全 文 ：4 结论
本研究采用正交试验，根据极差和方差分析最
终确定银叶树树叶中黄酮提取条件为:微波法提取，
处理时间 8 min、微波功率为 400 W、乙醇浓度为
70%、液料比为 1∶ 30。在此条件下，3 次实验结果表
明:银叶树树叶中总黄酮的平均提取率为 6. 15%。
参 考 文 献
［1］简曙光，唐恬，张志红，等 . 中国银叶树种群及其受威胁
原因［J］. 中山大学学报(自然科学版) ，2004，43(增
刊) :91-96.
［2］简曙光，韦强，唐恬 . 深圳盐灶银叶树种群的生物学特
性研究［J］. 华南农业大学学报，2005，26(4) :84-87.
［3］李树华，夏华永，陈明剑 . 广西近海水文及动力环境研
究［M］. 北京:海洋出版社，2001:60-167.
［4］江纪武 . 肯尼亚、印度等国民族药［J］. 国外医学·中
医中药分册，2003，25(2) :61-64.
［5］ Lin P. Medicinal plants of mangrove in Chin［J］. Chin J
Mar Drugs，1984，12(4) :45-51.
［6］ Tian Y，Wu J，Zhang S. Flavonoids from Leaves of Heritiera
littoralis D.［J］. Journal of Chinese Pharmaceutical Sci-
ences，2004，13(3) :214-216.
［7］黎彧，吴志谊，吴川，等 . 可见光及紫外光分光光度法测
定溪黄草总黄酮含量的研究［J］. 精细石油化工，2006，
23(1) :51-52.
收稿日期:2011-12-12
基金项目:陕西省教育厅中药制药省级重点建设学科资助项目(100800)
作者简介:孙静(1978-) ，女，研究生，讲师，主要从事中药制药新技术与新剂型研究;Tel:029-38185175，E-mail:ph. 175@ 63. com。
陕西产黄花油点草总黄酮部位提取工艺研究
孙 静1，2，刘洁琼1，夏新华2，张丽梅1
(1. 陕西中医学院，陕西 咸阳 712046;2. 湖南中医药大学，湖南 长沙 410208)
摘要 目的:优选陕西产黄花油点草总黄酮提取工艺。方法:用紫外分光光度法，以总黄酮含量为指标，在优
选因素水平的基础上，选择 L9(3
4)正交试验设计，优选总黄酮最佳提取工艺。结果:总黄酮最佳提取工艺为:药材
浸泡 15 min，加水煎煮 3 次，加水量分别为 45、40、40 倍量，煎煮时间分别为 1、0. 5、0. 5 h。结论:该提取工艺合理
可行，为黄花油点草药材的进一步研究奠定基础。
关键词 黄花油点草;总黄酮;提取工艺
中图分类号:R914. 1 文献标识码:A 文章编号:1001-4454(2012)04-0641-04
Study on the Extraction Technology of Its Flavonoids Parts from Tricyrtis
maculata Growing in Shaanxi Province
SUN Jing1，2，LIU Jie-qiong1，XIA Xin-hua2，ZHANG Li-mei1
(1. Shaanxi College of Traditional Chinese Medicine，Xianyang 712046，China;2. Hunan University of Traditional Chinese Medicine，
Changsha 410208，China)
Abstract Objective:To optimize the extraction technology of total flavonoids from Tricyrtis maculata. Methods:With UV spectro-
photometry as detection method and the content of total flavonoids as index，using single factor experimrnt and L9(3
4)orthogonal test，
the optimal condition was deterined. Results:The best extraction technology was as follows:soaked the medicinal materials for 15 mi-
nutes，water-decoted for 3 times，the solid-water ratio was 1∶ 45，1∶ 40，1∶ 40 and the decotion time was 1，0. 5，0. 5 h respectively. Con-
clusion:The optimal extraction technology is reasonable and provides a basis for its further study.
