全 文 ：收稿日期: 2004-04-08
作者简介:张秋海 , ( 1968— ) ,男 ,助理研究员 ,主要从事中药化学成
分及中药新药研究等。 Tel: 010-64014411-2503; E-mail:
zh qh 68@ 163. com
不同产地与采收季节虎耳草中原儿茶酸的含量测定
张秋海 ,丁家欣 ,张　玲
(中国中医研究院基础理论研究所 , 北京 100700)
　　摘要: 目的　测定不同产地与采收季节虎耳草中的原儿茶酸含量。 方法　高效液相色谱法 , Water s
Nova-PaK C18柱 , 流动相为甲醇 -0. 05 mo l· L- 1磷酸 -水 ( 85∶ 9∶ 6) ,紫外检测波长 258 nm ,流速 0. 8 mL·
min- 1。结果　原儿茶酸在 0. 082 6～ 0. 413μg范围内线性关系良好 ,平均回收率为 98. 5%。结论　安徽产虎
耳草中原儿茶酸含量最高 ,安徽以 5月份采收的虎耳草含量最高。
　　关键词:虎耳草 ;原儿茶酸 ; HPLC
　　中图分类号: R284. 1　　　　文献标识码: A　　　　文章编号: 1004-2199( 2004) 04-0030-02
Determination of the Content of Protocatechuic Acid in Sax ifraga stolonifera Meerb.
from Different Places and Various Collecting Seasons
ZHANG Qiu-hai, DIN G Jia-xin, ZHANG Ling
( Institute o f Basic Theo ry o f Chinese M edicine, China Academy of Traditional Chinese
M edicine, Beijing 100700, China )
　　 Abstract: Objective　 To study the content of protoca techuic acid in Sax i fraga stoloni fera Meerb.
f rom di fferent places and various collecting seasons. Method　 C18 column, mobile phase w as methanol-0.
05 mo l· L- 1 phosphoric acid-w ater ( 85∶ 9∶ 6) . The detection w aveleng th w as 258nm and the f low rate
w as 0. 8 m l· min- 1 . Result　 The linea ri ty w as obtained over the range betw een 0. 082 6 and 0. 413μg (r=
0. 999 9) . The average recovery was 98. 5% . Conclusion　 The contents o f Protocatechuic acid in Saxi fraga
stoloni fera Meerb. f rom dif ferent places and various collecting seasons are dif ferent.
　　Key words: Saxi f rag a Stoloni fera Meerb; protoca techuic acid; HPLC
　　虎耳草系虎耳草科植物虎耳草 Sax i fraga
stoloni fera Meerb.的全草。 具有消炎、解毒之功能。
用于治疗急性中耳炎、风热咳嗽等疾病 ;外治大泡性
鼓膜炎 ,风疹瘙痒 [1 ]。 其主要成分有岩白菜素
( bergenin)、槲皮素 -3-鼠李糖苷 ( qua rcit rin)、槲皮
素、原儿茶酸、没食子酸、琥珀酸、反甲基丁烯二酸
等 [2 ]。 我们参照文献 [3 ]对其主要成分之一的原儿茶
酸建立高效液相色谱法 ,对不同产地及不同采收季
节的虎耳草进行考察 ,为进一步开发研究虎耳草提
供参考依据。
1　仪器与试药
高效液相色谱仪: 美国惠普公司 HP1100, (包
括四元泵、紫外检测器、 HP化学工作站 )。供含量测
定用原儿茶酸对照品 (由中国药品生物制品检定所
提供 ,批号 0809-9201)。 甲醇为色谱纯 ,水为重蒸
水 ,其余为分析纯。
样品:虎耳草采自湖北洪山 ( 6月 ) ,浙江莫干山
( 6月 ) ,江苏宜兴 ( 6月 )和安徽广德 ,不同季节的虎
耳草均采自安徽省广德县 ,洗净 ,阴干。 经中国中医
研究院中药所谢宗万研究员鉴定为虎耳草科植物虎
耳草 Sax if raga Stoloni fera Meerb. 的全草。
2　方法与结果
2. 1　色谱条件　色谱柱为 Waters Nova-PaK C18
柱 ( 5μm 3. 9 mm× 150 mm) ;流动相为甲醇 -0. 05
mo l /L磷酸 -水 ( 85∶ 9∶ 6) ;流速: 0. 8 mL· min- 1;
检测波长 258 nm;柱温 30℃。理论板数按原儿茶酸
计应不低于 3 000。
2. 2　对照品溶液的制备　精密称定干燥至恒重的
原儿茶酸对照品 2. 067 mg,加甲醇溶解 ,定容于 25
