全 文 ：　 　楚 雄师 范学 院学 报 200 6年第 6期 　 　
莲瓣兰内生真菌对氮源利用的研究＊
李　明 1　周　斌 2　施继惠 1　杨　琳 1
(1.大理学院 , 云南 大理 671000;2.云南大学微生物研究所 , 云南 昆明 650000)
摘　要:本文对分离自莲瓣兰 (Cymbidium lianpanTangetWang)根内的 5株内生真菌利用氮
源的生理学特性进行研究 , 采用的方法是三点种植实验 , 培养 5天 , 测量氮源培养基上内生真菌菌
落直径 , 同时 , 进行液体培养 5天 , 将菌丝过滤 , 烘干至恒重 , 计算菌丝干重。结果如下:这 5株
内生真菌利用氮源能力各不同;其中 , 属于木霉属的 LP161菌株对多数氮源有较好的利用能力 , 但
对尿素利用能力较差;并且 , LP161菌株在硝酸钾液体培养基内生长最快 , 培养 5天后菌丝干重达
到 0.78g/100ml。
关键词:莲瓣兰;内生真菌;氮源
中图分类号:Q944.6　文章标识码:A　文章编号:1671 -7406 (2006)06 -0050 -04
　　莲瓣兰 (CymbidiumlianpanTangetWang)是云南省三江并流地区特有的具有极高观
赏价值和经济价值的兰属植物。笔者曾用徒手切片法观察莲瓣兰的胞内菌丝团;三次调查
结果 , 其菌根感染率分别为 28.43%、 22.31%、 37.22%;共得到 181株真菌 , 属于半知菌
和子囊菌 [ 1] 。从优势菌中选择 5株进行生理特性实验。
　　1　材料及方法
1.1　菌种来源:
LP81菌株:丝核菌 (Rhizoctoniasp.)
LP85菌株:花顶孢属真菌 (Idrielasp.)
LP137菌株:色串孢属真菌 (Torulasp.)
LP142菌株:毛壳菌 (Chaetomiumsp.)
LP161菌株:木酶 (Trichodermasp.)
1.2　培养基配方
1.2.1　斜面菌种培养基:PP培养基
PDA培养基中加 1%蛋白胨
1.2.2　不同氮源培养基
葡萄糖　　　　　2%
KH2PO4 0.1%
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第二十一卷第六期　　　　　　　　楚　雄　师　范　学　院　学　报　　　　 　 Vol.21　No.6　　
2006年 6月　　　　　　　　 JOURNALOFCHUXIONGNORMALUNIVERSITY 　　　　　Jun.2006　　　　
＊ 基金项目:云南省教育厅科研基金资助项目 (04Z153B)
收稿日期:2006 -04 -20
作者简介:李　明 (1965—), 男 , 大理学院副教授 、硕士 , 主要从事微生物的教学与研究。
　 　楚 雄师 范学 院学报 2006 年第 6期 　　
MgSO4 0.05%
酵母膏 0.02%
琼脂 2%
蒸馏水配制
PH 6.0-6.5
在以上培养基中 , 加入 0.5g的尿素 、 牛肉膏 、 蛋白陈 、 酵母膏 、 硝酸钾 、 硝酸钠 、 硝
酸铵 、 硫酸铵 , 以上培养基原料均为分析纯或化学纯 , 10磅 20分钟灭菌、 制成平板备用。
1.3　菌种活化
1.4　不同氮源平皿菌落三点种植实验
取 0.3cm大小生长旺盛的菌落植入平皿中 , 每皿种三块 , 28℃温箱培养 5天 , 测量菌
落直径 , 对每一种营养每株菌重复 5皿 , 测定求平均值 , 并拍照。
1.5　不同氮源摇瓶测定生物量实验
1.5.1　培养基配方 , 同 1.2.2 , 不加琼脂做成液体培养基。用 250ml三角瓶 , 每瓶装
100ml, 用一层布一层牛皮纸扎口 , 10磅 20分钟灭菌备用。
1.5.2　取活化平皿在菌落生长旺盛区切每块大小为 0.5cm, 取三块放入氮源实验三角
瓶中 , 并尽量捣碎 , 每一种营养每株菌重复 5瓶 , 28℃±2℃, 120r/min, 共 5d。
1.5.3　生物量测定
所用滤纸编号称重 , 记下滤纸重量。将培养好的 100ml培养液用漏斗过滤 , 经无菌水
冲洗多次 , 将菌丝及滤纸放入 55℃烘箱 , 烘烤为恒重 , 称菌丝与滤纸共重 , 减去滤纸本身
重量 , 求 5瓶的平均值 , 即为菌丝干重。
　　2　实验结果
2.1　不同氮源实验结果 (见表 1)
表 1　不同氮源三点种植菌落直径 (cm)
Tab1.Diameterofcoloniesondiferentplateculturemedium withdiferentnitrogen
comingfromdiferentsubstances(cm)
氮　源
种　类
菌　　　号
LP81 LP85 LP137 DP142 LP161
尿素 局限 3.0×2.5 局限 局限 3.0×0.5
牛肉膏 2.0-2.5×1.5 4.0×3.5 局限 局限 7.0×4.0
蛋白胨 1.7×1.5 3.5×2.5 局限 局限 7.0×4.0
酵母膏 1.2×0.7 2.0×1.5 局限 局限 7.0×4.0
硝酸钾 2.0×1.5 4.0×3.5 局限 局限 7.0×4.0
硝酸钠 2.0×1.5 4.0×3.5 局限 局限 7.0×4.0
硫酸铵 2.0×1.5 2.5×2.0 局限 局限 7.0×4.0
硝酸铵 2.0×1.5 2.0×1.5 局限 局限 7.0×4.0
　　2.2　氮源利用实验生物量测定结果 (见表 2)
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李　明　周　斌等:莲瓣兰内生真菌对氮源利用的研究
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表 2　菌丝干重 (g/100ml)
Tab2.Dryweightofmycelia
氮　源 菌　　　号LP81 LP85 LP137 DP142 LP161