Key words Tricyrtis maculate (D. Don)Machride;Flavonoids;Extraction
黄花油点草 Tricyrtis maculata (D. Don)Mach-
ride为百合科多年生草本，在陕西秦岭南坡、北坡均
有分布，生于海拔 280 ～ 2 300 m 的山坡林下、路旁
等处〔1〕。其性味甘、淡、平，具有安神除烦、活血消
肿之功效〔2〕。该药材是陕西省民间用于跌打损伤
的重要习用品种之一，具有分布面积广、蕴藏量大、
市场需求大等特点。由于各种原因目前国内对其研
究很少，所含化学成分、药理作用物质基础及作用机
制等均不明确。
在前期基础研究过程中，笔者通过颜色鉴识反
应对该药材化学成分做了较为系统的研究，并结合
大类成分现代研究，初步筛选出可能具有活性的黄
·146·Journal of Chinese Medicinal Materials 第 35 卷第 4 期 2012 年 4 月
DOI:10.13863/j.issn1001-4454.2012.04.041
酮类成分作为重点研究对象，本试验拟通过对其提
取工艺进行研究，以期为该资源的深入研究和开发
利用奠定基础。
1 仪器与材料
1. 1 仪器 AR-1140 型电子天平(梅特勒-托利多
仪器(上海)有限公司制造) ;UV-2550 型紫外分光
光度计(日本岛津制作所制造)。
1. 2 材料 黄花油点草采于秦岭南坡，经陕西中
医学院药学院标本馆王继涛教授鉴定为百合科植物
黄花油点草 Tricyrtis maculata (D. Don)Machride;
芦丁(批号:100080-200707，中国药品生物制品检定
所) ;其他试剂均为分析纯。
2 总黄酮含量测定
2. 1 对照品溶液的配制 精密称取芦丁对照品
5. 0 mg，用纯净水定容于 25 mL量瓶中，摇匀即得浓
度为 0. 2 mg /mL芦丁对照品溶液。
2. 2 最大吸收波长的确定 将对照品溶液置于
400 ～ 600 nm范围下做全程扫描，最大吸收波长在
510 nm左右，故选择该波长作为检测波长。
2. 3 标准曲线的制备〔3〕 精密移取芦丁对照品溶
液 1、2、3、4、5、6 mL，置于 6 个 25 mL 量瓶中，分别
加入纯水 5 mL后，加入 5%亚硝酸钠溶液 0. 3 mL，
摇匀，放置 6 min，加入 10%硝酸铝溶液 0. 3 mL，摇
匀，放置 6 min，加入 4%氢氧化钠溶液 4 mL，摇匀，
放置 15 min，再分别加入纯水至刻度线，以相应溶剂
为空白对照，于 510 nm 处测定吸光度 A，平均吸光
度分别为 0. 078、0. 157、0. 221、0. 292、0. 367、0. 452，
以吸光度 A 为横坐标，黄酮含量 C(mg /mL)为纵坐
标作图，计算线性回归方程为 C = 0. 1169A －
0. 0019，r = 0. 9996，结果显示黄酮浓度在 0. 008 ～
0. 048 mg /mL时具有良好线性关系。
2. 4 精密度试验 精密吸取对照品溶液 2 mL，按
照“2. 3”项下方法显色并测定其吸光度，重复 6 次，
吸光度值分别为 0. 157、0. 159、0. 161、0. 158、
0. 156、0. 159，RSD 为 1. 11%，结果表明，仪器精密
度良好。
2. 5 重复性试验 精密吸取样品溶液 2 mL 置于
25 mL量瓶中，按照“2. 3”项下方法显色并测定其
吸光度，测 3 次取平均值，同法重复 6 次，吸光度平
均值分别为 0. 440、0. 443、0. 446、0. 451、0. 447、
0. 444，RSD为 0. 85%，结果表明，本方法重复性良好。
2. 6 稳定性试验 精密吸取样品溶液 2 mL 置于
25 mL量瓶中，按照“2. 3”项下方法显色并测定其吸
光度，测三次取平均值，分别在 0、2、4、6、8 h 同法进
行 5 次，吸光度平均值分别为 0. 442、0. 443、0. 449、
0. 441、0. 438，RSD 为 0. 91%，结果表明，该样品在
8 h内稳定性良好。
2. 7 加样回收率试验 精密吸取样品溶液 1
mL，加适量对照品，按照“2. 3”项下方法显色测
定其吸光度计算其黄酮总量，计算回收率，结果
