全 文 ：2014 年 1 月 第 16 卷 第 1 期 中国现代中药 Modern Chinese Medicine Jan. 2014 Vol. 16 No. 1
△ ［基金项目］ 国家自然科学基金项目(31270393)
* ［通信作者］ 卿国良，教授，博士生导师，肿瘤药理学术带头人;E-mail:qingguoliang@ mail. hust. edu. cn
菝葜体外抗非小细胞肺癌细胞活性物质研究
△
邱千1，2，戴琪2，陈树和2，干国平2，刘焱文2，卿国良1*
(1. 华中科技大学 同济医学院 基础医学院 药理学系，湖北 武汉 430030;
2. 湖北中医药大学 中药资源与中药化学省级重点实验室，湖北 武汉 430061)
［摘要］ 目的:筛选菝葜抗非小细胞肺癌细胞活性物质。方法:采用溶剂法、明胶沉淀法和大孔吸附树脂纯
化技术，将菝葜提取分离为乙醇粗提物、总鞣质、总黄酮 3 个物质部位，利用细胞计数仪测定 3 种物质部位抗
A549、NCI-H522、NCI-H23 细胞存活率。结果:从菝葜提取分离的 3 种物质部位均有不同程度抗非小细胞肺癌细胞
活性，其中鞣质部位致非小细胞肺癌细胞存活率最低，并在浓度范围内呈现出良好的计量依耐性。结论:鞣质为菝
葜主要抗非小细胞肺癌细胞活性物质。
［关键词］ 菝葜;非小细胞肺癌细胞;鞣质;乙醇提取物;总黄酮
Screening of anti-NSCLCC Components from Ｒhizomes of Smilax china L. in vitro
QIU Qian1，2，DAI Qi2，CHEN Shuhe2，GAN Guopin2，QING Guoliang1* ，LIU Yanwen2*
(1 Department of Pharmacology，School of Basic Medical Sciences，Tongji Medical College，
Huazhong University of Science and Technology，Wuhan 430030，China
2. Provincial Key Laboratory of Ｒesource and Chemistry of Chinese Medicine，
Hubei University of Traditional Chinese Medicine，Wuhan 430061，China)
［Abstract］ Objective:To Screen anti-NSCLCC active components from the rhizomes of Smilax
china L. Methods:Ethanol crude extracts，tannins and flavonoids were extracted and separated from Smilax
china L. by using solvent method， gelatin precipitation and macroporous adsorption resin purification
technology. The survival rates of A549、 NCI-H522、 NCI-H23 were measured by cell counting
instrument. Ｒesults:All the extracts had different anti-NSCLCC activities，tannins showed the best activity
against A549、 NCI-H522、 NCI-H23 cells and presented good dose-effect relationship. Conclusion:
Tannins are the main anti-NSCLCC ingredients of the rhizomes of Smilax china L.
［Key words］ Smilax china L. ;NSCLCC;Tannins;Ethanol crude extracts;Flavonoids
doi:10． 13313 / j． issn． 1673-4890． 2014． 01． 004
菝葜 Smilax china L. 是百合科菝葜属植物，其
药用部位为根茎，收载于 《中国药典》2010 版一
部，具有利湿去浊，祛风除痹，解毒散瘀的功能［1］。
