全 文 ：China Pharmacy 2015 Vol. 26 No. 9 中国药房 2015年第26卷第9期
黄花油点草来源于百合科 Liliaceae植物黄花油点草 Tri-
cyrtis maculate的干燥全草，具有安神除烦、活血消肿之功效，
是陕西省民间用于跌打损伤的重要习用品种之一。该药材在
陕西蕴藏量较高、用药历史悠久、疗效突出，但目前尚缺乏相
应的质量评价依据。本课题组在前期基础研究过程中，通过
提取分离纯化研究得到了该药材的总黄酮部位，并发现该部
位具有较强的活血作用，且烟花苷为其主要活性成分之一。
本试验拟通过对黄花油点草的水提取物和总黄酮部位中烟花
苷的含量进行测定，以期为该药材质量标准的建立提供参考。
1 材料
1.1 仪器
L-2400型高效液相色谱（HPLC）仪（日本日立公司）；
AR-1140型电子天平（瑞士梅特勒-托利多公司，精度：0.1 mg）。
1.2 试药
黄花油点草总黄酮部位[1-2]（实验室自制）；烟花苷对照品
（BioBioPHa Co.，Ltd.，批号：BBP00732，纯度：98.8％）；乙腈、
甲醇为色谱纯，其余试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱：Thermo Hypersil GOLD（250 mm×4.6 mm，5 μm）；
流动相：乙腈（A）-0.4％磷酸水溶液（B），梯度洗脱（0～30 min，
15％→25％A；30～80 min，25％→55％A）；流速：1 ml/min；柱
温：20℃；检测波长：360 nm。色谱见图1。
2.2 溶液的制备
2.2.1 对照品溶液 精密称取烟花苷对照品1.96 mg，置于10
ml量瓶中，加甲醇定容，摇匀，得质量浓度为0.196 mg/ml的对
照品贮备液。精密移取0.1 ml对照品贮备液，置于10 ml量瓶
中，加甲醇定容，经 0.45μm微孔滤膜滤过，即得质量浓度为
1.960 μg/ml的对照品溶液。
Δ基金项目：陕西省2013年科学技术研究发展计划（No.2013KJXX-
71）；陕西省教育厅2013年科学研究项目计划项目（No.2013JK0833）
＊副教授。研究方向：中药制剂过程的关键技术及适宜性。电
话：029-38184958。 E-mail：ph.175@163.com
HPLC法测定陕西产黄花油点草中烟花苷的含量Δ
孙 静 1＊，何晓娟 2，刘洁琼 1（1.陕西中医学院药学院，陕西咸阳 712046；2.天津红日药业股份有限公司，天津
301700）
中图分类号 R927.2 文献标志码 A 文章编号 1001-0408（2015）09-1246-02
DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2015.09.33
摘 要 目的：建立陕西产黄花油点草中烟花苷含量测定的方法。方法：采用高效液相色谱法。色谱柱为 Thermo Hypersil
GOLD，流动相为乙腈-0.4％磷酸水溶液（梯度洗脱），流速为1 ml/min，柱温为20℃，检测波长为360 nm。结果：烟花苷的进样量
在 5.9～35.3 μg范围内与其峰面积呈良好线性关系（r＝0.999 5）；精密度、重复性、稳定性试验的RSD＜2％；平均加样回收率为
98.9％，RSD为1.6％（n＝6）。结论：该方法稳定、可行，可用于陕西产黄花油点草水提取物及总黄酮部位中烟花苷的含量测定。
关键词 黄花油点草；黄酮部位；烟花苷；高效液相色谱法；含量测定
Content Determination of Nicotiflorin in Tricyrtis maculata from Shaanxi by HPLC
SUN Jing1，HE Xiao-juan2，LIU Jie-qiong1（1.College of Pharmacy，Shaanxi University of TCM，Shaanxi Xian-
yang 712046，China；2.Tianjin Hongri Pharmaceutical Co，Ltd.，Tianjin 301700，China）
ABSTRACT OBJECTIVE：To establish the method for the content determination of nicotiflorin in Tricyrtis maculate from
Shaanxi. METHODS：HPLC method was adopted. The determination was performed on Thermo Hypersil GOLD column with mo-
bile phase consisted of acetonitrile-0.4％H3PO4 water solution（gradient elution）at the flow rate of 1 ml/min. The column tempera-
ture was set at 20 ℃，and the detection wavelength was 360 nm. RESULTS：The linear range of nicotiflorin was 5.9-35.3 μg（r＝
0.999 5）with an average recovery of 98.9％（RSD＝1.6％，n＝6）. RSDs of precision，reproducibility and stability tests were less
than 2％. CONCLUSIONS：The method is feasible and stable. It can be used for the content determination of nicotiflorin water ex-
tract and flavonoids site in T. maculate form Shaanxi.
