全 文 ：白癜风是一种常见病，主要表现为皮肤呈斑块
状或片状脱色变白。形态学上可见病损皮肤色素颗
粒减少，黑素细胞破坏 !数量减少乃至消失。对该病
的发病机理至今尚未形成明确的认识，现在多数学
者认为该病属自身免疫疾病。驱虫斑鸠菊（!#&
’(()∗+,′)’-( .’++/，#）注射针剂是新疆人民医院
根据多年临床经验研制成功的治疗白癜风的纯中药
制剂。为了深入研究该药作用机理，特别是对免疫系
统的作用，我们从细胞和分子水平探讨了该药对正
常小鼠免疫功能的影响，以便为其临床应用提供理
论依据。
材料与方法%实验动物 &’( & ! ) 纯系小鼠，雌性，体重 *+,* -，购于中国疾病预 防控制中心流行病与微生物所，合格证编号为 （医动字）第 ..+/0+12 号，314 小鼠购自军事医学科学院实验动物中心。
9:+ 培养基为 ;8&3<
产品；9:+完全培养液加青霉素++ ! ! =>、链霉素 ++!>!=>、谷氨酰胺∗==?>!(及+@胎牛血清；氚标记的胸腺嘧啶
核苷（0A/BC6）为中国原子能研究所产品；邻苯二胺为 DE-=F
产品分装；过氧化物酶标记羊抗鼠 8-;、过氧化物酶标记兔抗
鼠 8-; 购于邦定生物技术公司；兔抗小鼠 8-7、8-’ 抗体为
DE-=F 公司产品；荧光标记的羊抗小鼠 3G.（3G./5H）以及
文章编号I++./+++∗J∗++∗K+0/+20/+: 研究报告
驱虫斑鸠菊对小鼠免疫分子的影响
邓瑞春 L周勇L徐建国 *L 尚靖 *L 王旭丹 L于鲁海∗L章金刚0L王冬平:（% 北京中医药大学中西医结合研究所，北京 +++∗.；∗.& 细胞亚类表达水平；采用N0AO/BC6 参入法利用 3B((/* 细胞株测定 B 淋巴细胞分泌 8(/* 活性。
结果驱虫斑鸠菊的低、中、高三个剂量对体内 B、& 淋巴细胞的增殖活性、血清总抗体和抗原特异性抗体含量、3G.& 细胞亚类表达均有明显的抑制作用，对 B淋巴细胞分泌 8(/* 活性也具有明显抑制作用。说明驱虫斑鸠菊对机体体液 免疫和细胞免疫功能都具有明显抑制作用。 关键词：驱虫斑鸠菊；抗体；白细胞介素/*；淋巴细胞亚类；流式细胞仪 !#%& ’ !#&’’()*+&(&,’ -&**. ’( %)# *++,(#
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&\E‘ES- USEa\_ZE[b ?] B_FCE[E?SF> 3RES\Z\ 7\CE)ES\L &\E‘ES- +++*.L 3RESFK 01&%-.%2 B? \cY>?_\ [R\ \]]\)[ ?] [R\ !#’(()∗+,′)’-( .’++/ ?S [R\ E==QS\ ]Q)[E?S% BR\ \]]\)[ ?] !#’&
(()∗+,′)’-( .’++/ ?S [R\ ZY>\\S Z\)_\[E?S ?] 8(/* d\_\ FZZ\ZZ\C ^b N0AO/BC6 ES)?_Y\_F[E?S FSC FS[E^?Cb Y_?CQ)e
[E?S ES [R\ Z\_Q= d\_\ FZZ\ZZ\C ^b H(8D’% UZES- ]>?d )b[?=\[\_ =\[R?CZ [? C\[\)[ 3G$. >b=YR?)b[\ ZQ^)>FZZ \ce
Y_\ZZ ES [R\ Z\_Q= ?] =E)\ !#$%$’(($)*+,’$)’-( .’++/ ESRE^E[\C 8(/* L[R\ [?[F> FS[E^?Cb FSC ZY\)E]E) FS[E^?Cb [?
