全 文 ：菝葜对便秘型肠易激综合征大鼠干预作用的研究
*
张 宁，马腾飞，王业秋，刘 影，李铁男＊＊
(黑龙江中医药大学，哈尔滨 150040)
摘 要 目的:研究菝葜对便秘型肠易激综合征大鼠的干预作用及作用机理。方法:用冰水灌胃法复制大鼠便秘型肠易激综
合征模型，将造模成功大鼠分为模型组，菝葜提取物高、中、低剂量组( 浓度依次为 80g /kg、40g /kg、20g /kg，按生药量计) ，阳性对照
组，另设空白对照组。灌胃给药 3 周后，硝酸还原酶法测定大鼠血清 NO含量变化，酶免法测定大鼠血浆 CGRP含量变化，观察对大
鼠结肠 VIP、iNOS免疫组化染色的影响。结果:与模型组相比，菝葜提取物 20g /kg( 按生药量计) 能够显著降低模型大鼠血清 NO和
血浆 CGRP含量( P ＜ 0． 05) ; 显著升高模型大鼠结肠 VIP免疫组化染色的平均灰度值( P ＜ 0． 05) ;极显著升高模型大鼠结肠 iNOS免
疫组化染色平均灰度值( P ＜ 0． 01) 。结论:菝葜对便秘型肠易激综合征模型大鼠有明显的干预作用，其作用机理可能是通过调整模
型大鼠血清 NO、血浆 CGRP、结肠 VIP、iNOS等方面来实现的。
关键词 菝葜;便秘型肠易激综合征;NO;iNOS;CGRP;VIP
肠易激综合征(irritable bowel syndrome，IBS) ，是一种非器
质性肠道紊乱性疾病，以腹痛或腹部不适同时伴排便习惯及大
便性状改变为主要症状。传统医学认为 IBS属于腹痛、泄泻、便
秘范畴［1］。近年来利用中医中药对 IBS进行辨证论治了取得了
很大的进展，在改善症状上疗效显著，这可能与中药的多靶点
治疗作用相关。中药菝葜在民间应用历史较悠久，在临床上常
用于治疗痢疾、腹泻、消化不良等。但有关菝葜在治疗消化系统
疾病的实验研究较少。本实验通过冰水灌胃法建立大鼠便秘
型肠易激综合征(C-IBS)模型［2］，从血液生化及肠道病理改变
等方面探讨菝葜对 C-IBS模型大鼠的干预作用及作用机理。
1 材料与方法
1． 1 试验药物 菝葜为北京同仁堂制药集团哈尔滨药店，经黑
龙江中医药大学陈孝忠副教授鉴定。将菝葜粗末按照 1:10 的
料液比浸泡在 70%乙醇中 72 小时后超声提取，提取液过滤后
减压干燥得浸膏，上 D101 大孔树脂柱进行分离纯化，得 50%
乙醇洗脱液，干燥、粉碎得固体粉末，置 4℃冰箱保存，临用前用
蒸馏水配制成浓度为 2g /ml(低剂量组)、4g /ml(中剂量组)、8g /
ml(高剂量组)混悬液(按生药量计) ;西沙必利片，山东龙力药
业有限公司，5mg /片，临用前蒸馏水配制成浓度为 0． 4mg /ml 的
混悬液。
1． 2 动物 SD大鼠，雌雄各半，体重 180 ～ 220g，由黑龙江中医
药大学动物研究中心提供，动物合格证号:SCXK黑 2008004。
1． 3 试剂 NO 试剂盒、大鼠 CGRP 酶联免疫吸附法试剂盒
(南京建成生物工程研究所) ;兔抗鼠 VIP、iNOS多克隆一抗(北
京博奥森生物技术有限公司)、二抗为 PV6001 试剂盒(北京中
山生物技术有限公司) ;其他试剂为分析纯。
1． 4 仪器 Multiskan MK3 酶标仪(热电上海仪器有限公司) ;
HF-90 CO2 培养箱(上海智成分析仪器有限公司) ;TGL-16G-C
高速冷冻离心机(上海安亭科学仪器厂) ;2135 型切片机(德国
莱卡) ;美国 moticam3000 显微摄影成像系统。
1． 5 方法 参照彭丽华［2］等的方法，每天大鼠灌胃给予 0 ～
4℃生理盐水 2ml，1 次 /天，造模 14d，观察 14d。造模成功后(以
在统计学意义上的大便的含水量和颗粒数降低为造模成功的
标准) ，将模型大鼠随机分成模型组、阳性对照组、菝葜提取物
高、中、低剂量组，8 只 /组，另设空白组 8 只。各给药组按 10ml /
kg灌胃给药，模型组和空白组同步给予生理盐水，10ml /kg。灌
胃给药三周，末次给药结束 6h后，10%水合氯醛麻醉，腹主动脉
取血、取结肠。硝酸还原酶法检测给药后各组大鼠血清 NO 含
量，酶联免疫吸附法检测给药后各组大鼠血浆中 CGRP含量;对
各组大鼠进行结肠 VIP、iNOS 免疫组化染色，moticam3000 显微
摄影成像系统于 400 倍视野下摄影，每组随机选取 10 个视野，
用 Motic image 3． 2 图像分析软件进行分析，计算平均灰度值(0
～ 255 之间)。
2 结果
2． 1 菝葜提取物对 C-IBS 大鼠血清 NO 含量的影响 结果见
表 1。与空白组相比，模型组血清 NO 含量显著升高;与模型组
相比，各给药组血清 NO含量呈下降趋势，其中菝葜提取物低剂
