全 文 ：3 　讨论
人体在正常生理代谢过程中会产生活性氧自由
基(主要是超氧阴离子和羟自由基),如果体内的活
性氧自由基得不到及时清除而蓄积在细胞内 ,则将
导致它们与体内某些生物大分子如蛋白质 、核酸 、脂
质等发生反应 , 影响细胞物质及能量的正常代
谢 〔11、 12〕。现已证实 ,氧化损伤与衰老 、肿瘤 、动脉硬
化以及人类免疫缺陷病毒(HIV)感染等均有密切关
系 ,因此 ,寻找高效 、低毒的抗氧化剂一直备受瞩目 。
本实验探讨了短瓣金莲花总黄酮提取物及其四
种黄酮苷单体对由 H2O2诱导的大鼠红细胞氧化性
溶血的影响 ,结果表明短瓣金莲花总黄酮提取物及
黄酮苷单体均可降低溶血率 ,有效保护红细胞结构
完整性 。
DPPH法即二苯代苦味肼基自由基分光测定
法 ,通过检测抗氧化剂对 DPPH·自由基的清除能
力可以表示其抗氧化活性的强弱。本研究发现短瓣
金莲花总黄酮提取物及其四种黄酮苷单体均有较强
的清除 DPPH·自由基的作用。
此外 ,本实验发现总黄酮提取物的抗氧化活性
明显比黄酮苷单体偏低 ,推测可能是由于黄酮苷单
体纯度较高(>97%),而总黄酮提取物的纯度仅为
60%左右 ,总黄酮提取物中含有的非黄酮类杂质不
具备抗氧化活性或具拮抗效应 。
本实验表明 ,短瓣金莲花总黄酮提取物及其四
种黄酮苷单体具有较强的体外抗氧化活性 ,可为其
进一步开发和研究提供一定的理论依据。但其体内
抗氧化活性有待进一步探讨。同时 ,其潜在的与抗
氧化活性有关的药效 ,如治疗心血管疾病方面的药
用价值也值得关注 。
参 考 文 献
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(2006-10-17收稿)
黄鹌菜的抗氧化作用研究
管　棣 ,谢青兰 ,杨　喆 ,张媛媛
(西南交通大学生物工程学院 ,四川成都 610031)
　　摘要　目的:研究黄鹌菜的抗氧化活性。 方法:分别采用大鼠心 、肝 、肾匀浆自发性脂质过氧化 、H2O2诱导肝
匀浆脂质过氧化和诱导红细胞溶血的生物测定法 ,以及对化学反应产生羟自由基清除的化学测定法。结果:黄鹌
菜提取物能有效地抑制大鼠心 、肝 、肾匀浆自发性脂质过氧化 、H2O2诱发的肝匀浆脂质过氧化反应和 H2O2所致红
细胞溶血。对 Fe2+-H2O2所产生的羟自由基亦有直接的清除作用。结论:黄鹌菜具有良好的抗氧化作用。
关键词　黄鹌菜;抗氧化;羟自由基
中图分类号:R285.5　　文献标识码:A　　文章编号:1001-4454(2007)08-1002-04
作者简介:管棣(1947-),男 ,教授 ,研究方向:天然产物化学与生物活性;E-mail:guandi4211@yahoo.com.cn。
·1002· 中药材 JournalofChineseMedicinalMaterials　　第 30卷第 8期 2007年 8月
DOI :10.13863/j.issn1001-4454.2007.08.042
　　黄鹌菜为菊科 (Compositae)黄鹌菜属 (Young-
ia)植物 ,始载于 《食物本草 》,主要分布在我国 ,日
本 、朝鲜 、蒙古及俄罗斯(西伯利亚 、远东地区)〔1〕。
黄鹌菜具有甘 、微苦 、凉等性味 ,有清热解毒 、利尿消
肿 、止痛之功效。作为民间常用中草药 ,应用十分广
泛 。近年来 ,国内外对黄鹌菜属植物的化学成分以
及药理作用的研究〔2 ～ 4〕发现黄鹌菜植物的水提液和
醇提液具有体外抗癌和抗病毒的效果 ,初步分析了
该植物含有酚类物质如单宁酸等。但对于黄鹌菜的
抗氧化作用尚未见报道 ,为充分开发 、利用我国丰富
的植物资源 ,本实验分析了黄鹌菜提取物清除羟基
自由基和脂质自由基的效果 ,发现它们均具有一定
的抗氧化性能。
1 　材料与仪器
1.1 　实验材料　实验所用黄鹌菜 Youngiajaponica
(L.)DC.采自四川成都 ,由西南交通大学生物工程
学院李萍教授鉴定。硫代巴比妥酸(TBA),抗坏血