’041 Y_?CQ)[E?S FSC 3G$. >b=YR?)b[\ ZQ^)>FZZ \cY_\ZZ ?S S?_=F> =?QZ\ ES aEa?% !#$%$’(($)*+,’$)’-( .’++/ )?Q>C
ESRE^E[ [R\ E==QS\ ]QS)[E?S ?S S?_=F> =?QZ\ ES aEa?%
3#4 5’-6&2 !#$%$’(($)*+,’$)’-( .’++/；FS[E^?CbM ES[\_>\QfES/*M >b=YR?)b[\ ZQ^)>FZZ ]>?d )b[?=\[\_
中图分类号：60.* 文献标识码：’
收稿日期：*++$/$$/*+
作者简介I邓瑞春J$.9+/ K，女，博士研究生。电话：+$+/92*:9414
生 物 技 术 通 讯
(HBBH6D 8P &8
生 物 技 术 通 讯
!##(*）由美国 (: 公司生产。
液体闪烁计数仪为 (;<=>5? 公司产品；*)8 培养箱为日
本池本理化工业株氏会社产品；酶联仪为日本 (@/A5B 8CC9 型；流式细胞仪和软件由美国 (: 公司制造。 213 分组与给药 将 (D! ( E < 小鼠随机分成 F 组，每组 29 只G 驱虫斑鸠菊 注射液共设 3 个剂量组，低剂量组（.4A!）每天 HI1C >J E =J， 为患者临床用量的 C 倍；中剂量组（.4A4）每天 2IC >J E =J， 为患者临床用量的 29 倍；高剂量组（.4A+）每天 3C9 >J E =J， 为患者临床用量的 89 倍。临用时用生理盐水配制适当浓度。 每天给药一次，腹腔注射，每次 91C >0。连续用药 29 B，第 22B 摘出眼球放血并处死。正常对照组仅注射生理盐水。 21F 淋巴细胞增殖试验 采用K3+LA#B 参入法K2L。无菌操作取小鼠脾脏，按常规方
法制备脾细胞悬液，调脾细胞浓度为 CM29N E >0，加入 ON 孔板
中，299 !0 E孔，分别加入含 */?D 或 !P% 的不完全 2NF9 培养
基（*/?D 终浓度为 C !J E >0，!P% 终浓度为 C9 !J E >0），每个
稀释度 28 个复孔。3IQ，CR *)8条件下培养 I8 S。培养结束
前 N S 加入 21HCM29F (T E孔K3+LA#B$。最后用多头细胞收集
器收集细胞于 FO 型纤维滤纸上，用液闪仪计数每分钟脉冲数
（）。以各剂量组平均数为指标，进行统计学处理，以 ! 检验
求出 值。
21C .V体内对小鼠血清抗体的影响
采用酶联免疫吸附实验 K873L。&J, 测定程序：将血清稀释一
定倍数以每孔 299 !0 加入 ON 孔板中，FQ孵育过夜，再加入
过氧化物酶标记的羊抗小鼠 &J,，进一步与底物反应，测定
FO9 ?> 吸光度值。&JD、&J4 测定程序：同上将血清稀释一定
倍数以每孔 299 !0 加入 ON 孔板中，FQ孵育过夜，加入兔抗
小鼠 &JD 和兔抗小鼠 &J4 299 !0，3IQ孵育 2 S 后，再加入过
氧化物酶标记的羊抗兔 &J,，进一步与底物反应，测定 FO9
?> 吸光度值。
21N .V体内对 D3IC 免疫 *CI 小鼠血清抗体的影响
采用酶联免疫吸附实验 K873L：用 *CI 小鼠，常规免疫方法，
即第 2 次免疫使用福式完全佐剂，第 8WC 次使用福式不完全
佐剂，最后一次腹腔直接注射抗原进行加强免疫，每次间隔时
间约为 2C B，每次免疫抗原量约为 899 !0 E只鼠。