分别为 96. 312%、97. 198%、100. 242%、99. 741%、
100. 012%、98. 701%，RSD 为 1. 84%，表明本方法
回收率良好。
3 提取工艺优选
3. 1 提取方法及溶媒考察〔4〕
3. 1. 1 水提法:煎煮:称取原药材 5 g，加 40 倍量
水，浸泡 0. 5 h，煎煮 3 次，每次 1 h，合并药液，抽滤，
水浴浓缩，用蒸馏水定容于 100 mL 量瓶中，得药液
A;超声:称取原药材 5 g，加 40 倍量水，浸泡 0. 5 h，
超声(35 ℃)3 次，每次 1 h，合并药液，抽滤，水浴浓
缩，用蒸馏水定容于 100 mL量瓶中，得药液 B。
3. 1. 2 醇提法:回流:称取原药材 5 g，加 40 倍量
70%乙醇，浸泡 0. 5 h，回流 3 次，每次 1 h，合并药
液，回收乙醇至无醇味，用蒸馏水定容于 100 mL 量
瓶中，得药液 C;超声:称取原药材 5 g，加 40 倍量
70%乙醇，浸泡 0. 5 h，超声(35 ℃)3 次，每次 1 h，
合并药液，回收乙醇至无醇味，用蒸馏水定容于 100
mL量瓶中，得药液 D。
3. 2 总黄酮含量测定 精密量取 A、B、C、D 各 2
mL于 25 mL 量瓶中，分别加入纯水 5 mL 后，加入
5% 亚硝酸钠溶液 0. 3 mL，摇匀，放置 6 min，加入
10%硝酸铝溶液 0. 3 mL，摇匀，放置 6 min，加入
4% 氢氧化钠溶液 4 mL，摇匀，放置 15 min，以相应
溶剂为空白对照组，按照上述显色操作配置。测得
吸光度结果见表 1。
结果显示水煎煮方法优于其他方法，故选择水
煎煮作为总黄酮提取的方法。
表 1 黄花油点草提取液吸光度测定结果
样品
吸光度
A1 A2 A3
珔A 黄酮含量 /(mg /mL)
A(煎煮) 0. 430 0. 429 0. 430 0. 440 0. 049
B(超声) 0. 235 0. 235 0. 236 0. 235 0. 026
C(回流) 0. 282 0. 283 0. 282 0. 283 0. 031
D(超声) 0. 124 0. 124 0. 124 0. 124 0. 013
3. 3 因素水平的初步确定〔5〕
3. 3. 1 提取次数的确定:称取药材 5 g，用 40 倍量
的水浸泡 0. 5 h，煎煮 4 次，每次煎煮液单独收集并
浓缩至 100 mL，按照“2. 3”项下方法测定其黄酮含
量，结果见表 2。
·246· Journal of Chinese Medicinal Materials 第 35 卷第 4 期 2012 年 4 月
表 2 黄花油点草不同提取次数黄酮含量测定
第一次 第二次 第三次 第四次
珔A 0. 428 0. 082 0. 046 0. 044
黄酮量 /(mg /mL) 0. 048 0. 008 0. 003 0. 003
黄酮总量 /mg 4. 814 0. 769 0. 348 0. 328
结果测得煎煮 3 次，药液黄酮含量已达总黄酮
含量的 95%以上，所以选择药液煎煮次数为 3 次。
3. 3. 2 加水量的考察:称取原药材 5 g，浸泡 0. 5
h，筛去多余水分，称重，测定其吸水量为原药材 4
倍。称取原药材 8 份，每份 5 g，精密称定后，分别
加入 25、30、35、40、45、50、55、60 倍水，煎煮 1 次后，
收集煎煮液，浓缩至 100 mL 容量瓶中，备用。按照
“2. 3”项下方法测定其黄酮含量，结果见表 3。结果
显示，水加入量为 40 倍时，提取效果较好。
表 3 黄花油点草不同溶剂量提取的黄酮含量
加水量
吸光度
A1 A2 A3
珔A 黄酮含量 /(mg /mL)
25 0. 255 0. 255 0. 254 0. 255 0. 028
30 0. 385 0. 385 0. 385 0. 385 0. 044
35 0. 401 0. 401 0. 402 0. 401 0. 045
40 0. 426 0. 426 0. 426 0. 426 0. 048
45 0. 415 0. 414 0. 414 0. 414 0. 047
50 0. 392 0. 390 0. 390 0. 391 0. 044
