全 文 ：网络出版时间:2011 － 12 － 26 12:42 网络出版地址:http:/ /www． cnki． net /kcms /detail /34． 1086． R． 20111226． 1242． 004． html
菝葜治疗便秘型肠易激综合征作用机制的实验研究
马腾飞，王业秋，张 宁，刘 影，李铁男
(黑龙江中医药大学附属第一医院消化科，黑龙江 哈尔滨 150040)
doi:10． 3969 / j． issn． 1001 － 1978． 2012． 026．
文献标识码:A 文章编号:1001 － 1978(2012)01 － 0109 － 06
中国图书分类号:R-332;R282． 71;R442． 2;R574． 620． 531
摘要:目的 研究菝葜治疗便秘型肠易激综合征的疗效及作
用机制。方法 用冰水灌胃法复制大鼠便秘型肠易激综合
征模型，将造模成功大鼠分为模型组、菝葜提取物高、中、低
剂量组(浓度依次为 8、4、2 g·ml －1，按生药量计)、阳性对照
组，另设空白对照组。灌胃给药 3 周后，酶免法测定大鼠血
清 5-HT和血浆 SS、SP 含量的变化，观察菝葜提取物对大鼠
收稿日期:2011 － 09 － 23，修回日期:2011 － 10 － 26
基金项目:教育部“春晖计划”资助项目(No Z2008-1-15014)
作者简介:马腾飞(1979 －) ，男，硕士生，研究方向:中医内科病，E-
mail:543665513@ qq． com;
李铁男(1954 －) ，男，教授，硕士生导师，研究方向:中医
内科病，通讯作者，E-mail:litienan5555@ 163． com
结肠 5-HT、SP、SS和脊髓 SP免疫组化染色的影响，以及对大
鼠结肠 MC甲苯胺蓝法染色的影响。结果 与模型组相比，
菝葜提取物低剂量组能够降低模型大鼠血清 5-HT 和血浆
SS含量(P ＜ 0. 05) ;能够升高模型大鼠血浆 SP 的含量(P ＜
0. 05) ;能够升高模型大鼠结肠 SS、SP和脊髓 SP免疫组化染
色的平均灰度值(P ＜ 0. 05) ;能够升高模型大鼠结肠 5-HT
免疫组化染色平均灰度值(P ＜ 0. 01) ;并且能够减少模型大
鼠结肠MC计数(P ＜ 0. 05)。结论 菝葜对便秘型肠易激综
合征模型大鼠有明显的治疗作用，其作用机制可能是通过调
整模型大鼠血清 5-HT，血浆 SS、SP，结肠 5-HT、SP、SS、MC，
脊髓 SP等来实现的。
关键词:菝葜;便秘型肠易激综合征;5-羟色胺;生长抑素;P
物质;肥大细胞
肠易激综合征(irritablebowel syndrome，IBS) ，
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The effects of SHP-2 on proliferation of gastric cancer cells
WANG Zhao，ZHANG Li-jing，HOU Yuan-yuan，XU Chang-qing，TIAN Ye，ZHANG Li
(Dept of Pathophysiology，Harbin Medical University，Harbin 150086，China)
Abstract:Aim To investigate the effect of SHP-2 on
cell proliferation． Methods The recombination ade-
novirus Ad-GFP (GFP group) ，Ad-GFP-SHP-2 (WT
group)was transfected into human gastric carcinoma
SGC-7901 cells． GFP and SHP-2 expression was de-
tected by fluorescence microscope and Western blot，
respectively． Colony formation assay was used to deter-
mine anchorage-independent growth and proliferation of
gastric cancer cells which were transfected with the vi-
ruses or exposed to a SHP-2 inhibitor-NSC-87877． Re-
sults When the multiplicity of infection (MOI)was
150，transfection efficiency was more than ninety per-
cent． SHP-2 was overexpressed in the WT group． The
numbers of colonies in WT group were more than those
