全 文 ：[ 文章编号] 1000-8861(2002)03(S)-0013-04
驱虫斑鸠菊对正常小鼠免疫功能的影响
邓瑞春1 ,周　勇2 ,徐建国2 ,尚　靖2 ,王旭丹1 ,于鲁海2 ,章金刚3
(1.北京中医药大学中西医结合研究所 ,北京 100029;2.新疆自治区人民医院临床药学研究所 ,新疆 乌鲁木
齐 830001;3.军事医学科学院野战输血研究所 ,北京 100850)
[ 摘　要] 　目的　探讨驱虫斑鸠菊对小鼠免疫功能的影响 , 揭示其免疫作用机理。方法　利用[ 3H]-TdR掺入法分别测定
了驱虫斑鸠菊对环胞菌素 A(Con A)诱导的小鼠脾脏 T淋巴细胞和细菌脂多糖(LPS)诱导的B 淋巴细胞增殖活性以及脾脏 T淋
巴细胞分泌白细胞介素-2(IL-2)活性的影响 , 运用酶联免疫吸附试验测定了驱虫斑鸠菊对小鼠血清中抗体活性的影响;采用流
式细胞仪测定脾脏 B淋巴细胞表面抗原 CD19 的表达水平。结果　驱虫斑鸠菊的低 、中 、高 3 个剂量体内对脾脏 T、B 淋巴细胞
的增殖活性 、血清总抗体和针对人 A375 黑素瘤细胞抗原特异性抗体含量 、B 细胞表面抗原 CD19的表达以及对脾脏 T淋巴细
胞分泌 IL-2 活性都具有明显抑制作用。结论　驱虫斑鸠菊对机体体液免疫和细胞免疫功能都具有明显抑制作用。
[ 关键词] 　驱虫斑鸠菊;抗体;白细胞介素-2;流式细胞仪
[ 中图分类号] 　R284.1;R977.9　　　　　[ 文献标识码] 　A
Effects of Vernoniaanthelmintica Willd on the immune function in normal mice
DENG Rui-chun1 ,ZHOU Yong2 ,XU Jian-guo2 ,SHANG Jing2 ,WANG Xu-dan1 ,YU Lu-hai2 ,ZHANG Jin-gang3
(1.Institute of Combination of Chinese Traditional and Western Medicine , Beijing University of Traditional Chinese Medi-
cine , Beijing 100029 , China;2.Institute of Clinical Pharmacy , Xinjiang Uyour City Autonomous Region , Uyour City
830001 , China;3.Department of Blood Biopharmaceuticals &Biotechnology , Beijing Institute of Transfusion Medicine ,
Beijing 100850 , China)
[ 收稿日期] 2001-10-26;[ 修回日期] 2002-04-10
[ 作者简介] 邓瑞春(1961-),女 , 河北遵化市人 , 助理研究员 ,博士 , 主要从事中药免疫药理研究工作。Tel:(010)64286757;
E-mail:DengRC0307@sina.com
[ Abstract] 　Objective　To explore the effect of the Vernoniaanthelmintica willd on the immune function of mice.Methods　The effect
of Vernoniaanthelmintica willd on the spleen T lymphocyte proliferation stimulated by Con A , B lymphocyte proliferation stimulated by LPS and
the spleen T lymphocyte secretion of IL-2 activity were assessed by [ 3H] -TdR incorporation respectively , antibody production in the serum were
assessed by ELISA , spleen B lymphocyte surface antigen (CD19)of mice were assessed by flow cytometry.Results　Vernoniaanthelmintica
willd inhibited spleen T , B lymphocyte proliferation and T lymphocyte secretion of IL-2 activity , the total antibody and specific antibody produc-
tion to human A375 melanoma cell and surface antigen(CD19)of B lymphocyte expression on normal mouse in vivo.Conclusion　Vernoniaan-
thelmintica willd could inhibit the humoral and cellular immunity function on normal mouse.
