全 文 ：中国药房 2009年第 20卷第 21期 Ch ina Pharmacy 2009 V ol.20 No.21 · 1635·
Δ江西省卫生厅科技计划课题(20045077)
*工程师。研究方向:药品检验 。 E-mail:zhongho ng xi@
126.com
#通讯作者:研究员。研究方向:中药制剂及质量控制。电话:
0791-8501404。E-mail:yjb2217@163.com
不同采收季节及部位田基黄药材中黄酮类成分的含量测定 Δ
席仲洪 1 * ,虞金宝 2 #,吕武清 2 ,李 晶 2 ,李才堂 2(1.广东省雅柏药业(中国)有限公司 ,中山市 528437;2.江
西省中医药研究院 ,南昌市 330077)
中图分类号 R284.1;R927.2 文献标识码 A 文章编号 1001-0408(2009)21-1635-03
摘 要 目的:测定不同采收季节及部位田基黄药材中黄酮类成分的含量 。方法:采用比色法测定田基黄药材中总黄酮的含量;采
用高效液相色谱(HPLC)法测定田基黄药材中槲皮素 、芦丁 、异鼠李素的含量 。结果:不同采收季节田基黄药材中总黄酮的含量无
显著差异;广西产田基黄药材中不含异鼠李素 ,但槲皮素 、芦丁含量较高 。田基黄药材不同部位中总黄酮含量以种子和叶高 ,根中
低 ,且根中几乎不含异鼠李素 、槲皮素 、芦丁 。结论:由于春季田基黄药材植株矮小 、产量低 ,因此应以秋季采收为佳 。《中国药典》规
定田基黄药材的药用部位为全草是科学的 。
关键词 田基黄;黄酮类成分;比色法;高效液相色谱法;采收季节;部位
Determination of Flavonoids in Different Parts and Different Harvesting Seasons of Hypericum japonicum
XI Zhong_hong(Guangdong Apo tec Pharmaceutical(China)Co.Ltd., Zhongshan 528437 , China)
YU Jin_bao , LV Wu_qing , LI Jing , LI Cai_tang(Jiangxi Inst itution of Tradi tional Chinese M edical and Phar-
maceutical Sciences , Nanchang 330077 ,China)
ABSTRACT OBJECTIV E:To de termine the contents o f flavono ids in different par t and different harvesting seasons of
Hypericum japonicum.M ETHODS:The to tal content of f lavonoids in H.japonicum w as de termined by colo rim etry and the
contents o f quercetin , rutin and iso rham netin in H.japonicum were de termined by HPLC.RESU LTS:The H.japonicum
harvested in different seasons showed no significan t difference in terms o f the contents o f tota l flavonoids.H.japonicum f rom
Guangxi province cont ained no iso rham netin but w hich was r ich in the contents of quercetin and rutin.In H.japonicum , the
content o f to tal flavonoids w as rich in the seeds and leaves but poor in the roots , and hardly had isorhamnetin , querce tin and
rutin been de tected in the roo ts.CONCLUS ION :H.japonicum harvested in the spring season is low and sm all in size with
low -y ield;there fo re , fall is its op timal harvesting season.Fur thermore , t he specifica tion in Chinese Pharm acopeia tha t the
m edicinal par t o f H.japonicum is the entire herb has been proved to be scientific.