in either Control 1 or GFP group(P ＜ 0. 05)． The col-
ony numbers in NSC-87877 group were more than that
in Control 2 group(P ＜ 0. 05)． Conclusion SHP-2
promotes proliferation of gastric cancer SGC-7901
cells．
Key words:SHP-2;SGC-7901 cells;cell prolifera-
tion;NSC-87877;plate colony formation;soft agar col-
ony formation
·901·中国药理学通报 Chinese Pharmacological Bulletin 2012 Jan;28(1) :109 ～ 14
是一种非器质性肠道功能紊乱性疾病，以腹痛或腹
部不适同时伴排便习惯及大便性状改变为主要症
状。传统医学认为 IBS 属于腹痛、泄泻、便秘范
畴［1］。近年来利用中医中药对 IBS的临床治疗取得
了很大的进展，在改善症状上疗效显著，且毒副作用
小。中药菝葜(Smilax China L)在民间应用历史悠
久，临床上常用于治疗痢疾、腹泻、消化不良等。但
有关菝葜在治疗消化系统疾病的实验研究较少，而
在肠易激综合征药物治疗的实验研究中是以腹泻型
肠易激综合征(D-IBS)的研究居多，对便秘型肠易
激综合征(C-IBS)治疗药物的研究很少。本实验通
过冰水灌胃法建立大鼠 C-IBS 模型，从血液生化及
肠道病理改变等方面探讨菝葜治疗 C-IBS 的作用机
制。
1 材料与方法
1． 1 材料
1． 1． 1 动物 SD 大鼠，♀♂各半，体质量 180 ～
220 g，由黑龙江中医药大学动物研究中心提供(动
物合格证号:SCXK黑 2008004)。
1． 1． 2 药物及试剂 菝葜(北京同仁堂制药集团
哈尔滨药店，经黑龙江中医药大学陈孝忠副教授鉴
定) ，将菝葜粗末按照 1 ∶ 10 的料液比浸泡在 70%
乙醇中 72 h后超声提取，提取液过滤后减压干燥得
浸膏，上 D101 大孔树脂柱进行分离纯化，得 50%乙
醇大孔树脂洗脱液，干燥、粉碎得固体粉末，置 4℃
冰箱保存，临用前用蒸馏水配制成浓度为 2 g /ml
(低剂量组)、4 g /ml(中剂量组)、8 g /ml(高剂量
组)混悬液(按生药量计) ;0. 9% NaCl注射液(吉林
省广春药业有限公司) ;西沙必利片(山东龙力药业
有限公司，5 mg /片) ，临用前蒸馏水配制成浓度为
0. 4 g·L －1的混悬液;大鼠 5-HT、SS、SP酶联免疫吸
附法测定试剂盒(南京建成生物工程研究所) ;兔抗
鼠 5-HT、SS、SP、多克隆一抗(北京博奥森生物技术
有限公司)、二抗为 PV6001 试剂盒(北京中山生物
技术有限公司) ;其他试剂为分析纯。
1． 1． 3 仪器 KQ5200 型超声波清洗器(昆山市超
声仪器有限公司) ;RE5220 旋转蒸发仪(上海亚荣
生化仪器厂) ;Multiskan MK3 酶标仪(热电上海仪
器有限公司) ;HF-90 CO2 培养箱(上海智成分析仪
器有限公司) ;TGL-16G-C 高速冷冻离心机(上海安
亭科学仪器厂) ;2135 型切片机(德国莱卡) ;美国
moticam3000 显微摄影成像系统;电热恒温箱(上海
一恒) ;医用微波炉。
1． 2 方法
1． 2． 1 模型的建立 用冰水灌胃法建立 C-IBS 模
型［2］，大鼠单笼独立饲养，每天灌胃给予 0 ～ 4℃生
理盐水 2 ml，造模 14 d，观察 14 d(造模成功的标准
为大便干硬，大便含水量降低)。
1． 2． 2 分组及给药 造模成功后，将模型大鼠随机
分成模型组、阳性对照组、菝葜提取物高、中、低剂量
组，8 只 /组。另设空白组 8 只。各给药组按体重 20
ml·kg －1灌胃给药，模型组和空白组同步给予生理
盐水，按体重 20 ml·kg －1。灌胃给药 3 周开始检测
指标。
1． 2． 3 指标测定 末次给药结束 6 h 后，10%水合
氯醛麻醉，腹主动脉取血、取结肠、取脊髓腰膨大段。
酶联免疫吸附法检测给药后各组大鼠血清中 5-HT
含量、血浆中 SS、SP 含量;对各组大鼠进行结肠 5-
HT、SS、SP、脊髓腰膨大段 SP的免疫组化染色，moti-
cam3000 显微摄影成像系统于 400 倍视野下摄影，
每组随机选取 10 个视野，用 Motic image 3. 2 图像分
析软件进行分析，计算平均灰度值(0 ～ 255 之间) ;
对各组大鼠结肠 MC 进行甲苯胺蓝染色，用 moti-
cam3000 显微摄影成像系统于 400 倍视野下摄影，
每组随机选取 3 个视野，用 Motic image 3. 2 图像分
析软件进行计数，取平均值，记录 MC 每视野数目。
观察菝葜提取物对模型组大鼠各个指标的影响，与
空白组和模型组相比较。操作严格按照说明书进
行。
1． 3 统计学处理 用 SPSS 19. 0 统计软件进行统