尿　素 0.11 0.92 0.18 0.17 0.5
硝酸钾 0.12 0.22 0.21 0.22 0.78
硝酸铵 0.19 0.61 0.21 0.21 0.65
注明:废糖蜜 , 按 6波美设计
　　3　讨论
3.1　实验所用 5株菌在对氮源的利用上各有特点。目前对兰科内生真菌生理学特性研
究报道较少 , 大多数对氮源 、 维生素没有严格要求。郭秀珍认为兰科内生真菌在碳源利用
方面比其它担子菌更广泛 , 而在氮源的利用上与其它外生真菌真菌没有明显区别 [ 4] 。
LP81对有机氮源利用较差 , 对无机氮源利用较好 , 这和前人报道有所不同。
LP137、 LP142两株菌 , 除了形态特征 , 菌丝色泽不同外 , 其他生物学特性十分相似。
表现在对氮源的利用能力相近 , 在摇瓶培养时 , 三角瓶底部产生大量的类似厚垣孢子的结
构 , 是否是厚垣孢子值得进一步研究 , 笔者在观察杏黄兜兰内生真菌时 , 也发现菌丝上生
长大量的厚垣孢子。
LP161菌株初步鉴定为绿木霉。除了对尿素利用较差外 , 对各种不同氮源均能较好的利
用 , 特别是在麦秆糠培养基中 , 长势很快 , 可能含有较高的纤维素酶活性。
研究表明 , 不利于菌物合成新物质的氮源可能通过延长菌物生长的迟发期而影响菌物生
长。当然 , 影响这种速度的因素也是氮源物质。例如尿素的浓度对菌物生长具有明显的影响 ,
而其它氮源没有这样明显的影响。因此 , 通过实验寻找出每一种内生真菌最佳氮源的最适浓
度是值得深入研究的课题。有关研究表明 , 对于食用菌来说 , 最好的氮源为豆饼粉[ 5] 。本次
实验 , 没有用豆饼粉、 花生饼粉及麸皮的浸出液进行实验 , 值得进一步补充实验。
3.2　生物量得率
由于菌种对氮源的利用能力不同 , LP81、 LP85、 LP137、 LP142菌株生物量得率较低 ,
只有 LP161菌株对各种氮源均有较好的利用能力 , 对硝酸钾的利用能力最高 , 培养 5天后
生物量达到 0.78g/100ml, 国内最高可到 2.0g/100ml, 一般为 1.0左右 [ 5] 。经过改良 ,
LP161菌株将有一定的应用价值。
参考文献:
[ 1] 李明.莲瓣兰菌根研究 , 云南师范大学学报 (自然科学版), 2004, 24 (1):54—
57.
[ 2] SmithS.E., 1996.Physilogyandecologyoforchidsmycorhizalfungiwithreferenceto
seedingnutrition.NewPhytol., 65:488— 499.
[ 3] HadleyG, S.H.Ong, 1978.Nutritionalrequirementsoforchidendophytes.NewPhy-
tol.81:561— 569.
[ 4] 郭秀珍 , 毕国昌 , 1989.林木菌根造林技术 .北京:中国林业出版社 .
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[ 5] 郭树凡 , 张慧丽 .香菇液体菌种发酵条件的研究 , 中国食用菌 , 2005, 24 (6):
38— 40.
(责任编辑　徐成东)
StudyonutilizationofnitrogenaboutendophytesinCymbidiumlipanTangetWang
LIMing1 ZHOUBin2 SHIJI-hui1 YANGLin1
(1.ColegeofLifeScienceandChemistry, DaliUniversity, Dali671000, Yunnan;2.Microbe
ResearchInstituteofYunnanUniversity, Kunming650000 , Yunnan)
Abstract:PhysiologicalcharacteristicsofutilizationofnitrogenaboutfiveendophytesinCym-
bidiumlianpanTangetWangarestudied.Thediametersofthreecoloniesoneveryplatecultureme-
diumarecalculatedafterthesefiveendophytesareculturedforfivedays.Meanwhile, thesefiveen-
dophytesareculturedinliquidmediumforfivesdays.Thenmyceliaarefilteredanddriedtocon-
stantweight.Andthedryweightofmyceliaiscalculated.Theresultsareasfolows:thesefiveen-
dophyteshavediferentabilityofutilizationofnitrogen.ThefungusLP161 , whichbelongstothege-
nusTrichoderma, canutilizesomeofnitrogenwel, butnotwelonureamedium.Besides, mycelia
ofthefungusLP161 growveryfastinnitreliquidmedium, Itisthehighestindryweightamong
theseendophytes, andis0.78g/100mlafterculturedinnitreliquidmediumforfivesdays.
KeyWords:CymbidiumlianpanTangetWang;endophytes;nitrogen
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