全 文 ：脱下来。结合疏血通注射液的生产工艺特点截取保留相对分
子量 6 000以下的有效物质 , 所以笔者选用体积排除色谱将先
于胰岛素峰保留时间的峰视为高分子量物质的峰 , 按面积归一
化法计算 , 含高分子量物质的量≤1.0%。
3.2 色谱条件的优化 根据本品多肽物质分子量分布特点 ,
并参照文献 [ 1] , 选择适于分离本品的凝胶色谱柱 [ TSKGEL
2000 SWxl(7.8 mm×300 mm)] 。被测组分绝大部分在紫外区
末端有很强的吸收。因此选择紫外检测器 , 波长 214 nm。 凝胶
色谱柱所承受压力不宜过大 , 流速减小可降低柱压 , 而流速过
小 , 保留时间过长也不适宜 , 兼顾两方面因素 , 选择 0.5, 0.7
mL· min-1进行对比实验。结果表明流速选择为 0.7 mL· min-1
是可行的。流动相的选择:参照文献 [ 2] , 以水-乙腈 -三氟醋酸
为基本组成 , 调整比例。 笔者配制了不同比例的流动相 , 对 5
种标准分子量物质进行测定 , 以各峰保留时间为横坐标 , 分子
量对数值为纵坐标 ,作标准曲线 ,进行线性回归 , 以线性相关系
数 r值作为评判标准 , 确定流动相比例:三氟醋酸-乙腈-水
(0.025 ∶30 ∶70)为佳。
[参考文献 ]
[ 1] 刘国诠 ,余兆楼.色谱柱技术 [ M] .北京:化学工业出版社 , 2001.
218-232.
[ 2] 李发美.医药高效液相色谱技术 [ M].北京:人民卫生出版社 ,
1999.97, 122-124.
[ 3] 国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[ Z].北京:化学工
业出版社 , 2000.附录 Ⅵ .
高效液相色谱法测定
菝葜醋酸乙酯提取物中白藜芦醇的含量
徐满珍 ,阮金兰 ,蔡亚玲
(华中科技大学同济医学院药学院 ,武汉 430030)
[摘 要 ] 目的 建立高效液相色谱法测定菝葜醋酸乙酯提取物中白藜芦醇含量的方法。 方法 Zirchrom
KromasilC18色谱柱(4.6 mm×250 mm, 5 μm);流动相:乙腈-水(30 ∶70);流速:1.0 mL· min-1;柱温:室温;检测波长
303nm。结果 白藜芦醇对照品线性范围 18.8 ～ 94.0 μg· mL-1 , r=0.999 6(n=5), 样品平均回收率为 101.10 %,
RSD=0.64 %(n=5), 菝葜醋酸乙酯提取物中白藜芦醇的平均含量为 29.59 μg· mg-1。结论 该方法简便 、快捷 、重现
性好 , 为菝葜醋酸乙酯提取物的质量控制提供依据。
[关键词 ] 菝葜;白藜芦醇;含量测定;高效液相色谱法
[中图分类号 ] R927.2;R284.2 [文献标识码 ] A [文章编号 ] 1004-0781(2006)04-0351-02
菝葜(SmilaxChinaL.)又名金刚藤 ,具有清热解毒 、消肿散
结之功效 , 用于治疗附件炎及炎性包块 , 疗效确切 , 深受广大患
者欢迎。但是 , 临床应用的菝葜制剂普遍存在服用剂量大 、质量
控制标准不明确 ,影响临床用药疗效的稳定和安全。为了最大限
度地富集有效成分 ,降低服用量 , 笔者应用溶剂梯度法 ,确定菝葜
醋酸乙酯提取物为其治疗妇科炎症的主要有效部位。笔者采用
高效液相色谱(HPLC)法测定该有效部位中主要化学成分白藜
芦醇的含量, 为菝葜制剂质量控制标准的制定提供参考。
1 仪器与试药
1.1 仪器 高效液相色谱仪为 HPAgilent1100 Series,色谱柱:
ZirchromKromasilC18柱(250 mm×4.6 mm, 5 μm);保护柱:
ZorbaxSB-C18(6 mm ×40 mm, 3 μm)。超声仪(Cole-PamerIn-