计学处理，计量资料用 珋x ± s 表示，组间比较采用单
因素方差分析。
2 结果
2． 1 菝葜提取物对 C-IBS 大鼠血清 5-HT 含量的
影响 结果见 Tab 1。与空白组相比，模型组血清 5-
HT含量升高(P ＜ 0. 01) ;与模型组相比，各给药组
血清 5-HT含量均呈下降趋势，其中，阳性对照组和
菝葜提取物低剂量组降低(P ＜ 0. 05) ;菝葜提取物
低剂量组与阳性对照组作用相当。
Tab 1 Influence of extract of Smilax China L． on content
of 5-HT，SP，SS in blood of rats suffering from C-IBS(珋x ± s，n = 8)
Group
SS content
/ng·L －1
5-HT content
/ng·L －1
SP content
/ng·L －1
Blank control group 121． 12 ± 6． 34 158． 31 ± 14． 47 147． 30 ± 9． 61
Model group 131． 65 ± 6． 12△△ 184． 49 ± 2． 90△△ 135． 98 ± 7． 93△△
Active control group 122． 97 ± 3． 96＊＊ 174． 18 ± 4． 74* 145． 92 ± 3． 37*
High dose group 129． 47 ± 8． 76 183． 03 ± 5． 43 136． 12 ± 6． 51
Middle dose group 129． 15 ± 5． 26 182． 91 ± 3． 49 134． 72 ± 5． 70
Low dose group 122． 80 ± 3． 95＊＊ 175． 03 ± 8． 46* 144． 16 ± 4． 27*
△△P ＜0. 01 vs blank control group;* P ＜0. 05，＊＊P ＜0. 01 vs model group
·011· 中国药理学通报 Chinese Pharmacological Bulletin 2012 Jan;28(1)
与空白组相比，模型组血浆 SS 含量升高(P ＜
0. 01) ;与模型组相比，各给药组血浆 SS 含量均呈
下降趋势，其中阳性对照组和菝葜提取物低剂量组
降低(P ＜ 0. 01) ;菝葜提取物低剂量组与阳性对照
组作用相当。
与空白组相比，模型组血浆 SP 含量下降(P ＜
0. 01) ;与模型组相比，除菝葜提取物中剂量组外各
给药组血浆 SP含量均呈上升趋势，而菝葜提取物中
剂量组血浆 SP含量则减少，其中阳性对照组和菝葜
提取物低剂量组升高(P ＜ 0. 05)、菝葜提取物中剂
量则降低但差异无显著性(P ＞ 0. 05) ;菝葜提取物
低剂量组与阳性对照组作用相当。
2． 2 菝葜提取物对 C-IBS 大鼠结肠 5-HT、SP、SS
免疫组化染色的影响 结果见 Tab 2。与空白组相
比，模型组结肠 5-HT 免疫组化染色的平均灰度值
下降(P ＜ 0. 01) ;与模型组相比，各给药组免疫组化
染色的平均灰度值均呈上升趋势，其中阳性对照组
和菝葜提取物低剂量组升高(P ＜ 0. 01) ;菝葜提取
物低剂量组与阳性对照组作用相当。
Tab 2 Influence of extract of Smilax
China L． on average gray value of immunohistochemical
staining of C-IBS rats colon(珋x ± s，n = 8)
Group 5-HT SP SS
Blank control group 169． 70 ± 3． 59 177． 80 ± 7． 04 166． 70 ± 4． 83
Model group 150． 90 ± 11． 11△△165． 40 ± 11． 91△△ 155． 20 ± 9． 93△△
Active control group 167． 60 ± 11． 4＊＊ 173． 80 ± 6． 34* 165． 50 ± 5． 97＊＊
High dose group 154． 10 ± 4． 36 171． 20 ± 3． 58 156． 10 ± 11． 41
Middle dose group 157． 30 ± 8． 81 168． 00 ± 7． 11 157． 60 ± 8． 54
Low dose group 162． 50 ± 5． 84＊＊ 173． 60 ± 6． 93* 164． 00 ± 4． 94*
△△P ＜0. 01 vs blank control group;* P ＜0. 05，＊＊P ＜0. 01 vs model group
与空白组相比，模型组结肠 SP免疫组化染色的
平均灰度值下降(P ＜ 0. 01) ;与模型组相比，各给药
组免疫组化染色平均灰度值均呈上升趋势，其中阳
性对照组和菝葜提取物低剂量组升高(P ＜ 0. 05) ;
