全 文 ：亚 太 传 统 医 药
Asia-Pacific Traditional Medicine
Vol. 6 No.4%
Apr. 2010
第 6 卷 第 4 期
2010 年 4 月
收稿日期：2010－01－19
作者简介：段静雨（1980－），女，河南禹州人，徐州医学院讲师，研究方向为中药与天然药物活性成分。
正交设计法优选菝葜乙醇提取工艺
段静雨
（徐州医学院 药学院，江苏 徐州 221004）
摘 要：目的：寻找菝葜乙醇提取的最佳工艺。方法：以浸膏得率和白藜芦醇的含量为指标，采用正交设计法和
高效液相色谱法（HPLC）探讨菝葜乙醇的最佳提取工艺条件。 结果：菝葜乙醇最佳提取工艺为采用6倍量的
70％的乙醇，提取1次，提取时间为1h。 结论：最佳提取工艺白藜芦醇含量高，经济、合理，便于在生产中应用。
关键词：菝葜；白藜芦醇；正交设计法；乙醇提取工艺
中图分类号：R284.2 文献标识码：A 文章编号：1673－2197（2010）04－0016－02
菝葜为百合科植物菝葜（Smilax China L.）的根状茎，
又名金刚藤、铁菱角、马加勒、筋骨柱子、红灯果。民间常用
于治疗风湿关节病、跌打损伤、胃肠炎、痢疾、消化不良、糖
尿病、乳麋尿、白带、癌症等 ［1］。 菝葜的主要化学成分为皂
苷类、黄酮、苷类、氨基酸类、芪类及其它类型化合物［2］。 临
床单用或与其它药物配伍可用于治疗各种炎症性疾病，如
妇科盆腔炎症及炎症性包块、前列腺炎、类风湿性关节炎
及各种肿瘤等，均可取得满意疗效 ［3］。 其中芪类化合物白
藜芦醇对大鼠棉球肉芽肿有显著的抑制作用， 并有抗癌、
抗血小板聚集、抑菌、抗炎、保护肝脏等作用 ［4］。 根据“三
小”、“三效”、“一方便”的要求，我们应用现代科学技术，对
其乙醇提取工艺进行研究，以浸膏得率和白藜芦醇的含量
为指标，确定出最佳提取方法，以期为开发携带方便、服用
剂量小的产品提供科学依据。
1 仪器与试药
1.1 仪器
高效液相色谱仪为 HP Agilent 1100 Series， 色谱柱：
Zirchrom Kromasil C18 柱 （250mm×4.6mm，5μm）， 超声仪
（Cole－Pamer Intrument Company）， 电子天平 （Mettler AE
160 型 ，Switzerland），UV－756MC 紫外—可见分光光度计
（上海精密科学仪器有限公司），旋转蒸发器（上海亚荣生
化仪器厂）。
1.2 试药
反式白藜芦醇标准品（美国 Sigma 公司，含量：99％，
批号：R5010－100112K5216）；菝葜饮片购自湖北省药材公
司；乙腈、甲醇均为河北省邯郸市林峰精细化工厂生产；色
谱纯；其它试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 正交试验设计
乙醇提取正交试验选取乙醇浓度、 乙醇用量、 提取次
数、提取时间为考察因素，各因素的水平如下：乙醇浓度为
40％、55％、70％，乙醇用量为药材的 4、6、8 倍，提取次数为
1、2、3次，提取时间为 1、2、3h。 各因素水平见表 1。
表 1 正交试验因素水平
1 40 4 1 1
2 55 6 2 2
3 70 8 3 3
水平乙醇浓度 A（%）乙醇用量 B（倍）提取次数 C（次）提取时间 D（h）
因素
2.2 HPLC测定白藜芦醇的含量
色谱柱 ：Zirchrom Kromasil C18 柱 （250mm×4.6mm，
Optimization of ethanol Extraction Process forRhizoma Smilacis Chinensis byOrthogonal Design
Duan Jingyu
(Pharmacy department of Xuzhou Medical College, Xuzhou 221004，China)
Abstract：Objective：To find out the optimal ethanol extraction process for Rhizoma Smilacis Chinensis. Methods：The extraction
process was studied by orthogonal design with yield of the extracted Resveratrol content determined by RP-HPLC as indexes. Results：
The result showed that the optimal extraction process was 70%alcohol, 6 times the amount of herbs, refluxing for 1 times, each time 1
hours. Conclusion：Resveratrol content is high in the optimized process which is economical, reasonable and convenient for applying to
production.