KEYWORDS Tricyrtis maculate；Flavonoid fraction；Nicotiflorin；HPLC；Content determination
80
60
40
20
0
mA
U
0 10 20 30 40
t，min
A
15
10
5
0
mA
U
0 10 20 30 40
t，min
B
15
10
5
0
mA
U
0 10 20 30 40
t，min
C
图1 高效液相色谱图
A.烟花苷对照品；B.黄花油点草药材；C.总黄酮提取物
Fig 1 HPLC chromatograms
A.nicotiflorin control；B.T. maculate；C. total flavonoid extract
烟花苷
烟花苷
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中国药房 2015年第26卷第9期 China Pharmacy 2015 Vol. 26 No. 9
2.2.2 总黄酮供试品溶液 精密称取黄花油点草总黄酮[1]部
位 1 g，用甲醇定容至 10 ml量瓶中，摇匀，经 0.45μm微孔滤膜
滤过，即得。
2.2.3 药材供试品溶液 精密称取同一批黄花油点草药材
5.200 3 g，按照提取工艺 [2]提取；提取液浓缩干燥后，加甲醇
溶液，滤过，并定容至 50 ml量瓶中，经 0.45μm微孔滤膜滤
过，即得。
2.3 线性关系考察
分别精密吸取对照品溶液 3、6、9、12、15、18 μl，按“2.1”项
下色谱条件进样测定，记录峰面积。以对照品的进样量（x，μg）
为横坐标、峰面积（y）为纵坐标，进行线性回归，得回归方程为
y＝4.7×103x+9 197.3（r＝0.999 5）。结果表明，烟花苷的进样量
在5.9～35.3 μg范围内与峰面积呈良好线性关系。
2.4 精密度试验
精密吸取质量浓度为 1.9 μg/ml的烟花苷对照品溶液 10
μl，按“2.1”项下色谱条件连续进样 5次，记录峰面积。结果，
RSD＝0.49％（n＝5），表明仪器精密度良好。
2.5 稳定性试验
取总黄酮部位及药材供试品溶液各适量，在室温下放置
0、2、4、6、9、12 h时按“2.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面
积。结果，药材和有效部位中烟花苷峰面积的 RSD分别为
1.79％、1.98％（n＝5），表明供试品溶液在12 h内稳定性良好。
2.6 重复性试验
分别取总黄酮部位及黄花油点草药材各适量，按“2.2.2”
及“2.2.3”项下方法制备供试品溶液，各6份，再按“2.1”项下色
谱条件进样测定，记录峰面积，并计算样品含量。结果，药材
中烟花苷的质量分数分别为 0.727％、0.733％、0.728％、
0.739％、0.715％、0.720％，总黄酮部位中烟花苷的质量分数分
别为 1.042％、1.036％、1.048％、1.015％、1.057％、1.023％，其
RSD分别为1.19％，1.51％（n＝5），表明该方法重复性良好。
2.7 加样回收率试验
精密称取同一批药材约5 g，共6份，分别精密加入质量浓
度为15 μg/ml的烟花苷对照品溶液1 ml，按“2.2.3”项下方法制
备供试品溶液，再按“2.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面
积，并计算加样回收率，结果见表1。
表1 加样回收率试验结果（n＝6）
Tab 1 Results of recovery tests（n＝6）
称样
量，g
10.4
10.0
10.3
10.4
10.2
10.2
样品含
量，μg
14.953
14.378
14.517
14.953
14.660
14.660
加入量，
μg
15
15
15
15
15
15
测得量，
μg
29.983
28.898
29.352
30.103
29.270
29.540
加样回
收率，％
100.2
96.8
98.9
101.0
97.4
99.2
平均加样
回收率，％
98.9
RSD，
％
1.6
2.8 样品含量测定
精密称取总黄酮部位和药材各适量，按“2.2.2”及“2.2.3”
项下方法制备供试品溶液，再按“2.1”项下色谱条件进样测定，
记录峰面积，并计算样品含量，结果见表2。
3 讨论
3.1 检测波长的选择
取对照品溶液适量，在 200～400 nm范围进行三维扫描，
结果对照品溶液在360 nm下有最大吸收，且基线平稳，故最终
选择360 nm波长作为检测波长。
表2 样品含量测定结果（n＝3）
Tab 2 Results of content determination of samples（n＝3）
样品
药材1
药材2
药材3
有效部位1
有效部位2
有效部位3
样品含量，μg
14.953
14.853
15.243
21.507
23.376
23.493
质量分数，％
0.747
0.743
0.762
1.075
1.169
1.175
平均质量分数，％
0.751
1.140
3.2 液相仪器与色谱柱的选择
选用 Thermo Hypersil GOLD色谱柱分别在Waters2695-
2966型和日立L-2400型HPLC仪上以甲醇-0.4％磷酸水（30∶
70，V/V）为流动相，对药材供试品溶液进样测定。根据出峰数
与峰分离度情况选用仪器 [3-5]，并对该仪器下的 Thermo
Hypersil GOLD、Thermo Hypersil GOLD aQ 、Thermo BDS
HYPERSIL C18等 3种型号的色谱柱在同一条件下进行筛选。
结果显示，日立双泵及Thermo Hypersil GOLD分离效果优于
其他仪器及色谱柱，故选用此液相仪器及色谱柱进行烟花苷
含量测定的研究。
3.3 流动相的选择
分别以甲醇-磷酸水溶液、乙腈-磷酸水溶液系统在等度条
件下测定烟花苷，根据出峰数目与峰分离度情况，初步确定选
择乙腈-磷酸水溶液系统为流动相系统[6-9]；并在此基础上对该
系统的梯度洗脱条件进行了进一步研究，根据出峰个数、峰形
及峰分离度进行判断，最终确定了“2.1”项下的流动相系统，其
色谱峰分离效果最好、出峰信息较多。
综上所述，本方法稳定、可行，可用于陕西产黄花油点草
水提取物、总黄酮部位中烟花苷的含量测定。
参考文献
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（收稿日期：2014-05-19 修回日期：2014-11-17）
（编辑：孙 冰）
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