KEY WORDS Hypericum japonicum ;Flavonoids;Chromatomet ry ;HPLC ;Harvesting seasons;Par ts
上吸附 、静电 、疏水 、立体等其他多种综合效应 , 使混合组分在
微乳液中展开时迁移速度不同 , 使其具有独特的选择性 , 可同
时分离亲水物质和疏水物质 。此外 , 本法对带电成分和非带电
成分亦有较好的分离性 ,适用于分离差别很小的物质 。
在正相微乳 TLC中 ,展开剂为极性很大的微乳水溶液 。随
着展开距离的增大 , 会出现 2个 “溶剂前沿”:第一溶剂前沿是
水 、盐等组成的溶剂前沿;第二溶剂前沿是含表面活性剂微乳
的前沿 。这样 ,样品中的糖类 、氨基酸等亲水性物质多数迁移较
快 , 多集中在第一溶剂前沿和第二溶剂前沿之间 , 而中药有效
成分多在原点和第二溶剂前沿之间进行分离 。
TLC有别于其他色谱技术 ,因其除有固定相和流动相外 ,
还存在气相 。气相会对分离结果产生显著影响 。常规 T LC 法多
采用几种有机溶剂组成的混合溶剂 , 各种有机溶剂的挥发性不
同 , 使得展开过程更加复杂 。笔者对展开室进行了未饱和与饱
和 15 m in 的比较试验 ,结果表明 ,展开室的形状和饱和情况对
该成药各成分的分离几乎没有影响 。关于该成药微乳 T LC 展
开特点的原因 , 笔者认为可能是因为微乳作为展开剂时 , 主要
成分为水 , 表面活性剂形成的微乳挥发性不大 , 微乳展开剂长
期放置亦可保持成分稳定;而展开过程亦因为展开剂成分的稳
定 ,所以展开室的形状和饱和情况对分离效果没有什么影响 。
由于温度在 4 ～ 20 ℃对 TLC的展开影响不大 , 因此除有
特殊规定外 , TLC的展开在室温进行即可 。笔者在试验中设置
5 、 20 、 30 ℃3个水平进行考察 , 结果显示温度对该成药微乳
TLC的影响不大[ 5 ]。
参考文献
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(收稿日期:2008-08-21 修回日期:2009-05-05)
· 1636· China Pharm acy 2009 Vol.20 No.21 中国药房 2009年第 20卷第 21期
田基黄药材收载于 1977年版《中国药典》(一部)[ 1 ]和部颁
中药材标准 [ 2 ] ,功能为清利湿热 、消瘀散肿 ,用于急 、慢性肝炎 ,
疮疖痈肿的治疗;临床上以单方或复方治疗急 、慢性肝炎 ,疗效
较好 。田基黄中含槲皮苷 、异槲皮苷 、槲皮素-7-鼠李糖苷 、3 ,
5 , 7 , 3′, 4′-五羟基黄酮-7-鼠李糖苷 [3 ]等黄酮类成分 。目前
尚未见有关田基黄药材中成分含量测定的报道 。因此 , 笔者采
用高效液相色谱(HPLC)法 ,对不同采收季节及部位田基黄药
材中上述成分及总黄酮的含量进行测定 。
1 仪器与试药
HP 1100型 HPLC仪 , 包括 HP 化学工作站 、DAD 检测
器 、四元梯度泵(美国惠普公司);UV -2450型紫外分光光度
计(日本岛津公司);AG -135型电子天平(瑞士梅特勒-托利
多公司)。槲皮素对照品(供含量测定用 ,批号:0081-9304)、芦
丁对照品(供含量测定用 ,批号:0080-9705)、异鼠李素对照品
(供含量测定用 ,批号:860-200103)均由中国药品生物制品检
定所提供;甲醇为色谱纯 , 水为重蒸馏水 , 其它试剂均为分析
纯;不同采收期(8 、9 、10月)的田基黄采于江西南昌市郊梅岭
区 , 另有春季(4月)、秋季(9月)田基黄为广西产;不同药材部
位分别为全草 、根 、叶 、种子(江西产), 所有田基黄药材均经江
西中医学院杨武亮教授鉴定为藤黄科植物地耳草 Hypericum
japonicum Thunb.的干燥全草 。
2 方法与结果
2.1 总黄酮的测定[ 4 ,5]
2.1.1 标准曲线的绘制:精密称取经 120 ℃干燥至恒重的芦
丁对照品 9.6 mg ,置于 50 mL 量瓶中 ,加乙醇适量 , 超声使溶
解 , 放冷 ,用乙醇稀释至刻度 ,摇匀 , 即得对照品溶液(每 1 mL
含无水芦丁 0.192 mg)。精密量取此对照品溶液 1.0 、2.0 、3.0 、
4.0 、5.0 、6.0 mL , 分别置于 25 mL量瓶中 , 加水至 6 mL , 加
5%亚硝酸钠溶液 1 mL ,混匀 ,放置 6 min ,加 10%硝酸铝溶液 1
mL ,摇匀 , 放置 6min ,加氢氧化钠试液 10 mL , 再加水至刻度 ,
摇匀 ,放置 30min;以相应的显色剂为空白 。照分光光度法[4 ] ,在