Key Words:Rhizoma Smilacis Chinensis; Resveratrol; Orthogonal design
16— —
亚 太 传 统 医 药
Asia-Pacific Traditional Medicine
Vol. 6 No.4%
Apr. 2010
第 6 卷 第 4 期
2010 年 4 月
5μm）；流动相：乙腈 ∶水（30∶70）；检测波长：303nm；流速 ：
1.0mL·min－1；柱温：室温；理论塔板数以白藜芦醇计，应不
低于 6 500。
2.2.1 白藜芦醇标准溶液的制备
精密称取白藜芦醇对照品 9.4mg， 置于 50mL 容量瓶
中，加甲醇溶解并定容，精密移取对照品溶液 0.5、1.0、1.5、
2.0、2.5mL分别至 5mL棕色容量瓶中，加甲醇溶解并定容，
摇匀， 配成浓度分别为 18.8、37.6、56.4、75.2、94.0μg ／mL 的
标准品溶液。
2.2.2 供试品溶液的制备
取菝葜饮片各 100g 按 L9（34）正交表方案加热回流提
取制备 9 个样品，提取液减压浓缩至 300mL，量取 1 ／ 4 于
蒸发皿中，置水浴锅上蒸干后，放入减压干燥箱中干燥恒
重，精密称重，作为供试样品，备用。 各供试样品所得浸膏
用分别用 30mL 甲醇超声提取 15min，溶解，过滤，滤液置
50mL 容量瓶中， 定容， 摇匀。 各样品分别移取 15mL 置
50mL 容量瓶中 ，用甲醇稀释 、定容摇匀，作为供试品溶
液，备用。 利用 HPLC 对各样品中的白藜芦醇含量进行测
定。
2.2.3 白藜芦醇标准曲线的建立
在上述色谱条件下 ， 分别吸取上述标准品溶液
20μL 注入高效液相色谱仪中测定峰面积，得回归方程：
Y＝0.000006X＋0.2310，r＝0.9996。结果表明白藜芦醇浓度
为 18.8～94.0μg ／ mL 时浓度与峰面积呈良好的线性关
系。
2.2.4 精密度实验
精密吸取浓度为 94.0μg ／ mL 的标准品溶液 20μL 注
入高效液相色谱仪，连续重复进样 5 次，测得峰面积 RSD
为 1.47％（n＝5）。
2.2.5 稳定性实验
精密吸取供试品溶液 20μL， 分别于 0、0.5、1.0、1.5、
2.0、4.0、6.5、8.5、10.0、21.0h 进样 ， 测定白藜芦醇峰面积
RSD＝0.95％（n＝10）。
2.2.6 重复性实验
按正交试验中 A1B1C1D1方案重复提取 5 份，并按供试
品溶液的制备方法中制备，每个样品进样 20μL，连续进样
3 次，测定白藜芦醇的峰面积，计算白藜芦醇平均含量为
4.9891mg，RSD＝1.39％（n＝5）。
2.2.7 回收率实验
按正交试验中 A1B1C1D1方案，精密称取 5 份已知白藜
芦醇含量的菝葜饮片各 100g， 分别加入一定量的白藜芦
醇对照品溶液，按供试品溶液制备方法制备得 5 个加样回
收的样品溶液， 分别取 20μL 注入高效液相色谱仪测定，
计算得本品中白藜芦醇的加样回收率为 100.40％，RSD＝
0.94％（n＝5）。
2.3 实验结果
各供试样品中浸膏得率及白藜芦醇含量测定结果见
表 2，方差分析结果见表 3、表 4。
表 2 正交试验结果
实验号
因素 评价指标
因素 A 因素 B 因素 C 因素 D
浸膏得率
（%）
白藜芦醇
含量（mg）
1 1 1 1 1 5.86 4.9941
2 1 2 2 2 10.45 13.1654
3 1 3 3 3 12.12 8.1411