酸 ,三氯乙酸 ,过氧化氢等试剂均为分析纯。
1.2　仪器　722分光光度计(上海第三分析仪器
厂), JJ-2组织匀浆机(金坛市富华电器有限公司),
CENTRIFUGE离心机(上海安亭科学仪器厂), HH-4
型恒温水浴锅 ,电子天平 。
1.3　实验动物　SD大鼠 ,体重 200 ～ 250 g,四川
大学实验动物房供应。
2　实验方法
2.1　黄鹌菜的提取　黄鹌菜全草阴干粉碎后 ,以
800 ml/L乙醇回流提取 3次 ,前两次每次 1 h,最后
一次 0.5 h,合并醇提液 ,减压浓缩得稠浸膏 ,依次用
石油醚(60 ～ 90℃)、氯仿和乙酸乙酯萃取。取乙酸
乙酯稠浸膏上样于硅胶(200 ～ 300目)柱 ,以氯仿和
甲醇洗脱 ,洗脱物浓缩后得浸膏 ,分别为 YJ-Ⅰ 、YJ-
Ⅱ和 YJ-Ⅲ。
　　Table1　　　　　　　EffectofYJ-Ⅰ , YJ-Ⅱ , andYJ-Ⅲ onMDAGenerationSpontaneously
inHomogenatesofRatHeart, Liver, andKidneys( X±S, n=5)
Drug Conc.(μg/ml)
MDAcontent(nmol/gtissues)/IR(%)
Heart % Liver % Kidneys %
Control 78.54±3.56 - 97.54±0.76 - 125.32±3.84 -
YJ-Ⅰ 11.01 60.40±3.281) 23.10 71.55±2.042) 26.65 98.60±1.892) 21.32
22.02 53.92±0.892) 31.35 63.00±1.062) 35.42 87.86±2.462) 29.89
44.04 42.25±2.361) 46.20 51.69±1.062) 47.02 68.47±0.382) 45.36
YJ-Ⅱ 8.42 56.51±3.242) 28.05 69.11±3.552) 29.15 93.61±3.622) 25.30
18.84 47.44±2.772) 39.60 55.04±2.632) 43.57 82.41±2.362) 34.24
33.68 38.36±0.522) 51.16 46.18±2.632) 52.66 68.64±1.152) 45.23
YJ-Ⅲ 16.60 57.81±1.352) 26.40 66.66±1.252) 31.66 97.05±1.252) 22.56
33.20 50.03±0.942) 36.30 55.04±0.582) 43.57 86.87±1.301) 30.68
66.40 40.96±0.942) 47.85 43.11±0.482) 55.80 70.73±0.362) 43.56
　　1)P<0.05, 2)P<0.01vscontrol
　Table2　　EffectofYJ-Ⅰ , YJ-Ⅱ , andYJ-Ⅲ on
MDAGenerationinliver( X±S, n=5)
Drug Conc.(μg/ml)
MDAcontent(nmol/gtissues)/IR(%)
Liver %
Control 224.63±5.49 -
YJ-Ⅰ 11.01 127.66±8.682) 43.17
22.02 107.76±4.331) 52.03
44.04 71.12±2.232) 68.34
YJ-Ⅱ 8.42 99.58±6.231) 55.67
18.84 89.09±5.842) 60.34
33.68 59.40±1.782) 73.56
YJ-Ⅲ 16.60 49.83±3.642) 49.83
33.20 60.30±1.122) 60.30
66.40 76.31±1.552) 76.31
2.2　方法与结果
2.2.1 　对大鼠心 、肝 、肾自发性脂质过氧化的影
响:SD大鼠脱颈椎处死 ,迅速取心脏 、肝脏 、肾脏 ,在
0 ～ 4℃下用生理盐水制成 100 g/L的组织匀浆。实