菝葜提取物低剂量组与阳性对照组作用相当。
与空白组相比，模型组结肠 SS免疫组化染色的
平均灰度值下降(P ＜ 0. 01) ;与模型组相比，各给药
组免疫组化染色平均灰度值均呈上升趋势，其中，阳
性对照组和菝葜有效成分低剂量组升高(P ＜ 0. 01，
P ＜ 0. 05) ;菝葜提取物低剂量组与阳性对照组作用
相当。
免疫组化染色的平均灰度值与其染色强度的表
达成反比，即平均灰度值越大染色强度越小，平均灰
度值越小，反而染色强度越大。本实验中结肠 5-
HT、SS、SP的免疫组化染色散在的表达在肠黏膜胞
质中，表达的强度呈淡黄、黄色或棕黄色。给药 3 周
后，模型组大鼠结肠 5-HT、SS、SP 免疫组化的染色
强度高于菝葜提取物低剂量组，具有统计学意义，说
明了菝葜有效成分低剂量组可以降低模型大鼠结肠
5-HT、SS、SP免疫组化染色的表达。见 Fig 1、2、3。
Fig 1 Influence of extract of Smilax China L． on expression
of immunohistochemical staining of 5-HT of C-IBS rats colon
Fig A ～ F:blank control group，model group，active control group，
high dose group，middle dose group，low dose group
Fig 2 Influence of extract of Smilax
China L． on expression of immunohistochemical
staining of substance P of C-IBS rats colon
Note see Fig 1．
·111·中国药理学通报 Chinese Pharmacological Bulletin 2012 Jan;28(1)
Fig 3 Influnece of extract of Smilax China L． on expression
of immunohistochemical staining of SS of C-IBS rats colon
Note see Fig 1．
2． 3 菝葜提取物对 C-IBS 大鼠脊髓 SP 免疫组化
染色的影响 结果见 Tab 3。与空白组相比，模型组
脊髓 SP 免疫组化染色的平均灰度值下降(P ＜
0. 01) ;与模型组相比，各给药组脊髓 SP 免疫组化
染色的平均灰度值呈上升趋势，其中阳性对照组和
菝葜提取物低剂量组脊髓 SP 免疫组化染色的灰度
平均值升高(P ＜ 0. 05) ;菝葜提取物低剂量组与阳
性对照组作用相当。
Tab 3 Influence of extract of Smilax
China L． on average gray value of immunohistochemical
staining of C-IBS rats spinal cord(珋x ± s，n = 8)
Group SP
Blank control group 166． 90 ± 5． 59
Model group 148． 60 ± 14． 7△△
Active control group 158． 30 ± 7． 94*
High dose group 148． 90 ± 8． 63
Middle dose group 148． 91 ± 8． 64
Low dose group 158． 20 ± 8． 34*
△△P ＜ 0. 01 vs blank control group;* P ＜ 0. 05 vs model group
本实验中脊髓 SP 的免疫组化染色散在的表达
在肠粘膜胞质中，表达的强度呈淡黄、黄色或棕黄
色。给药 3 周后，模型组大鼠脊髓 SP免疫组化的染
色强度高于低剂量组，具有统计学意义，说明了菝葜
有效成分低剂量组可以降低模型大鼠脊髓 SP 免疫
组化染色的表达。见 Fig 4。
Fig 4 Influence of extract of Smilax China L． on expression
of immunohistochemical staining of SP of C-IBS rats spinal cord
Note see Fig 1．
2． 4 菝葜提取物对 C-IBS大鼠结肠 MC 计数的影
响 结果见 Tab 4。与空白组相比，模型组结肠 MC
计数 /视野升高(P ＜ 0. 01) ;与模型组相比，各给药
组 MC计数 /视野计数均呈下降趋势，其中阳性对照
组、菝葜提取物低剂量组 MC 计数 /视野降低(P ＜
0. 01，P ＜ 0. 05) ;菝葜提取物低剂量组与阳性对照
组作用相当。
Tab 4 Influence of extract of Smilax China L． on counting
of MCof C-IBS rats colon(珋x ± s，n = 8)