4 2 1 2 3 10.39 13.2303
5 2 2 3 1 9.32 12.6170
6 2 3 1 2 7.80 9.1135
7 3 1 3 2 10.54 16.0738
8 3 2 1 3 7.90 12.6221
9 3 3 2 1 8.76 13.2520
9.477 8.930 7.187 7.980
9.170 9.223 9.867 9.597
9.067 9.560 10.660 10.137
0.410 0.630 3.473 2.157
8.767 11.433 8.910 10.288
11.654 12.801 13.216 12.784
13.983 10.169 12.277 11.331
5.216 2.632 4.306 2.496
浸膏
得率
K1
K2
K3
R
K1
K2
K3
R
白藜
芦醇
含量
表 3 浸膏得率方差分析
误差来源 SS f S F 比值 P
A 0.273 2 0.137 1.000 >0.05
B 0.596 2 0.298 2.183 >0.05
C 19.876 2 9.938 72.806 <0.05*
D 7.556 2 3.778 27.678 <0.05*
误差 0.273 2 0.137
表 4 白藜芦醇含量方差分析
误差来源 SS f S F 比值 P
A 40.962 2 20.481 4.342 >0.05
B 10.402 2 5.201 1.103 >0.05
C 30.762 2 15.381 3.261 >0.05
D 9.433 2 4.717 1.000 >0.05
误差 9.433 2 4.717
3 讨论
在方差分析时， 以浸膏得率作为考察指标，A 因素的
影响最小，将其作为误差的来源；以白藜芦醇作为考察指
标，D因素的影响最小，将其作为误差来源。
本实验采用白藜芦醇作为含量测定指标，主要由于菝
葜中薯蓣皂苷元的紫外吸收处于末端，受其它物质的干扰
较严重，不宜作为质量控制指标，而白藜芦醇现代研究证
明其具有抗菌、抗炎、抗癌、抗血栓、抗高脂血症、抗脂质过
氧化等多方面的生物活性，与菝葜临床治疗妇科炎性包块
作用更为相关［5］。 以浸膏得率为考察指标，各因素影响大
小依次为 C＞D＞B＞A，即提取次数影响最大，其次为提取时
间、乙醇用量，乙醇浓度影响最小。 方差分析结果表明：C
17— —
亚 太 传 统 医 药
Asia-Pacific Traditional Medicine
Vol. 6 No.4%
Apr. 2010
第 6 卷 第 4 期
2010 年 4 月
因素和 D 因素的影响均有显著性意义。 考虑到醇提后以
浸膏得率最少为宜，故以 A3B1C1D1为最佳提取工艺。 以白
藜芦醇含量为考察指标，各因素作用主次为 A＞C＞B＞D。即
乙醇浓度影响最大，其次为提取次数、乙醇用量，提取时间
影响最小。 方差分析结果表明：A、B、C、D 4个因素的影响
均没有有显著性意义。考虑到醇提后以白藜芦醇含量最高
为宜，故以 A3B2C2D2为最佳工艺。
综合考虑以上两个指标，白藜芦醇的含量为主要考察
指标、浸膏得率为次要指标，在保证白藜芦醇含量最高的
情况下浸膏越少越好，再从经济实用的角度出发，A3B2C1D1
为最佳提取工艺，即采用 6 倍量 70％的乙醇，提取 1 次 1h
为菝葜乙醇提取的最佳工艺。
参考文献：
［1］ 《全国中草药汇编》编写组.全国中草药汇编（上册）［M］.北京：
人民卫生出版社，1976：752-753.