trumentCompany);电子天平 (MettlerAE160型 , Switzerland)。
[收稿日期 ] 2005-06-19
[作者简介 ] 徐满珍(1981-), 女 ,福建龙岩人 ,在读硕士 ,主要
研究方向为天然药物活性成分的研究。 电话:027-83691961, E-mail:
xmj620@yahoo.com.cn。
[通讯作者 ] 阮金兰 , 男 , 博士生导师 , 电话:027 -83692892, E-
mail:jinlan8152@163.com。
UV-756MC紫外-可见分光光度计(上海精密科学仪器有限公
司)。
1.2 试药 反式白藜芦醇标准品(美国 Sigma公司 , 含量 99
%,批号:R5010-100112K5216)。乙腈 、甲醇均为河北省邯郸市
林峰精细化工厂生产 , 色谱纯;纯净水(娃哈哈), 微孔滤膜(0.2
μm)。菝葜醋酸乙酯提取物由本课题组自制。
2 方法与结果
2.1 色谱条件 ZirchromKromasilC
18
色谱柱(4.6 mm×250
mm, 5μm);流动相:乙腈-水(30 ∶70);流速:1.0 mL· min-1;
柱温:室温;塔板数按白藜芦醇峰计算 >6 500。
2.2 检测波长的选取 对白藜芦醇甲醇溶液在波长 190 ～ 500
nm范围内进行紫外扫描显示 , 白藜芦醇在 209和 306 nm处出
现最大吸收峰 ,结合有关文献报道最终选取 303nm作为检测波
长。
2.3 溶液的配制
2.3.1 白藜芦醇储备液的制备 精密称取白藜芦醇对照品适
量 ,精密称定 , 加甲醇制成每 1 mL含 188 μg的溶液 ,备用。
2.3.2 标准品溶液的制备 精密移取白藜芦醇储备液 0.5,
1.0, 1.5, 2.0, 2.5 mL分别至 5 mL棕色容量瓶中 , 加甲醇稀释
·351·医药导报 2006年 4月第 25卷第 4期
至刻度 , 摇匀 ,配成不同浓度的标准品溶液 ,备用。
2.3.3 供试品溶液的制备 精密称取在 55℃减压干燥 10h的
菝葜醋酸乙酯提取物约 155 mg于称量瓶中 , 加入 2.5 mL甲醇 ,
溶解 , 过滤至 25 mL棕色容量瓶 ,加甲醇稀释至刻度 ,摇匀。精
密移取此液 10 mL至 50 mL棕色容量瓶中 , 加甲醇稀释至刻
度 , 摇匀。取适量溶液 , 用 0.2 μm微孔滤膜进行过滤 , 弃去初
滤液 , 取续滤液 10 mL, 即得供试品溶液。
2.4 线性关系考察 在上述色谱条件下 , 分别吸取上述标准
品溶液 20μL, 注入高效液相色谱仪中测定峰面积 , 得回归方
程:Y=0.000 006X+0.780 7, r=0.999 6。 结果表明白藜芦醇
浓度为 18.8 ～ 94.0 μg· mL-1时浓度与峰面积呈良好的线性关
系。
2.5 精密度实验 精密移取 94.0μg· mL-1白藜芦醇标准品溶
液 20 μL注入高效液相色谱仪 ,连续进样 5次 , 测得白藜芦醇标
准品峰面积 RSD为 1.47%(n=5)。
2.6 重现性实验 取菝葜醋酸乙酯提取物(批号:040310)5份
各 150 mg,精密称定 ,按供试品溶液的制备方法制备 , 每个样品
进样 20μL, 连续进样 3次 , 测定白藜芦醇的峰面积 , 计算得该
提取物中白藜芦醇的含量为 29.60 μg.mg-1 , RSD=1.44 %。
2.7 稳定性实验 精密吸取供试品溶液 , 分别于 0, 0.5, 1.0,
1.5, 2.0, 4.0, 6.5, 8.5, 10.0, 21.0 h进样 20 μL, 测定白藜芦醇
的峰面积 , 校正因子的 RSD=0.93 %(n=10)。
2.8 加样回收率实验 精密称取已知含量的菝葜醋酸乙酯提
取物(批号:040308)5份 , 分别加入一定量的白藜芦醇对照品储