[ Key words] 　Vernoniaanthelmintica Willd;antibody;interleukin-2(IL-2);flow cytometry
　　白癜风是一种常见病 ,主要表现为皮肤呈斑块
状或片状脱色变白。形态学上可见病损皮肤色素颗
粒减少 ,黑素细胞破坏 、数量减少乃至消失 。对该病
的发病机理至今尚未形成明确的认识 ,现在多数学
者认为该病属自身免疫疾病。驱虫斑鸠菊注射液
(Vernoniaanthelmintica Willd ,VW)是利用科学的方法
从新疆特有的菊科植物———驱虫斑鸠菊的种子提炼
而成的 ,其主要成分为黄酮类物质[ 1, 2] 。经多年临床
应用显示 , 该药对白癜风具有明显治疗效果[ 3 ～ 6] 。
本文从驱虫斑鸠菊注射液对正常小鼠免疫功能的影
响入手 ,研究了该药防治白癜风的免疫机理 ,为该药
的临床应用提供理论依据 。
1　材料与方法
1.1 　实验动物 　Balb c 纯系小鼠 ,雌性 ,体质量
(20±2)g ,购于中国预防医学科学院流行病与微生
物研究所 ,合格证编号为(医动字)第 9901-3058号 。
C57小鼠均购自军事医学科学院实验动物中心 。
1.2　药品 、试剂及仪器 　受试药:驱虫斑鸠菊注射
针剂每毫升相当于 0.25 g 生药 ,由新疆自治区人民
医院临床医学研究所提供 。过氧化物酶标记羊抗鼠
IgG 、过氧化物酶标记兔抗鼠 IgG 购于邦定生物技术
13S　免 疫 学 杂 志　第 18卷　第 3 期　2002年 6 月　　IMMUNOLOGICAL JOURNAL Vol 18 No 3 June 2002
DOI :10.13431/j.cnki.immunol.j.20020154
公司;兔抗小鼠 IgM 、IgA抗体 ,Sigma 公司产品;荧光
标记的羊抗小鼠 CD19(CD19-PE)以及低渗的红细胞
溶解液(RBC),由美国 BD公司生产 。液体闪烁计数
仪 , Beckman 公司生产;CO2 培养箱 ,日本池本理化
工业株氏会社;高速冷冻离心机 , 德国 HERM-
LEZ360K;酶联仪 , 日本 Bio-Rad 2550;流式细胞仪
(Cytometer.FACSCalibur) 和 软 件 为 Softwara:
CELLQuest由美国 BD公司制造。
1.3　分组与给药　将 Balb C小鼠随机分成 4组 ,每
组10 只动物:驱虫斑鸠菊注射液共设 3个剂量组 ,
分别是:低剂量(VM-L)87.5 mg (kg·d)-1 ,为患者临
床用量5倍;中剂量(VM-M)175 mg (kg·d)-1 ,为患者
临床用量 10倍;高剂量(VM-H)350 mg (kg·d)-1 ,为
患者临床用量 20倍。临用时用生理盐水配制适当
浓度 。每天给药1次 ,腹腔注射 ,每次 0.5 mL。连续
用药 10 d ,第 11天摘出眼球放血并处死。正常对照
组仅注射生理盐水。
1.4　淋巴细胞增殖试验　参照参考文献[ 7] , 采
用3H-TdR掺入法进行。
1.5　驱虫斑鸠菊体内对小鼠血清抗体的影响　参
照参考文献[ 8] ,采用酶联免疫吸附实验。
1.6　驱虫斑鸠菊体内对 A375抗原免疫的 C57小鼠
血清抗体的影响　同上参照参考文献[ 8] ,采用酶联
免疫吸附实验测定。利用 C57 小鼠 ,采用常规免疫
方法 ,即第 1次免疫使用福式完全佐剂 ,第 2 ～ 5 次
使用福式不完全佐剂 ,最后 1次腹腔直接注射抗原
进行加强免疫 ,每次间隔时间约为 15 d ,每次免疫抗
原量约为 50μg 只鼠 。末次免疫后 7 d眼动脉放血 。
收集血清待测。
1.7　IL-2活性测定
1.7.1　IL-2诱生:上述各组动物分别无菌取脾脏 ,
分离成单细胞悬液 ,低渗法破坏红细胞 ,调脾淋巴细
胞浓度为 1×105 mL ,加入 24孔板中 ,每孔 1 mL ,
再加入含 ConA 的 RPMI 1640 完全培养液 1 mL 孔
(ConA终浓度为 5 μg mL)。培养 48 h。无菌收集细
胞培养上清液 ,1 000 r min ,离心 10 min。将上清液
保存在-20 ℃,待测定 IL-2含量。
1.7.2　IL-2测定:样品组设原液 、2倍稀释 、4 倍稀
释3个梯度;每个稀释度设 4个重复孔 。以不加IL-2
的完全 RPMI1640培养基作为对照;于 96 孔板中加