验分为对照组 、3个剂量的 YJ-Ⅰ组 、3个剂量的 YJ-
Ⅱ组和 3个剂量的 YJ-Ⅲ组 ,每组平行 5管 ,每管加
组织匀浆 0.5ml,不同浓度药液 0.1ml,混匀。 37℃
温育 2 h,按硫代巴比妥酸(TBA)法〔5〕测 MDA含
量 ,并计算抑制率 。结果见 Table1,黄鹌菜提取物
能剂量依赖性地抑制大鼠心 、肝 、肾自发性 MDA生
成 , 3个剂量 JY-Ⅰ组和 3个剂量 YJ-Ⅱ组以及 3个
剂量 YJ-Ⅲ组大鼠心 、肝 、肾中的 MDA含量显著或
极显著的低于对照组 。 YJ-Ⅰ的 IC50分别为 49.33,
48.27 , 50.28 μg/ml, YJ-Ⅱ 的 IC50分 别 31.43,
·1003·中药材 JournalofChineseMedicinalMaterials　　第 30卷第 8期 2007年 8月
29.03, 39.24 μg/ml, YJ-Ⅲ的 IC50为 70.12, 51.24,
81.27 μg/ml。
2.2.2　对 H2O2诱导大鼠肝脂质过氧化的影响:同
前法制备 100 g/L肝匀浆 ,分组同上。先在各管中
加入 100 g/L肝匀浆 0.5 ml,各浓度药液 0.1 ml,
37℃温育振荡反应 15 min, 再向各管中加入 100
mmol/LH2O2 0.1 ml,继续温育反应 30 min,各管加
入 200 g/L三氯乙酸 1.5 ml终止反应 ,以 10000 g
离心 10 min,取上清液 ,加入 ρ=6.7 g/LTBA1.5
ml,并于沸水中水浴 15 min,同上测定 MDA的生成
抑制率 。结果见 Table2。 H2O2诱导大鼠肝组织匀
浆 MDA的生成 ,作用 30 min使 MDA的含量明显升
高 。黄鹌菜提取物体外对 H2O2诱导大鼠肝组织匀
浆 MDA的生成均明显的抑制作用 ,且量效关系明
显 。YJ-Ⅰ的 IC50为 19.74 μg/ml, YJ-Ⅱ的 IC50为
1.31μg/ml, YJ-Ⅲ的 IC50为 15.58μg/ml。
2.2.3　对 H2O2诱导红细胞氧化溶血的影响:SD
大鼠脱颈椎处死 ,眼眶取血 ,用肝素抗凝大鼠全血 ,
用生理盐水(5 min×2000 g)离心洗涤后 ,配成 5 g/
L的红细胞悬液 , 分组同上 ,将红细胞悬液 1.0 ml
与各浓度的药液和生理盐水(总体积为 0.5 ml)于
37℃温育 10min后 ,加 100mmol/LH2O20.5ml继续
温育 1h,稀释 5倍后离心(5 min×3000g),取上清
液在 415 nm处测吸光值 ,以对照组为 100%的溶血
计算加药后的溶血度和抑制率 。结果见 Table3 ,黄
鹌菜提取物体外能显著抑制 H2O2诱导的红细胞氧
化溶血 。随着提取液浓度的增加 ,抑制率增大 , YJ-
Ⅰ的 IC50为 0.37 μg/ml, YJ-Ⅱ的 IC50为 0.41 μg/
ml, YJ-Ⅲ的 IC50为 0.12μg/ml。
　Table3　　　 EffectofYJ-Ⅰ , YJ-Ⅱ , andYJ-Ⅲ
ontheHemolysisofRatRedCel
Induced( X±S, n=5)
Drug Conc.(μg/ml)
Hemolysisextentofraterythrocytes
A415 HR(%)IR(%)
Normal - 0.123±0.0015 - -
Control 0.835±0.0045 100 -
YJ-Ⅰ 18.53 0.733±0.01101) 87.78 14.33
37.05 0.655±0.00332) 78.44 25.28
74.10 0.336±0.00122) 40.24 70.08
YJ-Ⅱ 6.52 0.726±0.00151) 87.31 15.31
73.04 0.660±0.00702) 79.04 25.58
146.08 0.338±0.00572) 40.48 69.80