55 0. 388 0. 388 0. 389 0. 388 0. 044
3. 4 正交试验〔6，7〕
3. 4. 1 正交试验设计:为了获得最佳工艺条件，利
用正交法“均衡分散”的特点，以不同浸泡时间、提
取时间、加水量为主要考察因素，以样品中总黄酮含
量为考察指标，选用 L9(3
4)正交表，进行方案设
计。结果见表 4。
表 4 因素水平表
水平
因素
A
浸泡时间 /min
B
加水倍数
C
煎煮时间 /h
1 15 (40、35、35) (1、0. 5、0. 5)
2 30 (45、40、40) (1. 5、1、1)
3 45 (50、45、45) (2、1. 5、1. 5)
3. 4. 2 含量测定:称取黄花油点草样品 9 份，每份
5 g，精密称定后，按照上述条件制备样品，分别标记
为 1、2、3、4、5、6、7、8、9 号样品。按照“2. 3”项下方
法进行显色测定样品黄酮含量，计算提取干膏中总
黄酮量，结果见表 5，方差分析结果见表 6。
表 5 正交试验结果
试验号
列号
A
浸泡时间
/min
B
加水倍数
C
煎煮时间
/h
总黄酮
含量 /%
1 1 1 1 7. 012
2 1 2 2 6. 511
3 1 3 3 5. 890
4 2 1 2 5. 717
5 2 2 3 5. 328
6 2 3 1 6. 984
7 3 1 3 5. 926
8 3 2 1 6. 823
9 3 3 2 6. 142
Ⅰj平均 6. 471 6. 218 6. 440
Ⅱj平均 6. 010 6. 221 6. 123
Ⅲj平均 6. 297 6. 339 5. 715
Rj 0. 469 0. 121 1. 225
表 6 方差分析表
因素 偏差平方和 自由度 F比
F
临界值
显著性
差异
浸泡时间 0. 326 2 11. 643 19. 000
加水倍数 0. 028 2 1. 000 19. 000
煎煮时间 2. 334 2 83. 357 19. 000 P ＜ 0. 05
注:F0. 05(2，2)= 19. 000
3. 4. 3 结果:根据表 5、6 的结果进行分析，可得出
C 因素具有显著性差异，其中 C1 ＞ C2 ＞ C3，其次是
A、B，A 因素中 A1 ＞ A3 ＞ A2，B 因素中 B3 ＞ B2 ＞ B1，
综合生产实际考虑，最终选择最佳提取工艺为
A1B2C1，即药材浸泡 15 min，加水煎煮 3 次，加水量
分别为 45、40、40 倍量，煎煮时间分别为 1、0. 5、0. 5
h。
3. 4. 4 验证试验:精密称定黄花油点草样品 5 g，
共 3 份，按正交最佳工艺提取，药液过滤，浓缩，定
容于 100 mL量瓶中。精密量取提取液 1 mL定容于
25 mL量瓶中，按照“2. 3”项下方法显色测定吸光度
及出膏率，结果见表 7。
表 7 验证试验结果
吸光度
A1 A2 A3
珔A 黄酮含量/(mg /mL)
出膏率
/%
膏中黄酮
含量 /%
1 0. 296 0. 295 0. 296 0. 295 0. 033 24. 120 6. 756
2 0. 300 0. 300 0. 300 0. 300 0. 033 25. 340 6. 529
3 0. 299 0. 299 0. 298 0. 299 0. 033 24. 720 6. 665
从表 7 中可以看出，按照最佳工艺提取的三组
药液，干膏中黄酮含量都在 6. 5% 以上。表明优选
工艺稳定、合理、可行。
·346·Journal of Chinese Medicinal Materials 第 35 卷第 4 期 2012 年 4 月
4 小结
在总黄酮部位提取过程中，确定各因素水平时，
因为药材为全草类中药，质地疏松，每个因素都逐一
进行了优选，在此基础上，对优选后的各个因素，通
过正交试验进一步对总黄酮部位提取工艺进行优
选，并通过工艺验证试验，最终确定总黄酮部位提取
的最佳工艺，结果表明该工艺稳定可行，适合于该药
材总黄酮部位的提取。
参 考 文 献
［1］中国科学院《中国植物志》编辑委员会 . 中国植物志
［M］. 第 14 卷 . 北京:科学出版社，1980:32.
［2］肖海龙，高尔，胡晓丽 . 银杏叶总黄酮药理作用［J］. 中
国药房，2005，16(12) :947-948.