入100μL 上述稀释液。CTLL-2细胞在换液后 2 d才
可使用 ,将细胞从培养瓶中收集起来 ,用不含 IL-2的
完全 RPMI 1640 培养基洗 2 遍 , 重悬于完全
RPMI 1640培养基中 ,37 ℃孵育30 min ,再洗 1遍 ,以
去除残余的 IL-2。计数细胞 2×105 mL。将 100 μL
CTLL-2细胞加入已稀释好样品的 96孔板中(2×104
孔细胞浓度)。37 ℃,5% CO2 饱和湿度培养 24 h ,
加入3H-TdR ,继续培养 24 h 。最后用多头细胞收集
器收集细胞于 49型纤维滤纸上 ,液闪仪计数每分钟
脉冲数 。
1.8　流式细胞仪测定 B 淋巴细胞表面　抗原采用
参考文献[ 7]方法进行 。
1.9　数据处理　用Software:CELLQuest软件系统对
流式细胞仪测定的 B淋巴细胞表面抗原的图形及数
据进行处理 ,所得测试结果以 表示 ,再用 t 检验比
较各组之间差别 。
2　结果
2.1　驱虫斑鸠菊体内对小鼠脾淋巴细胞增殖的影
响　由图 1 可见:与对照组相比 , 驱虫斑鸠菊低
(VM-L)、中(VM-M)、高(VM-H)3个剂量组对 Con A
刺激的小鼠脾脏 T 淋巴细胞增殖反应和 LPS刺激的
B淋巴细胞增殖反应具有明显抑制作用 ,经统计学
处理(t检验)具有非常显著性差异(P<0.01),说明
驱虫斑鸠菊对正常小鼠细胞免疫和体液免疫均有明
显抑制作用 。
图 1　驱虫斑鸠菊对小脾脏 T、B 淋巴细胞增殖的
影响
Fig 1　Effect of vernoniaanthelmintica willd on T.B
cell proliferation of spleen in mice
2.2　驱虫斑鸠菊体内对小鼠血清抗体的影响 　采
用酶联免疫吸附试验测定驱虫斑鸠菊注射液处理的
3组 Balb C 小鼠血清抗体含量 ,结果见图 2 ,从图中
结果可见 ,与对照组相比 , VM-L 、VM-M 、VM-H 3 个
剂量组血清 IgG 、IgM 、IgA 含量均有明显下降 ,经统
计学处理(t检验)具有非常显著性差异(P<0.01)。
图 2　驱虫斑鸠菊对正常小鼠血清抗体活性的影响
Fig 2　Effect of Vernoniaanthelmintica willd on the activity of
antibody in normal mice
14S 第 18卷　　　　　　　　　　　　　　　免 疫 学 杂 志　　　　　　　　　　　　　　　　2002 年 6月
2.3　驱虫斑鸠菊体内对 A375抗原免疫小鼠血清抗
体的影响　以人 A375黑素瘤细胞蛋白作为抗原 ,免
疫C57小鼠 ,首先刺激其产生抗体 ,然后按 1.3的方
法分组与给药 ,再按 1.5的酶联免疫吸附试验 ,测定
驱虫斑鸠菊对正常小鼠血清总 IgG 和针对人 A375
黑素瘤细胞抗原特异的 IgG活性的影响 。从图 3可
见 ,与对照组相比较 ,VM-L、VM-M 、VM-H的总 IgG和
针对A375特异抗原 IgG活性均明显下降 ,经统计学
处理(t检验)具有非常显著性差异(P<0.01),说明
驱虫斑鸠菊即可以对总 IgG发挥作用 ,也可以对人
A375黑素瘤细胞特异抗原 IgG发挥作用。
图 3　驱虫斑鸠菊对人 A375黑素瘤细胞免疫小
鼠血清 IgG活性影响
Fig 3　Effect of vernoniaanthelmintica willd on the
activity of IgG in mice immuned by A375 antigen
2.4　驱虫斑鸠菊体内对小鼠 T 淋巴细胞分泌 IL-2
活性的影响　以 CTLL-2作为测定 IL-2活性的依赖
细胞株 ,采用3H-TdR掺入法对驱虫斑鸠菊处理的各
组动物脾脏 T 淋巴细胞分泌的 IL-2活性进行测定 ,
结果见图 4 。从图中可见 ,VM-L 、VM-M 、VM-H 3 个
剂量组3H-TdR掺入量(cpm)比对照组明显降低 ,经
统计学处理(t 检验)具有非常显著性差异(P <
0.01)。表 1 显示各实验组 IL-2 含量 ,以及 VM-L 、
VM-M 、VM-H 3个剂量组的抑制率 ,可见 VM-L 、VM-
M 、VM-H的抑制率分别为 26%、41%和 50%。显示
出明显的剂量效应关系。表明驱虫斑鸠菊对小鼠脾
脏T 淋巴细胞分泌 IL-2活性有明显抑制作用 。