YJ-Ⅲ 4.22 0.748±0.00342) 89.58 12.22
48.44 0.654±0.00082) 78.32 25.42
96.88 0.340±0.00052) 40.72 69.52
2.2.4 　· OH的生成及清除率的测定:取试管 ,每
组平行 5管 ,每管内分别加入 5 mmol/L邻二氮菲
1.5 ml、 150 mmol/LpH7.4 PBS3.8 ml、5 mmol/L
FeSO4 1.5ml、不同浓度药物或蒸馏水共 2.2ml和 1
g/LH2O2 1.0ml,于 37℃振荡反应 1h,测定 A536 ,未
损伤管不加 H2O2。清除率按文献计算〔6〕 ,结果见
Table4,黄鹌菜提取液能剂量性抑制邻二氮菲-Fe2+
被氧化为邻二氮菲 -Fe3+的过程 ,使 A536值增大 。YJ-
Ⅰ的 IC50为 826.98μg/ml, YJ-Ⅱ的 IC50为 308.01
μg/ml, YJ-Ⅲ的 IC50为 685.39 μg/ml。
　Table4　 EfectofYJ-Ⅰ , YJ-Ⅱ , andYJ-Ⅲ on
· OHFreeRadical( X±S, n=5)
Drug Conc.(μg/ml)
Thescavengingeffect
A536 %
Normal - 1.542±0.0005 -
Control 0.570±0.0013 -
YJ-Ⅰ 322.13 0.789±0.00531) 22.53
536.89 1.909±0.00082) 34.88
751.64 1.014±0.00012) 45.68
YJ-Ⅱ 164.67 0.710±0.00082) 19.68
247.00 0.998±0.00531) 39.55
411.67 1.425±0.00062) 73.39
YJ-Ⅲ 405.78 0.841±0.00231) 22.72
568.09 0.990±0.00012) 38.69
811.56 1.210±0.00012) 62.27
3　讨论
自由基是在生物体内呈游离状态 ,带有不配对
电子的分子 、原子或离子。近年来 ,大量研究表明 ,
氧自由基诱导的 LPO(脂质过氧化物)反应与许多
疾病的发生有密切的关系 ,如癌症 ,高脂血症 ,急 、慢
性炎症 ,糖尿病 ,肺气肿等 〔7〕。因此 ,寻找利于人体
吸收的能清除体内过量自由基的外源植物活性清除
剂目前正成为人们关注的重点。
体外诱导脂质过氧化损伤模型为筛选清除自由
基药物提供了有效的手段 。 H2O2可通过 Fenton反
应产生活性更强的 · OH,诱发多不饱和脂肪酸氧
化 ,形成过氧化脂质(LPO)或引起红细胞膜脂质氧
化 、膜蛋白发生聚集 , 导致红细胞溶血 。 MDA是
LPO的主要降解产物 ,所以通过测定 MDA和红细
胞溶血程度可判断 · OH的多少。本文采用了三种
体外诱导体系和一种自发性体系:H2O2诱导大鼠肝
脂质过氧化体系 、H2O2诱导红细胞氧化溶血体系 、
Fe2+-H2O2体系和大鼠心 、肝 、肾自发性体系。结果
表明黄鹌菜提取物对于 H2O2所致的氧化具有显著
·1004· 中药材 JournalofChineseMedicinalMaterials　　第 30卷第 8期 2007年 8月
的抑制活性;同时对脂质过氧化反应的终产物丙二
醛(MDA)的研究发现 ,黄鹌菜提取物体外可显著降
低组织匀浆 MDA的生成;黄鹌菜提取物还具有一
定的清除羟自由基的能力 ,本实验初步证实了黄鹌
菜的抗衰老作用 ,为其应用于抗衰老提供了理论基
础 。
参 考 文 献
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(2006-11-07收稿)
透骨化毒酊的药效学研究
韩　强1 ,韩　坚 2 ,钟志勇 3 ,陈孝健2
(1.广州中一药业有限公司 ,广东广州 510130;2.广州中医药大学中药药理教研室 ,广东广州 510405;3.