量组显著降低。
表 1 菝葜提取物对 C-IBS大鼠血清 NO含量的影响(珋x ± s)
组别
鼠数
(只)
剂量
(g /kg)
NO含量
(μmol /L)
CGRP含量
(pg /ml)
空白对照 8 18． 14 ± 1． 79* 48． 60 ± 16． 19*
模型对照 8 19． 88 ± 0． 88 65． 51 ± 8． 27
西沙必利 8 0． 004 18． 41 ± 0． 83＊＊ 49． 81 ± 3． 40*
菝葜提取物 8 80 19． 59 ± 0． ． 97 65． 00 ± 14． 25
菝葜提取物 8 40 19． 64 ± 1． 24 63． 96 ± 7． 49
菝葜提取物 8 20 18． 58 ± 0． 83＊＊ 50． 99 ± 6． 92＊＊
与模型组相比 * P ＜0． 01，＊＊ P ＜0． 05(下同)
2． 2 菝葜提取物对 C-IBS 大鼠血浆 CGRP 含量的影响 结果
见表 2。与空白组相比，模型组血浆 CGRP含量显著升高;与模
型组相比，各给药组血浆 CGRP含量呈上升趋势，其中阳性对照
组和菝葜提取物低剂量组下降，见表 1。
2． 3 菝葜提取物对 C-IBS大鼠结肠 VIP、iNOS免疫组化染色的
影响 结果见表 3。与空白组相比，模型组结肠 VIP 免疫组化
染色的平均灰度值显著下降;与模型组相比，阳性对照组和菝葜
36中药药理与临床 2012;28(4)
* 基金项目:教育部春晖计划 ( Z2008 － 1 － 15014) ＊＊通讯作者
提取物低剂量组结肠 VIP 免疫组化染色的平均灰度值呈上升
趋势，而菝葜提取物高、中剂量组则呈下降趋势，其中阳性对照
组和菝葜提取物低剂量组显著升高。
表 3 菝葜提取物对 C-IBS大鼠结肠 VIP、iNOS免疫组化染色平均
灰度值的影响(珋x ± s)
组别
鼠数
(只)
剂量
(g /kg)
VIP iNOS
空白对照 8 179． 10 ± 7． 78＊＊ 169． 00 ± 10． 49＊＊
模型对照 8 171． 00 ± 3． 16 152． 60 ± 12． 21
西沙必利 8 0． 004 175． 90 ± 3． 92* 165． 60 ± 9． 41＊＊
菝葜提取物 8 80 168． 40 ± 5． 56 154． 60 ± 7． 79
菝葜提取物 8 40 170． 80 ± 4． 47 154． 40 ± 10． 17
菝葜提取物 8 20 176． 20 ± 5． 41* 164． 90 ± 8． 91＊＊
与空白组相比，模型组结肠 iNOS 免疫组化染色的平均灰
度值显著下降;与模型组相比，给给药组结肠 iNOS 免疫组化染
色的灰度平均值呈上升趋势，其中阳性对照组和菝葜提取物低
剂量组显著升高。
免疫组化染色的平均灰度值与其染色强度的表达成反比，即
平均灰度值越大染色强度越小，平均灰度值越小，反而染色强度
越大。本实验中结肠VIP、iNOS的免疫组化染色散在的表达在肠
粘膜胞浆中，表达的强度呈淡黄、黄色或棕黄色。给药 3 周后，模
型组大鼠结肠 VIP、iNOS免疫组化的染色强度高于低剂量组，具
有统计学意义，说明了菝葜有效成分低剂量组可以降低模型大鼠
结肠 VIP、iNOS免疫组化染色的表达，如图 1、图 2 。
图 1 菝葜提取物对 C-IBS大鼠结肠 VIP免疫组化染色 图 2 菝葜提取物对 C-IBS大鼠结肠 iNOS免疫组化染色
表达的影响( 珋x ± s，n = 8) 表达的影响( 珋x ± s，n = 8)
图 A、B、C、D、E、F依次为空白组、模型组、西沙必利、 图 A、B、C、D、E、F依次为空白组、模型组、西沙必利、
菝葜高剂量组、菝葜中剂量组、菝葜低剂量组。 菝葜高剂量组、菝葜中剂量组、菝葜低剂量组
3 讨论
菝葜在对风湿方面治疗作用被世人所公认［3］。近年来用
菝葜来治疗泄泻，便秘等脾胃疾病的论著也日益增多。现代药
理研究表明，菝葜具有调节肠运动、镇痛抗炎、免疫调节、杀菌等
多方面的药理活性。而这些药理活性正好逐一针对着 IBS的肠
道运动异常、内脏高敏性、炎症、神经免疫机制和肠道菌群失调
等各种发病机制［4］。另外本课题组研究发现菝葜提取液有兴
奋小鼠离体肠的作用。目前大多数实验也只是涉及到了菝葜
提取物的实验观察等，很少有深入研究菝葜提取物对肠易激综
合征进行干预的具体机理。本篇文章从血液及生化角度探讨
菝葜提取物对肠易激综合征干预的相关机理。
NO是介导平滑肌松弛的重要的抑制性神经递质，在胃肠
道分布广泛，当胃肠道 NO 含量减少时胃肠运动加快，反之，胃
肠运动减慢;人体内目前发现的 NOS 有 bNOS(nNOS)［5］、
cNOS［6］、iNOS［7］三种类型，iNOS只有在细胞受到刺激被激活时