Group Counting of MC(Pcs /vision)
Blank control group 5． 23 ± 0． 61
Model group 6． 13 ± 0． 91△△
Active control group 5． 30 ± 0． 42＊＊
High dose group 6． 08 ± 0． 16
Middle dose group 6． 07 ± 0． 23
Low dose group 5． 47 ± 0． 08*
△△P ＜ 0. 01 vs blank control group;* P ＜ 0. 05，＊＊ P ＜ 0. 01 vs
model group
3 讨论
菝葜是被子植物门百合科菝葜属植物，通常以
根茎入药，其功效是健脾益气，温肠止泻。中医对于
菝葜在治疗风湿方面的论述较多，这一方面的作用
也已被人所公认。近年来，关于菝葜治疗泄泻、便秘
等脾胃病方面的论述日益增多。本课题组自拟枳术
菝葜饮治疗老年慢性功能性便秘取得较好疗效［3］。
·211· 中国药理学通报 Chinese Pharmacological Bulletin 2012 Jan;28(1)
但只是涉及到了菝葜复方的临床观察，并未涉及菝
葜提取物对 C-IBS治疗作用机制的研究。
另外本课题组发现，在色谱仪:美国 DIONEX
P680 高效液相色谱仪，色谱柱:Venusil，XBP C18(5
μm，4. 6 mm ×250 mm，博纳爱杰尔科技有限公司) ;
流动相:乙腈 －水溶液(0 ～ 60 min 乙腈比例 5% ～
100%) ;检测波长为 290 nm;柱温:25℃;流速:1 ml
·min －1;进样量:20 μl的色谱条件下对菝葜提取物
的 20%醇、50%醇、80%醇洗脱部位进行分析，发现
菝葜总提取物 20%、50%、80%醇大孔树脂洗脱部
位 3 者组分交叉较少，分离较完全，通过标准品落新
妇苷进行对比，落新妇苷主要存在于 50%醇大孔树
脂洗脱部位中(Fig 5)。而近年来研究表明，落新妇
苷具有多种生物学活性，包括镇痛、消炎、杀菌、免疫
等［4 － 6］，而这些药理活性正好逐一针对着 IBS 的内
脏高敏性、炎症、神经免疫机制和肠道菌群失调等各
种发病机制。因此我们初步推测落新妇苷可能为菝
葜提取物中治疗 C-IBS的单体成分之一。
Fig 5 Graph of high performance liquid
chromatography(HPLC)of elution fraction group which
is separated by different macroporous resin exchanger
purification method from total extract of Smilax China L
C-IBS 是一种较常见的消化系统疾病，其发病
机制尚不十分明确。越来越多的研究表明，C-IBS
的发生可能与神经递质、胃肠激素、免疫及神经系统
的平衡性失调有关。其中 5-HT、SP、SS、MC 可能参
与到了 IBS整个病理生理过程，可能相互作用、相互
影响。5-HT作为一种广泛存在的神经递质，胃肠道
中的 5-HT可以影响胃酸分泌及胃肠肌电活动［7］。
许多研究已经证实 5-HT 信号系统发生异常可导致
胃肠道动力及分泌功能异常，内脏敏感性异常，与
IBS的发病密切相关［8］。SP 不仅是一种重要的神
经递质，而且还是神经系统、内分泌系统和免疫系统
共同的化学语言，是传递信息、调节机体反应的重要
信使［9］。SP能引起整个胃肠道平滑肌的收缩［10］。
SS是一种新提纯的下丘脑多肽激素，因为其对生长
激素(GH)的分泌抑制故而得名，在人体内分布广
泛，血循环中的 SS 可能主要来自于胃肠道［11］。当
胃肠道中 SS的含量高于正常水平时，则会使肠蠕动
变缓。MC 在胃肠道含量丰富，通过释放如 5-HT、
NO、VIP等多种生物活性物质来影响调节胃肠运
动［12］。而来自肠分泌细胞的 SS、SP 等物质也可以
通过神经分泌和旁分泌来调节 MC的功能［13 － 14］。
本实验研究发现，菝葜提取物低剂量组可以降
低模型组大鼠血清 5-HT含量，降低血浆 SS含量，升
高血浆 SP 含量，可以减少模型组大鼠结肠 MC 计
数，降低结肠 5-HT、SS、SP、脊髓 SP免疫组化染色强
度的表达，说明该药对 C-IBS 大鼠有一定的干预作
用，其作用机制可能是通过调整模型大鼠血清 5-
HT，血浆 SS、SP，结肠 5-HT、SP、SS、MC，脊髓 SP 等
来实现的。
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An experimental study of Smilax treatment of constipation
predominant irritable bowel syndrome and its mechanism
MA Teng-fei，WANG Ye-qiu，ZHANG Ning，LIU Ying，LI Tie-nan