图 4　驱虫斑鸠菊对正常小鼠脾脏 IL-2活性影响
Fig 4　Effect of vernoniaanthelmintica willd on T.B cell
proliferation of spleen in mice
　表 1　驱虫斑鸠菊体内对小鼠脾脏 T 淋巴细胞分泌 IL-2
活性的影响
　Tab 1　Effect of Vernoniaanthelmintica Willd on mice spleen T
lymphocyte secretion of IL-2
groups n cpm( x±s) IL-2 (u·mL-1)
rate of
Inhibiti
on (%)
control 4 36569.2±4628.1 206.53
VM-L 4 27176.1±561.1 ＊ 155.76 26
VM-M 4 21644.1±3365.6＊ 126.06 41
VM-H 4 18379.6±2930.1＊ 108.46 50
　　＊ P<0.01 , compared with cont rol
2.5　驱虫斑鸠菊对 B淋巴细胞表面抗原(CD19)活
性的影响　图 5为采用流式细胞仪测定的 CD19 活
性 ,从图中可见 ,驱虫斑鸠菊处理的 3个剂量组荧光
强度比对照组明显降低 ,显示该药对 B细胞功能具
有明显抑制作用 ,进而抑制体液免疫功能 。
图 5　驱虫斑鸠菊体内对正常小鼠 CD19 活性
的影响
Fig 5　Effect of vernoniaanthelmintica willd on the
activity of CD19 in normal mice in vivo
3　讨论
本文从免疫细胞到免疫分子 ,比较系统研究了
驱虫斑鸠菊对小鼠免疫功能的影响 ,结果显示:采用
淋巴细胞转化试验(3H-TdR掺入法),测定药物对脾
脏 T 、B淋巴细胞增殖活性影响 ,显示驱虫斑鸠菊低 、
中 、高 3个剂量对 Con A诱导的小鼠脾脏 T 淋巴细
胞增殖反应和 LPS 诱导的B淋巴细胞增殖反应具有
明显抑制作用;以 CTLL-2 作为依赖细胞株 , 采
用3H-TdR掺入法测定了小鼠脾脏 T 淋巴细胞分泌
IL-2活性 ,显示驱虫斑鸠菊可明显抑制 T 淋巴细胞
的分泌活性;采用酶联免疫吸附试验测定小鼠血清
抗体 ,显示驱虫斑鸠菊对小鼠血清 IgG 、IgM 、IgA 含
量有明显抑制作用;采用流式细胞仪测定 B 细胞表
面抗原 ———CD19活性 ,显示驱虫斑鸠菊各处理组比
对照组明显降低 。另外 ,本实验还采用先用人 A375
黑素瘤细胞蛋白抗原进行免疫 ,诱导机体产生对应
于 A375抗体 ,然后用驱虫斑鸠菊加以处理 ,从所测
定结果观察到 ,驱虫斑鸠菊不仅可以使正常小鼠血
清总 IgG含量降低 ,而且 ,可以使针对 A375的特异
15S第 3 期　　　　　　　　　　　邓瑞春 , 等.驱虫斑鸠菊对正常小鼠免疫功能的影响
性 IgG水平降低 ,而且经过我们进一步研究 ,这些抗
体有针对白癜风抗原的抗体。
据文献报道 ,白癜风患者血清 、器官特异性抗体
的阳性率明显增高[ 9 , 10] ;体内具有抗黑素细胞的抗
体[ 11 ～ 13] ;外周血 T 淋巴细胞及其亚群有异常改
变[ 14 , 15] ;具有典型的自身免疫病特征。另有文献报
道[ 16]对朝鲜人中 50 例活动期 、泛发白癜风以及
30例正常人用流式细胞仪测定末梢血淋巴细胞 ,并
用CD19 单克隆抗体进行评价 , 结果显示 , 发病近
1年的患者 B淋巴细胞计数比对照组及病期长的白
癜风患者高 ,说明白癜风的发病与免疫系统有密切
关系 。本研究提示:驱虫斑鸠菊可明显抑制正常小
鼠免疫功能;驱虫斑鸠菊注射液对白癜风的治疗作
用 ,可能是通过抑制机体体液免疫和细胞免疫 ,降低
机体对自身组织(如黑素细胞)的免疫反应 ,减少自
身组织的破坏来发挥作用 ,特别是驱虫斑鸠菊可使
针对人 A375黑素瘤细胞蛋白抗原的特异抗体活性
受到抑制 ,从而为驱虫斑鸠菊的临床治疗效果提供
了重要的理论依据。另据报道 ,驱虫斑鸠菊对机体
免疫系统的抑制作用不属于一般性的淋巴细胞毒性
作用 。有关研究结果将在其他文章报道 。
[参考文献]
[ 1] 　苏来曼·哈力克 , 艾合麦提·默罕穆德 , 敏　德.维吾尔
药驱虫斑鸠菊注射液总黄酮含量测定[ J] .药物分析杂
志 , 1996 , 16(5):337-338.
