全 文 ：0.9996,表明石斛碱在 0.1125 μg～ 3.6 μg之间具
有良好的线性关系。
2.4 　精密度试验　取上述对照品溶液重复进样 5
次 ,测得石斛碱的峰面积比值(石斛碱峰面积 /内标
物峰面积)的 RSD为 0.73%。
2.5 　稳定性试验　取上述供试品溶液 ,分别在 0
h、1 h、2 h、4h、8 h分别进样 ,测得 8 h内石斛碱的
峰面积比值(石斛碱峰面积 /内标物峰面积)的 RSD
为 1.48%。
2.6 　重现性试验　取同一批号的药材共 5份(浙
江省医学科学院提供),按上述方法制备供试品溶
液 ,依法测得 5份药材中石斛碱的百分含量 , RSD为
1.44%。
2.7 　加样回收率试验　取上述已知含量的药材 5
份 ,精密称定 ,分别精密添加一定量的石斛碱对照
品 ,按供试品溶液制备项下操作 ,计算其平均回收率
为 99.9%, RSD=2.10%。
2.8 　样品测定　按上述方法对金钗石斛药材进行
了含量测定 ,结果见表 1。
　表 1 　金钗石斛中石斛碱的含量
药材来源 浙 040312 浙 031210 沪 021211
石斛碱含量(%) 0.2193 01982 不含石斛碱
3 　讨论
3.1 　目前 《中华人民共和国药典 》所载的 5种石
斛 ,其化学成分和药理活性不尽一致 ,且商品石斛基
原更为混乱 ,严重影响了临床疗效 ,因此我们针对不
同种石斛药材制订相应的有效的质量检测方法显得
尤为必要 。例如 金钗 石斛 (Dendrobium nobile
Lindl.)又名 “扁黄草 ”、“扁草” 、“大黄草 ”,束花石
斛(DendrobiumchrysanthumWal.exLindl.)又名
“黄草石斛 ”,因此市场上两品种常被混为一谈 ,通
称 “黄草” ,故以上实验 ,有的样品中检测不到石斛
碱成分。
3.2　石斛碱作为金钗石斛药材中的特征性成分 ,
现代研究也证实其具有一定的药理活性 ,因此将石
斛碱作为定量指标是合理的 。
3.3　选用的内标物萘可与样品中组分达到完全分
离 ,因此采用内标法测定药材中石斛碱的含量 ,能消
除系统误差 ,实验也证实该方法准确可行。
3.4　金钗石斛的野生资源日益枯竭 ,并已被列为
国家重点保护的珍危物种 ,现人工栽培技术已获成
功。据文献报道 ,金钗石斛茎中生物碱的总含量约
0.3%〔2〕 ,以上测定结果显示 ,栽培品中仅石斛碱含
量即可达 0.2%,因此从药效成分的含量为判断 ,栽
培品有可能替代野生品 。
参　考　文　献
[ 1] ChengXM, etal.StudyprogressoftheDendrobium
plantsinchemicalconstituentsandpharmaceuticalactivi-
ty.NatProdResDev(天然产物研究与开发), 2001, 13
(1):70-74.
[ 2] SongLR.Chineseherbs(中华本草).Shanghai:Shang-
haiScience＆TechnicologyPress, 2000.
(2005-12-14收稿)
菝葜超临界 CO2 萃取物中薯蓣皂苷元的含量测定
华小黎 ,陈东生＊
(华中科技大学同济医学院附属协和医院 ,湖北武汉 430022)
　　关键词　HPLC;超临界流体萃取;菝葜;薯蓣皂苷元
中图分类号:R284.1　　文献标识码:A　　文章编号:1001-4454(2006)04-0399-02
基金项目:湖北省科委重点攻关计划项目资助(编号:2002P1105)作者简介:华小黎 ,女 ,硕士研究生。
　　＊通讯作者:陈东生 ,男 ,主任药师 ,硕士生导师 , Tel:(027)85726077。
　　菝葜(SmilaxchinaL.)系百合科菝葜属植物 ,
其根 、茎 、叶均可入药 ,尤以根茎入药最为常见 。菝
葜根茎主要包含皂苷类 、黄酮类等各种化学成分 ,具
有消肿解毒 、祛风利湿 、抗炎镇痛 、抗肿瘤等药理活
性 〔1〕 ,其制剂主要用于妇科慢性炎性包块 、附件炎
等 ,疗效较好。为提高制剂质量 ,在实验中利用超临
界 CO2流体技术萃取菝葜 ,运用 HPLC法对提取物
中主要化学成分薯蓣皂苷元的含量进行测定 。
1　仪器与试药
Shimadzu高效液相色谱仪(LC-10ATvp泵 , SPD-
·339·中药材第 29卷第 4期 2006年 4月
DOI :10.13863/j.issn1001-4454.2006.04.015
10Avp型紫外检测器);浙大智达 N2000色谱工作
站 。FA1004型电子天平(上海天平仪器厂 )。 JH-
121-50-01型超临界流体萃取仪(武汉景宏高新技术
开发有限公司制造)。
薯蓣皂苷元对照品(中国药品生物制品检定所