500 nm波长处测定吸收度。以吸收度(Y)为纵坐标 ,对照品浓度
(X)为横坐标 ,绘制标准曲线 ,得回归方程为 Y =0.011 15X —
0.011 147(r =0.999 9)。结果表明 ,芦丁的检测浓度在 7.68 ～
46.08μg ·mL -1范围内与吸收度呈良好线性关系 。
2.1.2 不同采收季节田基黄药材中总黄酮的测定:分别精密
称取不同采收季节的田基黄药材细粉 1.0 g , 置于索氏提取器
内 , 加适量甲醇提取 4 h ,提取液浓缩并定容至 25 mL 量瓶中 ,
即得供试品溶液 。分别精密吸取此供试品溶液各 1 mL ,置于 25
mL 量瓶中 ,照“2.1.1”项下方法 ,自“加水至 6 mL”起 ,依法测
定吸收度;并取同样量的供试品溶液加水至 25 mL 作空白 。从
标准曲线上读出供试品溶液中芦丁的质量 , 计算含量 , 结果见
表 1。
表 1 不同采收季节田基黄药材中总黄酮与黄酮类成分的含
量测定结果
Tab1 The contents of total flavonoids and f lavonoids
component of different harvest ing seasons
采收季节 含量/ %总黄酮 芦丁 槲皮素 异鼠李素
秋季(广西) 5.54 0.581 0.074 未检出春季(广西) 5.78 0.604 0.154 未检出
8月(江西) 4.28 0.110 0.019 0.002
9月(江西) 4.22 0.100 0.016 0.005
10月(江西) 4.16 0.193 0.132 0.042
2.1.3 不同部位田基黄药材中总黄酮的测定:分别精密称取
不同部位田基黄药材细粉 1.0 g , 置于索氏提取器内 , 余后同
“ 2.1.2”项下方法操作 ,结果见表 2。
表 2 不同部位田基黄药材中总黄酮与黄酮类成分的含量测
定结果
Tab 2 The contents of total f lavonoids and f lavonoids co_
mponent of different parts
部位 含量/ %总黄酮 芦丁 槲皮素 异鼠李素
全草(江西) 4.22 0.100 0.016 0.005
叶 5.47 0.089 0.033 0.019
根 1.51 - - -
种子 6.88 0.025 - 0.028
2.2 槲皮素 、芦丁 、异鼠李素的 HPLC测定
2.2.1 色谱条件 [4 ]:色谱柱为 Agilent H ypersil BDS-C18(250
mm×4.6 mm , 5μm), 流动相为甲醇-0.2%磷酸(52∶48),
流速为 1 mL ·min -1 ,检测波长为 260 nm ,柱温为室温 。在此
条件下 ,对照品 、供试品溶液在约 5 、8 、12.5 min时间处均出现
相同色谱峰 。色谱见图 1。
2.2.2 精密度试验:分别取芦丁 、槲皮素 、异鼠李素对照品各
适量 ,加甲醇制成每 1 mL含芦丁 50μg 、槲皮素 30μg 、异鼠李
素 30μg 的混合对照品溶液 。精密吸取此混合对照品溶液 10
μL 注入液相色谱仪 , 重复进样 5次 ,按 “2.2.1”项下色谱条件
测定各对照品的峰面积 。结果 ,芦丁 、槲皮素 、异鼠李素峰面积
的 RSD 分别为 1.96%、 1.60%、 1.73%, 表明仪器精密度良
好 。
2.2.3 加样回收率试验:精密称取田基黄药材细粉约 1.0 g ,
共 6份 ,置于索氏提取器中 ,各精密加入每 1mL含芦丁 0.128 4
mg 、槲皮素 0.087 3 mg 和异鼠李素 0.030 7 mg 的混合对照品
溶液 15 mL ,以甲醇回流提取 4 h ,提取液经浓缩并以甲醇定容
至 50 mL 量瓶中 ,作为供试品溶液 。按“ 2.2.1”项下色谱条件
测定 ,计算各成分的加样回收率 ,结果见表 3。
2.2.4 不同采收季节田基黄药材中黄酮类成分的测定:分别
精密称取不同采收季节的田基黄药材细粉约 2.0 g , 置于索氏
提取器中 ,以甲醇回流提取 4 h ,提取液经浓缩并以甲醇定容至
50 mL 量瓶中 , 作为供试品溶液 。分别精密吸取对照品溶液和
供试品溶液各 10 μL注入液相色谱仪 , 按“ 2.2.1”项下色谱条
件测定 ,计算含量 ,结果见表 1。
2.2.5 不同部位田基黄药材中黄酮类成分的测定:分别精密
称取不同部位田基黄药材细粉约 2 g ,置于索氏提取器中 ,以甲
醇回流提取 4 h , 提取液经浓缩并以甲醇定容至 50 mL量瓶