广东省医学实验动物中心 ,广东广州 528248)
　　摘要　目的:探讨新药透骨化毒酊抗炎镇痛作用。方法:分别采用小鼠耳廓肿胀法 、大鼠足肿胀法 、大鼠棉球
肉芽肿胀法 、大鼠佐剂性关节炎法 、小鼠热板法 、扭体法 、甲醛致痛法等实验对透骨化毒酊的抗炎和镇痛作用主要
药效学指标进行研究。结果:透骨化毒酊具有明显的抑制小鼠耳廓肿胀 、大鼠蛋清性足肿 、大鼠棉球肉芽肿胀 ,减
少小鼠扭体次数和咬脚累计的作用。结论:透骨化毒酊具有明显的抗炎镇痛作用。
关键词　透骨化毒酊;抗炎;镇痛
中图分类号:R285.5　　文献标识码:A　　文章编号:1001-4454(2007)08-1005-04
作者简介:韩强(1959-),男 ,执业药师 ,从事药品安全性与销售工作 , Tel:1390224158。
　　透骨化毒酊是广州中医药大学科技园开发的一
个外用制剂 ,具有温经除湿 ,通络止痛等功效。主治
风湿性关节炎 、类风湿性关节炎 ,肢体疼痛 ,肢体麻
木 ,软组织损伤所致关节痛等症。本文作者对该药
进行了抗炎 、镇痛作用的研究 ,为新药透骨化毒酊的
功效提供一定的实验依据 。结果如下:
1　材料
1.1 　药品与试剂　透骨化毒酊(以独活 、姜活 、秦
艽 、威灵仙 、马钱子为主组方)由广州中医药大学科
技园提供 ,低剂量 1.0 g/生药 ml,中剂量 2.0 g/生
药 ml,高剂量 4.0g/生药 ml,批号 20030915;麝香舒
活精(黄石飞云制药有限公司 ,批号 Z42021607);二
甲苯(北京长海化工厂生产 ,批号 20000831);甲醛
(AR,汕头市光华化学厂生产 ,批号 20020723);伊
文思 蓝 (广 州 天马 精 细化 工 厂分 装 , 批 号
A010994102);乙酸 (汕头市光华化学厂 , 批号
20030423);丙酮 (广州化学试剂厂 , 批号 970601-
22)。
1.2　动物　NIH小鼠 ,体重 18 ～ 22 g,由广东省医
学实验动物中心提供 , 合格证号 2003A021;SD大
鼠 ,体重 160 ～ 200g,由广东省医学实验动物中心提
供 ,合格证号 2003A024。
1.3　仪器　恒温水箱 (上海跃进医疗器械厂生
产);BS110S电子天平(Sartorius公司产品);YLS-6A
智能热板仪(山东省医学科学院设备站 ,出厂编号
6007246、6007259);离心机 ,型号 TD-5-A, (上海安
亭科学仪器厂制造);7200型分光光度机 (尤尼柯
(上海)仪器有限公司)。
·1005·中药材 JournalofChineseMedicinalMaterials　　第 30卷第 8期 2007年 8月