［3］孙静，王昌利，张文平 . 蜂胶除蜡工艺对黄酮类成分含
量影响的实验研究［J］. 医学研究杂志，2010，39(4) :
41-43.
［4］徐娟 . 淫羊藿总黄酮的提取方法研究［J］. 中国中医药
学杂志，2007，5(11) :4-7.
［5］谢果，张强国 . 用正交试验优选葛根总黄酮的提取工艺
研究［J］. 重庆科技学院学报(自然科学版) ，2006，8
(1) :46-48.
［6］王志俊 . 对当归、淫羊藿和黄芪的提取方法的研究
［J］.海峡药学，2010，22(3) :82-83.
［7］王薇，蔡健 . 桂花总黄酮的提取工艺［J］. 广州食品工
业科技，2004，20(2) :53-54.
护肝清脂片质量标准研究
周本杰，严愉妙，黄淑贤，姚育法，张守尧
(南方医科大学珠江医院药学部，广东 广州 510282)
摘要 目的:建立中药复方新药护肝清脂片的质量控制方法。方法:采用薄层色谱法对护肝清脂片中的山楂、
泽泻、三七进行定性鉴别;采用高效液相色谱法测定该制剂中熊果酸的含量。结果:薄层色谱显色清晰且阴性对照
无干扰。熊果酸在 40 ～ 200 μg /mL 浓度范围内线性关系良好，r = 1. 000，平均加样回收率为 99. 05%，RSD 为
1. 3%。结论:该方法操作简便，结果准确、重复性好，可用于护肝清脂片的质量控制。
关键词 护肝清脂片;薄层色谱法;熊果酸;高效液相色谱法
中图分类号:R286. 1 文献标识码:A 文章编号:1001-4454(2012)04-0644-04
The Quality Standard Study on Hugan Qingzhi Tablets
ZHOU Ben-jie，YAN Yu-miao，HUANG Shu-xian，YAO Yu-fa，ZHANG Shou-yao
(Department of Pharmacy，Zhujiang Hospital，Southern Medical University，Guangzhou 510282，China)
Abstract Objective:To develop a method of quality control for Hugan qingzhi tablets. Methods:Fructus Crataegi，Rhizoma Al-
ismatis and Radix Notoginseng were identified by TLC. HPLC was used for the determination of ursolic acid in Hugan qingzhi tablets.
Results:The chromatographic spots were identified without the interference of negative control. Ursolic acid had a good linearity over
the concentration range of 40 ～ 200 μg /mL (r = 1. 000). The average recoveries was 99. 05% with relatively standard deviations of
1. 3% . Conclusion:This method is reliable，accurate and specific and can be used for the quality control of Hugan qingzhi tablets.
Key words Hugan qingzhi tablets;TLC;Ursolic acid;HPLC
收稿日期:2011-12-19
基金项目:广东省中医药局科研课题(2008367) ;广东省科技计划项目(2010B060900056)
作者简介:周本杰(1967-) ，男，博士，主任药师，主要从事中药药理与中药新制剂研发;Tel:020-61643549，E-mail:zhoubj163@ 163. com。
护肝清脂片处方来源于名老中医、军委保健医
藏堃堂教授的经验方，由山楂、泽泻、三七、荷叶、蒲
黄 5 味中药组成，具有健脾活血化浊、降脂减肥之
功，用于治疗脂肪肝或高血脂症，症见神疲乏力、头
昏目眩、腰膝酸软等，并可防治高血压、冠心病。为
了更好地控制护肝清脂片的质量，本实验按照中药
新药研究规范，参考了相关文献，对护肝清脂片制剂
中的山楂、泽泻、三七进行了薄层色谱鉴别。据文
献〔1〕报道，山楂中含有熊果酸等三萜类成分，现其
质量标准常为薄层扫描法测定样品中熊果酸的含
量〔2，3〕，该操作复杂，且受诸多因素影响，分析结果
的重复性、精密度和稳定性欠佳。为了更有效、更准
确地控制本制剂的内在质量，确保其疗效，本文拟建
立操作方便、快速、结果可靠的 HPLC 法测定本制剂
中的熊果酸的含量，从而初步建立准确、可靠、专属
性强的质量控制方法。
·446· Journal of Chinese Medicinal Materials 第 35 卷第 4 期 2012 年 4 月