全 文 ：不同采收期菝葜中黄酮类成分含量
动态变化的研究
〔摘要〕 目的 以黄酮类含量为指标，确定菝葜根茎药材的最佳采收期。 方法 以芦丁为对照品，采用紫外-可见分
光光度法测定不同采收期菝葜根茎中总黄酮含量，并采用 HPLC 测定其中落新妇苷和黄杞苷的含量。 结果 11 月中旬
以前总黄酮含量明显低于 11 月中旬以后；10~11 月初随着生育期延长菝葜根茎中总黄酮含量略有下降，11 月份以后
菝葜根茎中总黄酮含量不断积累，至 12 月底菝葜进入休眠期后菝葜根茎中总黄酮的含量最高，达 3.0%±0.1%。菝葜根
茎药材中落新妇苷和黄杞苷的总含量大于 0.10 %，符合 2010 版《中华人民共和国药典》的规定，在 12 月底含量达到
最大值。 结论 菝葜药材的最佳采收期应为菝葜地上部位落叶枯萎，根茎进入越冬休眠期后采收。
〔关键词〕 菝葜；黄酮类成分；含量测定；紫外-可见分光光度法；HPLC；不同采收期
〔中图分类号〕R284.1 〔文献标识码〕A 〔文章编号〕doi:10.3969/j.issn.1674－070X.2012.11.010.038.04
Research on dynamic changes of flavonoids contents
in Smilax China L． from different harvest time
LI Feng-juan, ZHOU Ri-bao*, LIU Xiang-dan, LIU Xiao-rong, WANG Zhao-hui, SUN Meng-shan
（TCM University of Hunan， Changsha， Hunan 410208， China）
〔Abstract〕 Objective To determine the optimum harvest time of Smilax China L using the
flavonoids content as an index． Methods The content of total flavonoids in Smilax china L．
was determined by ultraviolet-visible spectrophotometry with rutin as standard control，and astilbin
and engeletin in Smilax China L． were determined using HPLC method. Results The total
flavonoids content of Smilax China L. harvested before the mid-November is markedly lower than
that of harvested after the mid -November. As the growth period extending，the total
flavonoids content in the rhizome of Smilax China L. gradually reduced from October to the begin
ning of November，but the flavonoids content constantly accumulated after November and reached
the peak when the rhizome of Smilax China L．entered hibernation at the end of December，which is
3.0%±0.1%. The total content of astilbin and engeletin in the rhizome of Smilax China L． was more
than 0.10 %，which complied with the quality standards in the 2010 edition of the China pharma
copoeia，and the content reached the peak at the end of December. Conclusion The Smilax Chi
na L． may be collected at the time that Smilax China L. leaves has fallen and the