提供);药材菝葜(SmilaxchinaL.)采自湖北省大悟
县 ,经武汉协和医院中药鉴定室鉴定 ,经干燥后 ,粉
碎成粗粉 ,过 20目备用 。甲醇 、乙腈为色谱纯 ,水为
重蒸水(自制),乙醇为分析纯。
2 　方法与结果
2.1 　色谱条件与系统适用性实验〔2〕　色谱柱为大
连依利特公司 HypersilODS2柱(4.6mm×250 mm,
5 μm),以乙腈-水(90∶10)为流动相 , 流速为 1.0
ml/min,紫外检测器在检测波长 203 nm,温度为室
温 ,进样量 20 μl。
2.2 　对照品溶液的制备　精密称取薯蓣皂苷元对
照品 10mg;置 2ml量瓶中 ,加甲醇溶解并稀释至刻
度 ,摇匀 ,配制成 5 mg/ml的对照品溶液。
2.3 　供试品溶液的制备　按均匀设计法 U8(84),
分别精密称取 150 g过 20目的菝葜粗粉投入超临
界流体萃取仪 ,当达到所设定的条件时 ,开始循环萃
取 ,同时加入一定量的夹带剂 ,并调节二氧化碳的流
速 ,保持恒温恒压 。 3 h后 ,从解析釜 Ⅰ ,解析釜 Ⅱ
的出料口分别收集各工艺条件下的萃取物〔3〕。取
经过超临界 CO2萃取的样品溶液(共 8组 , 16个样
本),挥干乙醇 ,残渣加甲醇溶解并定容于 5ml容量
瓶中 ,摇匀 ,过 0.45 μm滤膜 ,取续滤液 ,即得。
2.4 　线性范围考察　分别精密吸取 “2.2”项下的
对照品溶液 10μl, 50 μl, 200 μl, 400μl, 500μl于 5
ml量瓶中 ,加甲醇稀释至刻度 ,摇匀 ,得 10.0, 50.0,
200.0, 400.0, 500.0 μg/ml的溶液 , 注入液相色谱
仪 ,记录薯蓣皂苷元色谱峰面积 。以色谱峰面积 Y
对溶液浓度 X(μg/ml)作图。计算回归方程为:Y=
5689.6X-23073, r=0.9998。
说明本方法在 10.0-500.0 μg/ml范围内线性
关系良好。
2.5 　精密试验　取 “2.4”项下浓度为 50 μg/ml的
对照品溶液 ,重复进样 6次 ,记录薯蓣皂苷元色谱峰
面积 ,计算 RSD为 2%。
2.6 　稳定性试验　取 “ 2.3”项菝葜供试品溶液 1
份 ,室温放置 ,在上述色谱条件下 ,分别于 0, 1, 3 d
分别进样 ,计算 RSD=2.1%,结果表明稳定性良好 。
2.7 　回收率试验　取已含量的菝葜粉末 150 g,精
密称定 ,精密加入薯蓣皂苷元对照品溶液(浓度为 2
mg/ml)2 ml,按 “ 2.3”项下方法处理后进样。结果
表明薯蓣皂苷元平均回收率为 98.2%。
2.8　样品测定　在选定的色谱条件下 ,测定超临
界流体萃取不同条件下所得样品溶液中薯蓣皂苷元
的含量(外标法),测定结果见表 1。
　表 1　　超临界 CO2萃取菝葜不同工艺条件下所得
样品中薯蓣皂苷元的测定结果(n=2)
样品号(sampleNo.) 薯蓣皂苷元含量(%) RSD(%)
1 1.65 2.0
2 0.28 2.71
3 1.06 0.75
4 0.33 0.46
5 1.41 1.04
6 1.96 2.6
7 0.22 1.7
8 0.13 2.82
3　讨论
3.1　菝葜的超临界 CO2萃取物中薯蓣皂苷元的含
量最高可达 1.96%, 收率较药典常规酸水解法
(0.02%)和传统氯仿萃取法 〔4〕(最高 1.16%)显著
提高 。且具有生产周期短 ,收率高 ,溶剂无毒不污染
环境 ,可循环使用 ,成本低 ,操作方便等优点 。
3.2　建立 HPLC法直接测定菝葜超临界萃取物中
薯蓣皂苷元的含量 ,不需要再经过其他化学方法处
理。结果表明本实验所建立的含量检测方法灵敏 、
准确 、简便 、快速。
3.3　对于液相色谱条件 ,曾考察了不同比例的乙
腈-水 ,并尝试了不同波长下检测(203 nm、 206 nm
和 210 nm),结果发现选用乙腈 -水(90∶10)为流动
相 ,在 203 nm处检测时 ,峰形及分离度好 , 灵敏度
高。
参 考 文 献
[ 1] 江苏新医学院编.中药大辞典(下册).上海:上海人民
出版社 , 1997:1390.
[ 2] 史会齐 ,李明静 , 宋爱新 ,等 .反相高效液相色谱法测定
山药及其同属植物参薯中薯蓣皂苷元的含量 .药物分
析杂志 , 2004, 24(5):465-467.
[ 3] 葛发欢 , 史庆龙 , 林秀仙 , 等 .超临界 CO2从黄山药中
萃取薯蓣皂素的工艺研究 .中草药 , 2000, 31(3):181-
183.
[ 4] 陈东生 ,吕永宁 , 吕翼 ,等 .菝葜总甾体皂苷元的含量测
定 .中药材 , 2001, 24(2):111-112.
(2005-10-12收稿)
·340· 中药材第 29卷第 4期 2006年 4月