才表达，iNOS催化合成非生理浓度的大量 NO，产生一系列病理
作用;CGRP是由 37 个氨基酸组成的具有复杂生物活性的多肽
物质。其主要分布于神经系统和人体循环的血液中，对大部分
胃肠道平滑肌运动呈抑制作用［8，9］。也有研究表明 CGRP 的作
用可能是通过中枢神经系统的某一结构来实现的［10］;VIP 属于
28个氨基酸组成的肽类物质，因其明显的扩张血管作用而被命
名。其在肠道不仅起胃肠激素作用，还以神经递质形式发挥作
用，对胃肠运动主要起抑制作用。
本实验研究发现，菝葜有效成分低剂量组可以降低 C-IBS
模型大鼠的血清 NO含量，血浆 CGRP 含量，减轻 C-IBS 模型组
大鼠 CGRP、VIP在肠道的表达强度。实验结果提示菝葜有效成
分组对肠易激综合征大鼠的 NO、iNOS、VIP、CGRP 均有不同程
度的调整作用，证明了菝葜可能从多方面多靶点的来治疗或改
善 IBS的症状。
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参考文献
1 皇帝内经素问·卷十一·举痛论． 北京:人民卫生出版社，1963 ∶
38，221
2 彭丽华，杨云生，孙刚，等．便秘型肠易激综合征新概念模型的建立．
世界华人消化病杂志，2004;12(1)∶ 112 ～ 116
3 肖晶，魏峰，林瑞超． 菝葜属植物研究进展． 中国药学杂志，2001;6
(6)∶ 369 ～ 372
4 舒孝顺． 菝葜提取工艺的改进及药理学研究． 华中科技大学博士学
位论文，2005
5 Hall AV，Antoniou H，Wang Y，et al． Structural organization of the hu-
man neuronal nitric oxide synthase gene (NOS1)． Journal of Biological
Chemistry，1994;269(52)∶ 33082 ～ 33090
6 Nadaud S，Bonnardeaux A，Lathrop M，et al． Gene structure，polymor-
phism and mapping of the human endothelial nitric oxide synthase gene． Bio-
chem Biophysic Research Com，1994;198(3)∶ 1027 ～ 1033
7 Marsden PA，Hall AV，Heng HQ，et al． Localization of the human gene
for inducible nitric oxide synthase (NOS)to chromosome 17q11． 2-q12． Ge-
nomics;(United States) ，1994;19(1)∶ 183 ～ 185
8 李启祥． 降钙素基因相关肽与胃肠运动的调节．国外医学·消化系
统疾病分册，2000;20(1)∶ 20 ～ 23
9 Ludman PF，Maseri A，Clark P，et al． Effects of calcitonin gene related
peptide on normal and atheromatous vessles and on resistance vessel in the
coronary circulation in humans． Circulation，1991;84(9)∶ 1993 ～ 2000
10 方秀斌，何维为． 降钙素基因相关肽． 中国医科大学学报． 1989;18
∶ 75 ～ 77
Research to the intervention effect of Smilax china in C-IBS rats
Zhang Ning，Ma Tengfei，Wang Yeqiu，Liu Ying，Li Tienan
(Heilongjiang University of Chinese Medicine，Harbin 150040)
Purpose:To study on the intervention and mechanism of Smilax china L． for rat suffered from the constipation-predominant irritable
bowel syndrome． Method:Replicating the model of rats suffered from constipation-predominant irritable bowel syndrome with the method of
