法的线性范围、精密度、
稳定性、重复性、回收率均符合有关规定, 为该制剂
质量分析建立了可靠的质量控制方法。
1 仪器与试剂
岛津 CS - 930 薄层扫描仪, CQ - 250超声波清
洗器; 菝葜皂甙元对照品由中国药品生物制品鉴定
所提供,所用试剂苯、乙醇、醋酸乙酯均为分析纯, 硅
胶G( 10~ 40Lm)由青岛海洋集团生产。
2 方法与结果
211 层析与色谱条件 薄层板, 01 2%羧甲基纤维
素钠溶液为粘合剂铺制的硅胶 G 板, 板厚 01 3mm。
在105e 活化 40min。展开剂: 苯 -丙酮( 9B1) , 上行
展开。显色剂: 8e 香草醛无水乙醇溶液 - 70%硫酸
乙醇溶液( 015B5) ,在 105 e 烘至斑点清晰。
反射式锯齿扫描,散射参数 Sx= 3,测定波长KS
= 445nm,KS= 600nm,灵敏中度,使用背景校正功能。
212 线性范围考察 精密称取菝葜皂甙元对照品
101 70mg,置 10ml量瓶中,加苯溶解并定容至刻度。
精密吸取对照液 110、210、410、610、810与 101 0Ll, 分
别点样于同一硅胶G 薄层板上,以前述色谱条件展
开,显色、测定, 以峰面积与点样量作图, 经线性回
归,回归方程: Y= 86958X - 4796 C= 11002。菝葜
皂甙元点样量在 2~ 10Lg范围内线性范围良好。
213 供试品溶液制备 取样品 5袋,研细, 取粉末
1g,精密称定, 加乙醇 30ml,超声处理 20min,放冷, 滤
过,滤液水浴蒸干,残渣加水 20ml溶解,加盐酸 2ml,
沸水浴回流提取 2h,放冷, 转移至分液漏斗中,加苯
30、20ml提取, 合并提取液, 回收苯至干, 残渣加苯
适量溶解,转移至 5ml量瓶中, 加苯稀释至刻度、摇
匀。
21 4 稳定性试验考察 精密吸取供试品溶液 10Ll,
点样于硅胶 G 薄层板上, 按前述色谱条件展开, 取
出,显色,封板,每间隔 015h测定 1次, 结果提示,显
色后 2h内测定, 待测组分色谱峰面积未有明显改
变, RSD为 0178%。
215 样品含量测定 取不同批号样品 5袋, 倾出容
物, 研细,取粉末 1g,精密称定, 按供试品溶液制备方
法制成供试液, 另精密称取菝葜皂甙元对照品适量,
加苯制成每1Ll含 015mg 的溶液,制成对照液。精密
吸取供试液5Ll,供试品溶液2Ll与 4Ll,分别交叉点样
于同一硅胶 G薄层板上,以苯 -丙酮( 9B1)为展开剂
展开,取出、晾干, 喷以 8%香草醛 - 70%浓硫酸乙醇
液( 015B5) ,在 105e 烘至斑点清晰, 封板, 样品含量测
定结果分别为 0159、0162、0146mg /g。
21 6 回收率试验 取批号为 20030406样品 1g, 加
入菝葜皂甙元对照品 2mg,按样品含量测定方法项
下操作, 测定结果为X = 951 3% ( n = 5) , RSD 为
11 92%。
3 讨 论
本试验在供试品制备方法考察中, 重点对加酸
水解时间进行了试验, 考察结果为水解 2 小时的供
试液,菝葜皂甙元含量高于 1小时,且与 3小时基本
相同。故确立2小时为提取酸水解时间。
显色剂在温度较高, 放置时间较长时, 颜色变
深,影响显色效果,故显色剂应新鲜配制。
编辑:覃 芳
NADP相关的脱氢酶, 可将黄色的 MTT 还原为不溶
性的蓝紫色的甲月替 ,死细胞此酶消失, MTT 不被还
原。用 DMSO溶解甲月替后, 可用酶标仪在 550nm 波
长处检测光密度,据 OD值判断细胞的增殖情况。
去甲斑蝥素是我国首先合成的新型抗肿瘤药
物,是斑蝥素的一种衍生物,在临床应用中由于其毒
副作用较轻,抗癌效果较强而优于斑蝥素。本课题
在对有毒动植物药材进行抗癌及抗癌机理研究的基
础上,选出毒性相对较小,临床上应用较好的动植物
有效成分及衍生物如去甲斑蝥素、甲基斑蝥胺、巴豆
生物碱等进行重点研究, 本实验属其中一部分,通过
研究发现去甲斑蝥素在体外对人肝癌 SMMC - 7721
细胞及人胃癌 SGC - 7901 细胞生长均有抑制作用。
其中以对肝癌 SMMC - 7721细胞的作用更为明显,
可能是肝癌SMMC - 7721细胞对去甲斑蝥素的作用
更敏感一些。今后笔者还会从不同的层面进一步研
究去甲斑蝥素对人肝癌 SMMC - 7721细胞、人胃癌
SGC- 7901 细胞及其它肿瘤细胞的作用和作用机
理,比较实验结果间的差异, 找出一定的规律性, 为
其临床应用提供微观实验依据。
参考文献:
[1] 朱慧芬,张悦,王晓林,等. MTT比色法检测 IL - 2和杀伤细胞
活性的研究 [ J ] .免疫学杂志, 1994, 10( 1) : 48.
[2] 李柏,凌昌全.去甲斑蝥素基础及临床研究进展 [ J ] . 中草药,
2002, 33( 2) : 184.
[3] 蔡鹰,王晶,梁秉文,等.泽漆根体外抗肿瘤实验研究 [ J ] .中药
材, 1999, 22( 2) : 85.
[4] 张民庆.抗肿瘤中药的临床应用 [M ] .北京: 人民卫生出版社,
1998. 343.
[5] 陈家旭,刘晓兰,刘燕,等.去甲斑蝥素诱导K562细胞凋亡的影
响 [ J ] .中国医药学报, 2000, 15( 2) : 21.
编辑:刘 劲
#158#
第 31卷 第 2期
2004年 2月
辽 宁 中 医 杂 志
LIAONING JOURNAL OF TRADITIONAL CHINESE MEDICINE
Vol. 31 No. 2
Feb. , 2004
DOI：10.13192/j.ljtcm.2004.02.70.maxt.054