备液 , 按供试液制备方法制备得 5个加样回收的样品溶液。分
别取 20μL注入高效液相色谱仪进行测定。 计算得本品中白
藜芦醇的加样回收率为 101.10 %, RSD=0.64 %。
2.9 含量测定 取菝葜醋酸乙酯提取物 160 mg,精密称定 , 按
供试液的制备方法制备 , 每个样品进样 20 μL, 连续进样 3次 ,
测定峰面积 , 计算白藜芦醇的含量。 共测得 5批样品 , 结果平
均含量为 29.59 μg· mg-1。见表 1。
3 讨论
曾有人根据菝葜含有薯蓣皂苷类化学成分 ,提出以薯蓣皂
表 1 菝葜提取物中白藜芦醇含量测定结果
批号 含量 /(μg· mg-1) RSD/%
040308 29.69 6.52
040310 29.58 3.89
040311 29.64 6.74
040313 29.61 8.95
040315 29.42 6.97
苷元的含量测定作为菝葜制剂的质量控制标准。笔者曾对市
场销售的金刚藤(菝葜)胶囊和本品中薯蓣皂苷元的含量进行
了 HPLC测定。结果表明 ,无论是在金刚藤胶囊中 ,还是在本品
中 ,均含有微量薯蓣皂苷元 , 而且薯蓣皂苷元的紫外吸收处于
末端 ,受其他物质的干扰较严重 , 不宜作为质量控制指标。因
此 ,本实验在对菝葜主要化学成分研究的基础上 [ 1] , 选择测定
了现代研究证明具有抗菌 、抗炎 、抗癌 、抗血栓 、抗高脂血症 、抗
脂质过氧化等多方面生物活性 , 与菝葜临床治疗妇科炎性包块
作用更相关的白藜芦醇。本实验所用标准品为反式白藜芦醇 ,
故所测数据为反式白藜芦醇含量 , 不包括反式白藜芦醇苷 、顺
式白藜芦醇及其苷 [ 2] 。菝葜醋酸乙酯提取物为喷干粉 , 易吸
潮 ,故样品的干燥恒重应该平行操作 ,以尽可能减小误差。
本研究结果表明 ,由本实验制备的菝葜醋酸乙酯提取物中
白藜芦醇平均含量为 29.59 μg· mg-1。采用本法测定菝葜醋酸
乙酯提取物中白藜芦醇的含量 , 方法灵敏 、准确 、快速 、操作方
便 ,可作为菝葜醋酸乙酯提取物乃至菝葜深入开发中质量控制
标准研究的依据。
[参考文献 ]
[ 1] 阮金兰 ,邹 健.菝葜抗炎活性成分研究 [ J] .医药导报 , 2005, 24
(6):471-473.
[ 2] 戴蕴青 ,韩雅珊 ,惠柏棣 ,等.红葡萄酒中白藜芦醇及其糖苷异构
体的反相 HPLC分析 [ J].中国农业大学学报 , 2002, 7(1):14-
18.
[ 3] 韩雅珊 ,陈 雷 ,戴蕴青.高效液相法测定葡萄酒中的白藜芦醇
[ J] .色谱 , 1999, 17(4):366-368.
[ 4] 贾淑杰 ,曲树明 ,张 蓉 ,等.HPLC法测定好利康胶囊中白藜芦
醇的含量 [ J] .中草药 , 2003, 34(7):614-615.
复方金黄散洗剂质量标准研究
许 菊 1 ,赵卫国 2
(1.浙江省绍兴市药品检验所 , 312000;2.浙江省绍兴市第六人民医院药剂科 , 312000 )
[摘 要 ] 目的 建立复方金黄散洗剂的质量标准。 方法 采用薄层色谱(TLC)法对处方中黄柏 、大黄进行了定
性鉴别;用分光光度法测定氧化锌含量。结果 在 TLC图谱中可检出黄柏 、大黄的特征斑点;氧化锌在 0.509 ～ 3.056
μg· mL-1间线性关系良好 , r=0.999 9,平均回收率 100.2%, RSD=0.63 %(n=9)。结论 该方法可行 , 重复性好 ,能有
效地控制该制剂的质量 。
[关键词 ] 金黄散洗剂 , 复方;黄柏;大黄;氧化锌;质量标准
[中图分类号 ] R286;R927.1 [文献标识码 ] A [文章编号 ] 1004-0781(2006)04-0352-03
·352· HeraldofMedicineVol.25 No.4 April2006