(Dept of Gastroenterology，the First Affiliated Hospital，Heilongjiang University of Chinese Medicine，Haerbin 150040，China)
Abstract:Aim To study the effect of Smilax China
L． on treating the constipation-predominant irritable
bowel syndrome and its mechanism． Method The
model was replicated of rats suffering from constipation-
predominant irritable bowel syndrome with the method
of intragastric administration by ice water and the rats
that were made model were successfully divided into
the group of model and the extract of Smilax China L．
groups of high，middle and low(Concentrations were
8，4，2 g·ml －1 respectively，calculated by the amount
of crude drug) ，as well as active control group and
blank control group． The change of content of SS，SP of
rat plasma and of 5-HT of rat serum was determined
with the enzyme immunoassay and the influence on im-
munohistochemical staining for 5-HT，SP，SS of rat co-
lon and SP of rat spinal cord as well as the influence on
toluidine blue staining for MC of rat colon were ob-
served after three weeks gavage and drug administra-
tion． Results The low dose group of extract of Smilax
China L． obviously reduced，compared with model
group，the content of SS of model rat plasma and of 5-
HT of model rat serum(P ＜ 0. 05) ，and obviously in-
creased the content of SP of model rat plasma (P ＜
0. 05) ，and obviously raised the value of average gray
of immunohistochemical staining for SS，SP of model rat
colon and SP of model rat spinal cord (P ＜ 0. 05) ，
and remarkably raised the value of average gray of im-
munohistochemical staining for 5-HT of model rat colon
(P ＜ 0. 01) ，as well as the counting of MC of model rat
colon(P ＜ 0. 05)． Conclusion Smilax China L． has
evident therapeutic effect on model rat suffering from
constipation-dominant irrtable bowel syndrome，which
implements its mechanism by adjusting the 5-HT of
model rat serum，the SS，SP of model rat plasma，the 5-
HT，SS，SP，MC of model rat colon ，SP of model rat
spinal cord and so on．
Key words:Smilax China;constipation-predominant
irritable bowel syndrome;5-HT;SS;SP;MC
·411· 中国药理学通报 Chinese Pharmacological Bulletin 2012 Jan;28(1)