[ 2] 　周晓英 ,胡晓菁 , 田树革 ,等.维药驱虫斑鸠菊果实几各
剂型中化学成分研究[ J] .中国民族民间医药杂志 ,
2000 , 43(2):101-102.
[ 3] 　朱铁君 ,张志礼 , 曹仁烈 ,等.复方驱虫斑鸠菊搽剂治疗
白癜风[ J] .中华皮肤科杂志 , 1998 , 31(6):388.
[ 4] 　石得仁 , 茹　仙 , 刘昶时.白癜风患者发内微量元素测
定及驱虫斑鸠菊治疗白癜风[ J] .中华皮肤科杂志 ,
1989 , 22(5):326-327.
[ 5] 　程运乾 ,胡　毅 , 刘爱琴.驱虫斑鸠菊等综合疗法治疗
白癜风 329 例疗效分析[ J] .中国中西医结合杂志 ,
1987 , 7(6):350.
[ 6] 　蔡正华.驱虫斑鸠菊和消白丸治疗白癜风[ J] .临床研
究陕西中医函授 , 2000 , 116(6):41-42.
[ 7] 　钱玉昆 , 殷金珠.实用免疫学新技术[ M] .北京:北京医
科大学中国协和医科大学联合出版社出版 , 1995.11-
23.
[ 8] 　方福德 , 周　吕 , 丁　濂 , 等.现代医学实验技巧全书
(下册)[ M] .北京:北京医科大学中国协和医科大学联
合出版社 , 1995.320-340.
[ 9] 　Betterle C , Caretto A , De Zio A , et al.Incidence and signifi-
cance of organ-specific autoimmune disorders(clinical , latent
or only autoantibodies)in patients with vitiligo [ J] .Dermato-
logica , 1985 , 171(6):419-423.
[ 10] Betterle C , Del Prete GF , Peserico A , et al.Autoantibodies
in vitiligo [ J] .Arch Dermatol , 1976 , 112(9):1 328.
[ 11] Naughton GK , Eisinger M , Bystryn JC.Antibodies to nor-
mal human melanocytes in vitiligo [ J] .J Exp Med , 1983 ,
158(1):246-251.
[ 12] Naughton GK , Eisinger M , Bystryn JC.Detection of antibod-
ies to melanocytes in vitiligo by specific immunoprecipita-
tion [ J] .J Invest Dermatol , 1983 , 81(6):540-542.
[ 13] Naughton GK , Reggiardo D , Bystryn JC.Correlation between
vitiligo antibodies and extent of depigmentation in vitiligo [ J] .
J Am Acad Dermatol , 1986 , 15(5 Pt 1):978-981.
[ 14] Soubiran P , Benzaken S , Bellet C , et al.Vitiligo:peripheral
T cell subset imbalance as defined by monoclonal anti-
bodies [ J] .Br J Dermatol , 1985 , 113(Suppl):28 124-28
127.
[ 15] Halder RM , Walters CS , Johnson BA , et al.Aberrations in
T lymphocytes and natural killer cells in vitiligo:a flow cyto-
metric study [ J] .J Am Acad Dermatol , 1986 , 14(5 Pt 1):
733-737.
[ 16] Hann SK , Park YK , Chung KT , et al.Peripheral blood lym-
phocyte imbalance in Koreans with active vitiligo [ J] .Int J
Dermatol , 1993 , 32(4):286-289.
(本文编辑　朱健利)
16S 第 18卷　　　　　　　　　　　　　　　免 疫 学 杂 志　　　　　　　　　　　　　　　　2002 年 6月