mL容量瓶中 ,摇匀 ,即得。 浓度为 0. 082 65 mg·
—30— 现代中药研究与实践 2004年第 18卷第 4期Resear ch and Practice o f Chinese Medicines
DOI : 10. 13728 /j . 1673 -6427. 2004. 04. 010
m L
- 1。
2. 3　供试品溶液的制备　虎耳草药粉 (过 3号筛 )
约 1 g ,精密称定 ,置锥形瓶中 ,精密加入 60%乙醇
25 mL,称定重量 ,超声提取 40 min,放至室温 ,用
60%乙醇补足减失的重量 ,摇匀 ,用 0. 45μm的微
孔滤膜滤过 ,即得。
2. 4　标准曲线的绘制　精密吸取上述对照品溶液
1, 2, 3, 4, 5μL,按上述色谱条件测定峰面积积分值 ,
以峰面积积分值为纵坐标 ,进样量为横坐标 ,绘制标
准曲线 ,求得回归方程 Y= 3 949. 741X+ 11. 534,相
关系数 r= 0. 999 9。线性范围为 0. 082 6～ 0. 413
μg。
2. 5　精密度试验　精密吸取上述对照品溶液 3
μL,按上述色谱条件进行分析 ,连续进样 5次 ,原儿
茶酸峰面积积分值的 RSD为 0. 17%。
2. 6　稳定性试验　精密吸取供试品溶液 ,分别于
0、 1、 2、 4、 6、 24 h重复进样 ,记录峰面积 ,结果原儿
茶酸峰面积积分值的 RSD为 1. 60% ,表明在 24 h
内供试品溶液较稳定。
2. 7　重复性试验　取同一批样品 5份 (产地安徽 ) ,
按供试品的制备方法制备 ,按上述色谱条件测定。结
果原儿茶酸的平均含量为 0. 115% , RSD 为
2. 57% 。
2. 8　回收率试验　精密称定已知含量的虎耳草约
0. 5 g ,分别加入 0. 613 mg的原儿茶酸对照品 ,按供
试品溶液的制备项下方法制备 ,按上述色谱分析条
件测定。结果见表 1。
表 1　原儿茶酸加样回收率
Tab. 1　 Recover rates of protocatechuic acid
称样量
/g
原儿茶酸
含量 /mg
测得量
/mg
回收率
/%
平均回收率
/%
R SD
/%
0. 5170 0. 5945 1. 1879 96. 8
0. 5101 0. 5866 1. 2115 102. 6
0. 5060 0. 5819 1. 1790 97. 4 98. 5 2. 53
0. 5228 0. 6012 1. 2093 99. 2
0. 5122 0. 5809 1. 1806 96. 5
2. 9　样品的测定　取不同产地和不同采收季节的
虎耳草制备供试品溶液 ,按上述色谱分析条件测定 ,
按外标法以峰面积积分值计算原儿茶酸的含量 ,结
果见图 1、表 2。
3　讨论
3. 1　试验了甲醇 -醋酸 -水、醋酸钠-醋酸缓冲液-甲
醇及现流动相的不同配比 ,考察了虎耳草中各成分
的分离情况 ,表明采用现比例时 ,分离情况良好。
A-对照品 B-样品
A-reference subs tance B-sample
图 1　 RP-HPLC色谱图
Fig. 1　 RP-HPLC chromatogram of ref erence substance and sample
表 2　不同产地和季节虎耳草中原儿茶酸的含量 (n= 3)
Tab. 2　 The content of protocatechuic acid in saxi fraga stolonif era
Meerb. from different places and various col lecting seasons
采集地 采收时间 原儿茶酸含量 (% ) RSD%
江苏 六月 0. 888 2. 73
湖北 六月 0. 246 3. 25
浙江 六月 0. 798 0. 90
安徽 六月 1. 334 0. 57
安徽 五月 4. 707 0. 86
安徽 七月 1. 241 2. 96
安徽 八月 0. 353 1. 71
安徽 九月 0. 090 3. 45
3. 2　进行了不同溶剂的提取对比的研究 ,选用
30%乙醇、 60%乙醇、 30%甲醇、 60%甲醇、甲醇为提
取溶剂 ,超声提取 60 min,实验结果表明 , 30%乙
醇 , 60%乙醇为溶剂提取的原儿茶酸的含量无差异 ,
比各甲醇提取液提取完全。 60%乙醇提取检测干扰
少 ,故选用。
3. 3　产地不同虎耳草中原儿茶酸含量不同 ,由表 2
可见 ,安徽所产虎耳草含量最高 ;采收季节不同虎耳
草中原儿茶酸含量也不同 ,以 5月份采收的虎耳草
含量较高 ,以后各月含量逐渐降低。
3. 4　本文建立的测定方法简便、快速、干扰少 ,结果
准确 ,适用于虎耳草中原儿茶酸的分析测定。
参考文献
[ 1]　卫生部药典委员会 .中国药典 [S ] . 一部 . 北京: 人民卫生出版
社 , 1977. 339.
[ 2 ]　罗厚蔚 ,吴葆金 ,陈节庵 ,等 .虎耳草有效成分的研究 [ J ].中国
药科大学学报 . 1988, 19 ( 1): 1.
[3 ]　倪坤仪 ,张国清 . 反相高效液相色谱法测定丹参注射剂的三种
有效成分 [ J] . 药学学报 . 1988, 23( 4): 293.
—31—现代中药研究与实践 2004年第 18卷第 4期Resear ch and Practice of Chinese Medicines