above-ground has withered，and the rhizome has entered winter hibernation.
〔Key words〕 Smilax China L．； flavonoids； quantitative determination； ultraviolet-visible spec-
trophotometry； HPLC； different harvest time
李凤娟，周日宝 *，刘湘丹，刘笑蓉，王朝晖，孙梦姗
（湖南中医药大学 湖南 长沙 410208）
〔收稿日期〕2012－07－21
〔基金项目〕湖南省教育厅高校创新平台开放基金（09k061）；湖南省中医药管理局（2009010）。
〔作者简介〕李凤娟（1986-），女，河南周口人，在读硕士研究生，主要从事中药资源与质量研究。
〔通讯作者〕* 周日宝，男，博士研究生导师，E-mail：zhouribao20032003@yahoo.com.cn。
2012 年 11 月第 32 卷第 11 期
Nov． 2012 Vol． 32 No． 11
湖 南 中 医 药 大 学 学 报
Journal of TCM Univ． of Hunan38
菝葜系百合科菝葜属植物， 主要分布于我国长
江以南地区，其根茎、叶均可入药，尤以根茎为大宗
常用中药。 菝葜根茎主要包含皂苷类、黄酮类、鞣质
类等[1-2]多种化学成分，具有利湿去浊、祛风除痹、解
毒散瘀等药理活性 [3]，性甘、酸、平、温。 为了更好地
了解菝葜药材的最佳采收期， 现采用紫外-可见分
光光度法测定不同采收期菝葜根茎中总黄酮的含
量， 同时以落新妇苷和黄杞苷为指标， 采用 RP-
HPLC 测定同一地区不同采收期菝葜根茎中两种成
分的含量， 以期为野生抚育基地菝葜根茎药材最佳
采收期的确定提供实验依据。
1 仪器、试剂与材料
1.1 仪器
FW135 型中草药粉碎机（天津市泰斯特仪器有
限公司）；101-3AB 型电热鼓风干燥箱（天津市泰斯
特仪器有限公司）；FA2004型电子天平（上海恒平科
学仪器有限公司）；KQ-500DE 型数控超声波清洗器
（昆山市超声仪器有限公司）；752pc 型紫外-可见分
光光度计 （上海光谱仪器有限公司）；Agilent Tech-
nologies 1200series（美国进口）。
1.2 试验试剂
甲醇为色谱纯；其它试剂为分析纯；芦丁对照品
（中国药品生物制品研究所，批号：10080-200707）；
落新妇苷对照品、黄杞苷对照品（天津马克生物技术
有 限 公 司 ， 批 号 ：TFL -1 -20110226、TFL -2 -
20110226，纯度 98.5%)；超纯水为自制。
1.3 样品材料
样品材料采自湖南省平江县菝葜药材野生抚育
基地， 经湖南中医药大学周日宝教授鉴定为菝葜
Smilax china L．的根茎。 供试品：取上述菝葜根茎洗
净，于 60 ℃烘干，粉碎并过 40 目筛后，装入塑料封
口袋中备用。
2 方法与结果
2.1 总黄酮含量的测定
2.1.1 对照品溶液的制备 精密称取于 120 ℃干
燥至恒质量的芦丁对照品 10．0 mg，置 100 mL 量瓶
中，加入 70％乙醇 50 mL，置温水中加热使溶解，放
冷，加 70％乙醇定容，摇匀，即得 0.100 mg/mL 的芦
丁对照品溶液。
2.1.2 供试品溶液的制备 称取供试品约 3 g，精
密称定，加 70%乙醇 90 mL，超声提取 3 次，每次
1 h，滤过，合并滤液，减压回收乙醇至滤液 100 mL
以下，用 70％乙醇定容于 100 mL 量瓶中，精密吸取
续滤液 10 mL，蒸干，残渣加水 10 mL 使溶解，移入
分液漏斗中，用乙酸乙酯萃取 5次，每次 10 mL。 合
并乙酸乙酯层，蒸干，残渣用 70%乙醇溶解并定容
至 50 mL。
2.1.3 测定波长的确定 取对照品溶液和供试品溶
液各 3 mL，分别置 10 mL 量瓶中，加乙醇 2 mL，加
5%亚硝酸钠 0.3 mL，摇匀，放置 6 min，加 10%硝酸
铝溶液 0.3 mL，摇匀，放置 6 min，加 4%氢氧化钠
4 mL，加乙醇至刻度，摇匀，放置 15 min，于 400～
700 nm 处扫描 ， 结果对照品和供试品溶液在
495 nm处均有较强吸收峰（见图 1）。 故选择测定波
长为 495 nm。
2.1.4 标准曲线的绘制 分别精密吸取对照品溶液
1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0 mL， 置 10 mL 量瓶中，按