［2］ 陈东生，华小黎.菝葜的研究现状［J］.中药材，2006，29（1）：90-93.
［3］ 舒孝，吕金海，高中洪，等.均匀设计法优选菝葜总皂苷的超声
提取工艺［J］.中草药，2006，37（4）：550-551.
［4］ 阮金兰，邹健，蔡亚玲 .菝葜的抗炎活性成分研究［J］.医药导
报，2005，24（8）：670-672.
［5］ 徐满珍，阮金兰，蔡亚玲. 高效液相色谱法测定菝葜醋酸乙酯提
取物中白藜芦醇的含量［J］. 医药导报，2006，25（4）：351-352.
（责任编辑：姜付平）
收稿日期：2010－02－02
作者简介：罗燕子（1978-），女，湖南常德人，常德市第一中医院医师，研究方向为中药新剂型。
HPLC法测定山茱萸中没食子酸的含量
罗燕子
（常德市第一中医院，湖南 常德 415000）
摘 要：目的：建立山茱萸药材中没食子酸的测定方法，以控制其质量。 方法：高效液相色谱法，色谱柱：Lichr
ospher C18（5μm，4.6mm×250mm），柱温25℃，检测波长240nm，参比波长360nm，流动相为乙腈－0.1％磷酸（5：95），
进样量10μL，流速1mL ／ min。 结果：测得没食子酸的标准曲线方程为：A＝73.452C－25.241，r＝0.9999，线性范围为
40.3～300μg ／μL，精密度试验RSD为0.95％，重复性试验RSD为1.65％，平均回收率为99.8％，RSD％为1.76。 结论：
本方法灵敏度、重现性、精密度、回收率均较好，可作为评价山茱萸药材质量的一种可行方法。
关键词：没食子酸；山茱萸；HPLC
中图分类号：R284 文献标识码：A 文章编号：1673－2197（2010）04－0018－02
中药山茱萸（Cornus officinalis Sieb.et Zucc）为山茱萸
科（Cornaceae）山茱萸属（Cornus）植物，药用部位为除去果
核后的干燥成熟果肉。2005年版中华人民共和国药典［1］收
载山茱萸饮片有山萸肉、酒蒸山萸肉。 《中药炮制学辞典》
曰其性微温，味酸、涩，归肝、肾经，具有补益肝肾、涩精固
脱等功效。 尚遂存等［2］曾报道用薄层层析方法测定山茱萸
果中的有效成分白桦脂酸、熊果酸、没食子酸和苹果酸德
的含量。 我们为了解山茱萸质量情况，建立了高效液相法
（HPLC）测定山茱萸中没食子酸的含量。
1 仪器与试剂
1.1 仪器
Agilent 1100四元泵全自动进样高效液相色谱仪（Ag-
ilent公司），DAD检测器，AG285 电子天平（瑞士 METTLE
R 公司），V800 旋转蒸发仪（瑞士 BUCHI），KQ－500E 型超
声清洗器（昆山市超声仪器有限公司）
1.2 材料与试剂
山茱萸药材（购于河南西峡县山茱萸医药公司），没食
子酸对照品（中国药品生物制品检定所，批号 1108312200
508），甲醇和乙腈为色谱纯，其余均为分析纯，水为重蒸馏
水（实验室自制）。
2 方法
2.1 色谱条件
色谱柱：Lichrospher C18 （5μm，4.6mm×250mm）， 柱温
25℃，检测波长 240nm，参比波长 360nm，流动相为乙腈—
0.1％磷酸，进样量 10μL，流速 1mL ／ min。
2.2 流动相额选择
试验中选择了多种流动相系统 ：a： 甲醇—水 ，b：乙
腈—水，c：乙腈—0.1％磷酸，d：甲醇—0.1％磷酸。 结果表
!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!
18— —