21I &!A8 活性测定
&!A8 诱生：上述各组动物分别无菌取脾脏，分离成单细
胞悬液，低渗法破坏红细胞，调脾淋巴细胞浓度为 2M29C E >0，
加入 8F 孔板中，每孔 2 >0，再加入含 */?D 的 2NF9 完全培
养液 2 >0 E孔（*/?D 终浓度为 C !J E >0）。培养 FH S。无菌收
集细胞培养上清，2 999 X E >@?，离心 29 >@?。将上清液保存
在A89Q，待测定 &!A8 含量。
&!A8 测定KFL：样品组设原液、8 倍稀释、F 倍稀释 3 个梯度7
每个稀释度设 F 个重复孔。以不加 &!A8 的完全 P4&2NF9 培 养基作为对照；于 ON 孔板中加入 299 !0 上述稀释液。*#!!A 8 细胞在换液后 8 B 才可使用，将细胞从培养瓶中收集起来， 用不含 &!A8 的完全P4&2NF9 培养基洗 8 遍，重悬于完全
P4&2NF9 培养基中，3IQ孵育 39 >@?，再洗一遍，以去除残 余的 &!A8。计数细胞 8M29C E >0。将 299 !0 *#!!A8 细胞加入 已稀释好样品的 ON 孔板中 （8M29F E孔细胞浓度）。3IQ，CR *)8 饱和湿度培养 8F S，加入K3+LA#B，继续培养 8F S。最后
用多头细胞收集器收集细胞于 FO 型纤维滤纸上，液闪仪计数
每分钟脉冲数。
21H 流式细胞仪测定 ( 淋巴细胞表面标志 K2L
无菌操作取小鼠脾脏，研磨脾脏，用 899 目钢网过滤，制
备脾细胞悬液，用 2NF9 无血清培养液冲洗网，将脾细胞悬液
置 29 >0 试管中，离心 8 999 XU>，29 >@?， 沉淀用约 2 >0
2NF9 无血清培养液悬浮。取 21C >0 离心管，加入上述细胞悬
液 912 >0，再加入荧光标记的抗体 29 !0，室温放置 39 >@?。
向上述反应管中加入 21C >0 红细胞裂解液，室温放置 2C
>@?，离心弃上清。再用 2NF9 无血清培养液洗 8 次，每次离心
8 999 X E >@?，29 >@?。加入固定液 91C >0，配成细胞悬液。立
即或次日用流式细胞仪测定结果。
21O 数据处理
用 %/YZ[5X5\*!!]^;_Z 软件系统对流式细胞仪测定的 (
淋巴细胞表面标志的图形及数据进行处理，所得测试结果以
#‘表示，再经 ! 检验比较各组差别。 8 结果 812 .V对小鼠体重的影响 见表 2。对照组在实验过程中体重变化不大，驱 虫斑鸠菊低、中、高三个剂量组用药过程中体重变化 也不明显，说明药物对小鼠生长无不良影响。 818 .V体内对小鼠脾淋巴细胞增殖的影响 驱虫斑鸠菊低、中、高三个剂量组脾脏 #、( 淋巴 细胞增殖过程中 K3+LA#B 参入量比对照组明显降
低，显示驱虫斑鸠菊可抑制小鼠 #、( 淋巴细胞的增
殖。经统计学处理（! 检验）具有非常显著性差异（a
9192）。说明驱虫斑鸠菊对细胞免疫和体液免疫均有
明显抑制作用。
813 .V体内对小鼠血清抗体的影响
采用酶联免疫吸附实验测定驱虫斑鸠菊注射液
处理的 F 组 (D! ( E < 小鼠血清抗体含量，结果见图
2，与对照组相比，驱虫斑鸠菊低、中、高 3 个剂量组
血清 &J,、&J4、&JD 含量均有明显下降，经统计学处
理（Z检验）具有非常显著性差异（Pa9192）。从分子水
平证明了驱虫斑鸠菊对体液免疫有抑制作用。
表 2 驱虫斑鸠菊对小鼠体重的影响 !