“2.1.3”项下方法显色，于 495 nm测定吸光度。 以吸
光度为纵坐标、 浓度为横坐标绘制标准曲线。 回归
方程：
Y=11.174X-0.007 6，r=0.999 8
在 0.010～0.060 mg/mL 范围内， 浓度与吸光度
具有良好线性关系。
2.1.5 精密度试验 精密吸取同一芦丁对照品溶液
3 mL，按“2.1.3”项下方法显色，连续测定 6 次，测定
吸光度，RSD=0.60%（n=6），表明仪器的精密度良好。
2.1.6 稳定性试验 取同一供试品溶液， 按“2.1.3”
项下方法显色， 分别在 0、15、30、45、60、120 min 时
测定其吸光度。 结果表明在显色后 15～60 min其吸
光度的 RSD 为 2.7%， 表明供试品溶液宜在显色
李凤娟，等 不同采收期菝葜中黄酮类成分含量动态变化的研究第 11 期 39
表 2 不同采收期菝葜根茎药材中总黄酮、
落新妇苷和黄杞苷含量 （x±s，n=3，mg/g）
15 min后开始测定，并于 60 min内完成测定。
2.1.7 重复性试验 取同一批供试品 （采收期为
2010.11.01）6 份，按“2.1.2”项下方法制备供试品溶
液，按“2.1.3”项下方法显色测定，用回归方程计算含
量。 结果菝葜中总黄酮平均含量为 2.06%，RSD 为
1.6%（n=6）。
2.1.8 加样回收率试验 精密称取已知总黄酮含量
的菝葜根茎药材粉末 （采收期为 2010.11.01）0.5 g，
共 5 份， 分别精密加入一定量的芦丁对照品 ，按
“2.1.2”项下方法制备供试品溶液，按“2.1.3”项下方
法显色测定含量，计算回收率，结果见表 1。
2.1.9 含量测定 取不同采收期的菝葜供试品，按
“2.1.2”和“2.1.3”项下方法操作，计算供试品中总黄
酮的含量，结果见表 2。
2.2 落新妇甘和黄杞苷含量的测定
2.2.1 色谱条件 [3] 色谱柱 Apollo C18 (4.6 mm×
250 mm，5 μm)；流动相为甲醇-0.1%磷酸溶液（40∶
60）；流速为 1 mL/min；检测波长为 290 nm；柱温为
35 ℃。 在上述色谱条件下，分别取混合对照品溶液
和供试品溶液各 10 μL，注入色谱仪，对照品及样品
溶液的 HPLC色谱图如图 2和图 3所示。
2.2.2 对照品溶液的制备 分别精密称取落新妇
苷、 黄杞苷对照品适量， 用甲醇定容， 分别制成
0.04 mg/mL 落新妇苷对照品溶液和 0.3 mg/mL 的
黄杞苷对照品溶液， 再分别精密吸取落新妇苷和黄
杞苷对照品溶液 25 mL 于 50 mL 容量瓶中，摇匀，
制成混合对照品溶液。
2.2.3 供试液的制备 取本品粉末约 0.5 g，精密称
定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇 25 mL，密塞，称
定质量， 超声处理 （功率 250 W， 频率 40 kHz）
45 min，放冷，再称定质量，用甲醇补足减失的质量，
摇匀，滤过，取续滤液，即得。
2.2.4 线性关系考察 分别精密吸取落新妇苷和
黄杞苷对照品溶液 1、2、3、5、10、20 μL 进样， 测定
落新妇苷和黄杞苷峰面积，以峰面积为纵坐标，以进
样量（μg）为横坐标，得到落新妇苷的回归方程为
Y=2 523.6X-0.106 7，r=1.000 0， 黄杞苷的回归方
程为 Y=3 721.6X-0.105 8，r=1.000 0。 落新妇苷和
黄杞苷分别在 0.02～0.40 μg 和 0.15～3.01 μg 范围
内具有良好的线性关系。
2.2.5 样品含量测定 采用上述色谱条件， 对菝葜
样品进行测定， 按外标法以峰面积计算落新妇苷和
黄杞苷的含量。 结果见表 2。
表 1 加样回收率实验结果 （mg，n=5）
称样量(g) 样品含量 加入量 测得量 回收率(%) 平均值(%) RSD(%)
0.501 0 10.320 6 10.311 5 20.637 3 100.05
0.500 4 10.308 2 10.301 2 20.595 0 99.86
0.501 5 10.330 9 10.328 9 20.546 2 98.90 99.38 1.38
0.501 8 10.337 1 10.330 6 20.753 4 100.83
0.500 9 10.318 5 10.316 0 20.351 8 97.26
样品采收期 总黄酮含量 落新妇苷含量 黄杞苷含量 落+黄总含量
2010.10.01 20.667±0.335 1.117±0.010 6.927±0.017 8.044±0.027