intragastric administration by ice water and deviding the rats that were made model successfully into the group of model and the extract of Smi-
lax China L． into the dose group of high，middle，and low(Concentration were 8g /ml、4g /ml、2g /ml，Calculated by the amount of crude drug
) ，as well as active control group and blank control group． To determine the chang of content of NO of rat serum with the method of Nitrate
reductase and to determine the chang of content CGRP of rat plasma with the method of enzyme immunoassay as well as to observe the influ-
ence of immunohistochemical staining for VIP，iNOS of rat colon after three weeks by gavage and drug administration． Results:The low dose
group of extract of Smilax China L(Concentration were 2g /ml，Calculated by the amount of crude drug)． obviously reduced，compared with
model group，the content of GCRP of model rat plasma and of NO of model rat serum(P ＜ 0． 05) ，and obviously increased the value of average
gray of immunohistochemical staining for VIP of model rat colon(P ＜ 0． 05) ，as well as extremely remarkably raised the value of average gray
of immunohistochemical staining for iNOS of model rat colon (P ＜ 0． 01)． Conclusion:Smilax China L． had evident intervention for model rat
suffered from constipation-dominant irrtable bowel syndrome，which implemented its mechanism by adjusting the NO of model rat serum，the
CGRP of model rat plasma ，theVIP，iNOS of model rat colon and something like that．
Key words Smilax china(菝葜) ;constipation-predominant irritable bowel syndrome;nitric oxide;iducible NOS;calcitonin gene related
peptide;vasoactine intrestinal peptide
白蔹对大、小鼠烫伤模型的影响*
苗晋鑫，白 明，郭晓芳，苗明三
(河南中医学院，郑州 450008)
摘 要 目的:探讨白蔹外用对小鼠、大鼠烫伤模型的影响。方法:采用 90℃恒温水浴造大、小鼠烫伤模型，观察大、中、小剂
量白蔹水煎液和大、小剂量白蔹油糊对小鼠、大鼠烫伤模型烫伤面积及局部组织形态的影响。结果:大、中、小剂量( 0． 75g /cm2、0． 5
g /cm2、0． 25 g /cm2 ) 白蔹水煎液组，大、小剂量( 0． 24 g /cm2、0． 12 g /cm2 ) 油糊组均显著减小小鼠烫伤面积、显著增加烫伤皮肤面积纸
重差值、显著改善烫伤的症状及病理变化。结论:白蔹外用对小鼠、大鼠烫伤模型均有治疗作用。
关键词 白蔹;外用;烫伤模型
56中药药理与临床 2012;28(4)
* 基金项目: 国家十一五支撑计划( 2008BAI53B09) ;郑州市科技攻关( 10PTGS485 － 21)