组别 % 用药前 用药后第 FB 用药后第 OB
*ZX0
.4A!
.4A4
.4A+
22
22
22
22
2H183‘2122
2I1NN‘213F
2I1CO‘21CC
2I1OF‘21I8
2H18N‘218F
2H1CH‘812C
2I1FC‘818O
2N1HN‘812O
2H183‘8199
2H1IC‘818O
2I12C‘2133
2I1ON‘812F
2HF
!# % 体内对小鼠 1 淋巴细胞分泌 ,23! 活性的
影响
以 *1223!为 ,23!依赖细胞，采用 ’43156 参
入法对驱虫斑鸠菊处理的各组动物脾脏分泌 ,23!
的活性进行测定，结果见图 ’。从图中可见，驱虫斑鸠
菊低、中、高三个剂量组7’483156 参入量（*9:）比对
照组明显降低，经统计学处理（! 检验）具有非常显著
性差异（/00+）。表 ! 显示各实验组所测定的 ,23!
含量，以及高、中、低三个剂量组的抑制率，分别为
!;<、#+<、)0<。显示出明显的剂量效应关系。表明
驱虫斑鸠菊对 1 淋巴细胞分泌 ,23! 活性有明显抑
制作用。
!; %体内对小鼠脾脏 1淋巴细胞分泌 ,23! 活性的影响
实验组 # ABCD$E%F ,23! D! G CHF 抑制率D
:32:3:
:34 # # # # ’;);>!E#;!K+ !(+(;+E);++@@ !+;##+E’’;);@@ +K’(>;E!>’0+@@ !0;)’ +))(; +!;0; +0K#; !; #+ )0 图 +%体内对正常小鼠血清抗体的影响
图 ! %对正常小鼠脾脏分泌 ,23! 的影响
图 ’ % &’ (&)#*+’)!),- ./0123 ’/13 4567 8998
显抑制作用，但不影响小鼠生长发育。本实验结果提
供的证据显示，驱虫斑鸠菊对白癜风的治疗作用，可
能是通过抑制机体体液免疫和细胞免疫，进而降低
机体对自身组织（如黑素细胞）的免疫反应，减少自
身组织的破坏来进行的。驱虫斑鸠菊可使白癜风特
异抗原的抗体活性受到抑制，从而为驱虫斑鸠菊的
临床治疗效果提供了重要的理论依据。
根据资料报道，白癜风患者血清、器官特异性抗
体的阳性率明显增高 :;<=>；体内具有抗黑素细胞的抗
体 :?<2@>A外周血 # 淋巴细胞及其亚群有异常改变 :2;<2B>；
具有典型的自家免疫病特征。另有文献报道:2=>，对朝
鲜人中 ;9 例活动期、泛发白癜风以及 39 例正常人
用流动细胞计数器测定末梢血淋巴细胞，并用 *C2?
单克隆抗体进行评价，结果显示，发病近一年的患者
( 淋巴细胞计数比对照组及病期长的白癜风患者
高。
参考文献
:2> 钱玉昆主编1实用免疫学新技术:4>1北京医科大学中国协和医科
大学联合出版社出版72??;122，2;
:8> 方福德7周吕7丁濂7张德昌1现代医学实验技巧全书（下册）:4>1北
京医科大学中国协和医科大学联合出版社72??;1338
:3> 汪濂主编1现代医学实验方法:4>1 北京医科大学中国协和医科
大学联合出版社7338<3@9，@=3
:@> 李成文编著，现代免疫化学技术:D>1上海科学技术出版社，2??8
:;> !EFGEF H(7 ’/FI0JGI DD1 .KLK0KM/1 NO5L KP KLQ &P KL KRS/FL5GLQ:D>
DH4H72?B=7 83?T28UV 22=3
:W> (ELLEF0E *7*5FELL/ H7 CE XK/ H7 ! #$1 &GYKIEGYE 5GI PKMGKZK[
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