2010.10.11 25.687±0.273 1.355±0.015 8.010±0.057 9.365±0.069
2010.10.21 24.424±0.501 0.748±0.012 3.642±0.018 4.390±0.030
2010.11.01 20.627±0.263 0.854±0.006 3.696±0.016 4.550±0.022
2010.11.11 26.778±0.350 0.614±0.006 4.192±0.012 4.806±0.018
2010.11.21 27.674±0.474 1.434±0.014 6.544±0.064 7.978±0.078
2010.12.01 29.365±0.441 1.392±0.011 7.833±0.027 9.225±0.038
2010.12.11 29.909±0.670 1.213±0.013 6.141±0.046 7.354±0.059
2010.12.21 29.959±0.490 1.114±0.013 6.778±0.025 7.892±0.038
2011.01.01 31.385±0.639 1.917±0.018 12.309±0.023 14.226±0.041
2011.01.11 30.059±0.375 1.678±0.022 7.837±0.057 9.515±0.079
湖南中医药大学学报 2012 年第 32 卷40
悬尾实验反映动物的绝望情绪及
抑郁状态。 本实验结果显示， 应激后小鼠体质量增
长、 敝箱试验活动水平以及悬尾不动时间均出现异
常， 说明本实验慢性心理应激动物模型制作成功。
百事乐胶囊高、中、低剂量均能有效改善慢性应激对
小鼠体质量的影响， 提高抑郁模型小鼠的自主活动
和探究能力，减少抑郁模型小鼠悬尾不动时间，说明
百事乐胶囊能有效改善抑郁模型小鼠的体质量和行
为学变化。
抑郁症的发生常伴一定程度的炎症反应激活，
促炎性细胞因子升高已成为抑郁症的标志性现象。
临床上观察到很多应用细胞因子免疫治疗的患者表
现出一系列抑郁样症状， 并且抗抑郁药能够阻断这
些症状[5]。 IL-1β和 TNF-α属于前炎症细胞因子，是
一系列炎症反应中最早产生的细胞因子。研究表明，
心理性应激反应能使脑内情感调节区的 IL-1β 和
TNF-α 等促炎症性细胞因子浓度增加 [6]。 临床研究
显示抑郁症患者治疗前血清 IL-1β 和 TNF-α 显著
高于对照组，经药物治疗后显著下降 [7-8]。 动物实验
研究表明抑郁模型大鼠血清 IL-1β 和 TNF-α 含量
显著升高，而药物可使其水平下调[9-10]。 本研究中百
事乐胶囊中、高剂量组小鼠血清 IL-1β 和 TNF-α 水
平均显著低于模型组， 说明百事乐胶囊具有下调抑
郁模型小鼠血清 IL-1β和 TNF-α的作用。
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（上接第 26 页）
3 讨论
对来自湖南省平江县野生抚育基地的 11 批不
同采收期菝葜根茎中总黄酮含量的动态变化进行分
析可知，不同采收期菝葜根茎中总黄酮含量较高，均
在 2.0%以上，11 月中旬以前总黄酮含量明显低于
11月中旬以后；10月至 11月初随着生育期延长，总
黄酮含量略有下降，11 月份以后总黄酮含量不断积
累，至 12月底菝葜进入休眠期后菝葜根茎中总黄酮
的含量最高，达 3.0%以上，后期总黄酮含量的不断
增加， 可能是地上部分茎叶中的黄酮不断运输至地
下根茎中不断积累的结果。 菝葜药材的最佳采收期
应为地上部位落叶枯萎， 根茎进入越冬休眠期后采
收，与传统的采收方法一致[3]。
湖南省平江县菝葜药材野生抚育基地不同采收
期菝葜根茎中落新妇苷和黄杞苷的总含量远远超过
了 2010 版 《中国药典》 的规定标准 （总量不少于
0.10%）， 此外， 笔者还对菝葜样品进行了水分、灰
分、浸出物等常规测定，结果均符合 2010版《中国药
典》规定标准，说明该野生抚育基地生产的药材是优
质的， 适宜大规模开展菝葜药材的野生抚育或菝葜
野生变家种的人工栽培。
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（本文编辑 彭芝配）
李凤娟，等 不同采收期菝葜中黄酮类成分含量动态变化的研究第 11 期
（本文编辑 杨 瑛）
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