中 , 作为供试品溶液 。分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液
各 10μL 注入液相色谱仪 ,按“2.2.1”项下色谱条件测定 ,计算
中国药房 2009年第 20卷第 21期 Ch ina Pharmacy 2009 V ol.20 No.21 · 1637·
表 3 加样回收率试验结果(n=6)
Tab 3 The result of recovery test(n=6)
成分 样品含量/mg 加入量/mg 测得量/mg 回收率/% x/% RSD/%
芦丁 1.938 6 1.926 0 3.814 5 97.4
1.955 3 1.926 0 3.879 4 99.9
1.926 5 1.926 0 3.941 1 104.6 99.12 3.17
1.928 6 1.926 0 3.762 2 95.2
1.948 5 1.926 0 3.845 6 98.5
1.910 1 1.926 0 3.818 8 99.1
槲皮素 1.325 9 1.309 5 2.613 1 98.3
1.337 3 1.309 5 2.640 3 99.5
1.317 6 1.309 5 2.597 0 97.7 98.48 1.60
1.319 1 1.309 5 2.636 5 100.6
1.332 7 1.309 5 2.626 5 98.8
1.306 4 1.309 5 2.563 5 96.0
异鼠李素 0.421 9 0.460 5 0.898 0 103.4
0.425 5 0.460 5 0.877 3 98.1
0.419 2 0.460 5 0.859 4 95.6 99.12 3.04
0.419 7 0.460 5 0.875 6 99.0
0.424 0 0.460 5 0.893 2 101.9
0.415 7 0.460 5 0.861 0 96.7
含量 ,结果见表 2。
3 讨论
田基黄中主要成分为黄酮类、内酯类等 , 具有保肝 、抗肿
瘤 、提高免疫功能 [ 6 ]和抗痛风 [7 ]等药理作用。研究发现 ,黄酮类
成分除了具有对心脑缺血损伤 、心律失常的保护作用及镇痛作
用外 , 对肝损伤亦具有保护作用 [8 ] 。1977年版《中国药典》(一
部)收载的“地耳草(田基黄)”项下为春 、夏二季花开时采挖 ,其
临床主要用于急 、慢性肝炎的治疗 。苏娟等 [9 ]研究结果表明 ,田
基黄乙醇总提物和乙酸乙酯部位具有良好的保肝作用 , 能显著
降低急性肝损伤大鼠血清中的丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天
冬氨酸氨基转移酶(AST)水平 ,且进一步的化学成分鉴定显示
其主要成分为黄酮 。本试验结果显示 , 不同采收季节田基黄药
材中总黄酮含量无明显差异 ,但春季药材植株矮小 、产量低 ,而
秋季药材植株高大 、枝叶茂盛 ,其产量为春季的 3倍以上 ,所以
从药材中总黄酮的含量考虑 ,建议以秋季采收为佳 。
经对不同产地及采收季节药材中槲皮素 、芦丁 、异鼠李素
的含量测定结果发现 , 广西产田基黄药材中不含异鼠李素;江
西产药材中虽含有异鼠李素 , 但含量很低 。另 2种成分在江西
产与广西产药材中的含量差异较大:江西产 10月样品中的芦
丁 、槲皮素含量均明显高于 8 、9月样品;广西产药材中芦丁含
量春 、秋季样品无明显差异 , 但均为江西产药材的 3 ～ 5倍 , 槲
皮素含量春季为秋季的 2倍 , 与江西产药材含量无明显差异。
造成两地产田基黄药材中黄酮类成分含量差异的原因 , 可能与
两地的环境及气候条件不同有较大关系 , 其具体因素还有待研
究 。从上述结果可知 , 广西产田基黄与江西产田基黄中黄酮类
成分含量有较明显差异 , 但所含其它成分及药理作用有无差异
还有待进一步研究 。
田基黄药材不同部位中黄酮类成分的含量测定结果显示 ,
其不同部位中黄酮类成分含量有一定差异:总黄酮以种子含量
最高 、根中最低 ,且根中几乎不含槲皮素 、芦丁 、异鼠李素;叶子
与全草中各成分的含量相近 , 这一结果在一定程度上证明 《中
国药典》规定田基黄药材的药用部位为全草是非常科学的 。由
于其种子中总黄酮含量较高 , 且提取液中叶绿素含量低 , 因此
该部位可用于田基黄药材中化学成分的分离研究 。
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(收稿日期:2008-08-13 修回日期:2008-12-01)
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