菝葜是中医临床治疗肿瘤疾患的常用配伍组方药味，
如以菝葜为君药的复方菝葜颗粒，对治疗肺癌有一
定疗效［2］。前人报道了菝葜的黄酮类成分具有体外
抗肺癌作用［3-4］，其鞣质类成分抗肺癌生物活性尚未
见文献报道。笔者采用溶剂法、明胶沉淀法和大孔
树脂纯化技术，将菝葜提取分离为乙醇粗提物、总
鞣质部位和总黄酮部位，对上述 3 种提取分离物质
的抗肺癌活性进行了比较研究。研究结果表明，菝
葜鞣质类成分为其主要抗肺癌活性物质。
1 材料
1. 1 药材与试剂
菝葜药材于 2012 年 8 月购自湖北福人药业有限
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公司，经湖北中医药大学药学院张秀桥教授鉴定为
菝葜 Smilax china L. 的干燥根茎。
D101 大孔树脂(上海劲凯树脂有限公司) ，明胶
(天津市博迪化工有限公司) ，ＲPMI-1640 培养基(美
国 Gibco 公司) ，0. 25% 胰蛋白酶(美国 Gibco 公
司) ，DMSO(美国 Sigma-Aldrich 公司) ，台盼蓝(美
国 Sigma-Aldrich 公司) ，胎牛血清(美国 Hyclone 公
司) ，丙酮(天津市天力化学试剂有限公司)。
1. 2 细胞株
非小细胞肺癌细胞 A549、NCI-H522、NCI-H23
(美国 ATCC)。
1. 3 仪器
二氧化碳培养箱(三洋电机株式会社) ，超净工
作台(苏州净化设备有限公司) ，电热高压蒸气灭菌
锅(上海三申医疗器械有限公司) ，倒置显微镜(安
徽中科中佳科学仪器有限公司) ，24 孔细胞培养板
(美国 Costar 公司) ，细胞计数仪(上海睿珏生物有
限公司) ，电子分析天平(梅特勒 －托利多仪器有限
公司)。
2 方法
2. 1 供试药物的制备
乙醇粗提物:称取菝葜饮片 1 kg，依次加入 8
倍量、6 倍量 60%乙醇回流提取 2 次，依次为 2 h，
1 h，合并提取液，回收乙醇，干燥。
总鞣质部位:将上述回收乙醇后的提取液加入
一定量 4%明胶溶液，搅拌，静置，过滤得到沉淀
部分，加入适量丙酮，搅拌，静置，滤除沉淀，滤
液回收溶剂，干燥。
总黄酮部位:将上述明胶沉淀法所得滤液过
D101 大孔树脂，依次用水、50%乙醇溶液洗脱，收
集 50%乙醇洗脱液，干燥得黄酮部位［5］。
将乙醇粗提物、总黄酮部位、总鞣质部位溶解
于 DMSO后用含 10%胎牛血清的 ＲPMI-1640 培养基
稀释成相应浓度，备用。
2. 2 供试品对体外培养肿瘤细胞生长的影响
A549、NCI-H522、NCI-H23 细胞均为贴壁细胞，
将复苏好的细胞置于含10%胎牛血清、100 U·mL －1青
霉素、100 μg·mL －1链霉素的 ＲPMI-1640 培养基中，
在 37 ℃、5% CO2、相对湿度 95% 培养箱中培养，
每日观察细胞生长情况。A549 细胞 2 ～ 3 d 传代 1
次，NCI-H23 和 NCI-H522 细胞 3 ～ 4 d传代 1 次。
将处于对数生长期的 A549、NCI-H522、NCI-
H23 细胞，以每孔 500 μL(分别约 2. 5 × 104 个、4. 5
× 104 个、4. 5 × 104 个)接种于 24 孔培养板中，培
养 24 h，待细胞贴壁后，吸弃上清液，于上述 24 孔
板中加入不同浓度的待测样品液 500 μL，每个浓度
平行 2 孔。以 0. 1% DMSO 作空白于 37 ℃、5% CO2
培养箱中培养 24 h 后，转移孔中细胞于 EP 管中，
吹打混匀。吸取 20 μL，加入等量 0. 4%台盼蓝，吹
打混匀，用细胞计数仪测细胞存活率。实验重复两
次，取平均值。
3 结果
菝葜提取物对 A549、NCI-H522、NCI-H23 3 种
细胞生长的影响与对照组比较，菝葜鞣质部位组致
肺癌细胞的存活率最低，菝葜总鞣质抗肺癌细胞活
性优于其乙醇粗提物和总黄酮，并具计量效应关系，
见图 1。
A. A549 B. NCI-H522 C. NCI-H23
图 1 菝葜不同物质部位对 3 种肺癌细胞存活率的影响
4 讨论
菝葜是中药复方临床用于治疗肿瘤疾患常用的
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剂，测定过程中不破坏或消耗样品。
针对中药及保健食品中非法添加化学药的特点，
采用逆向思维，以被添加化学药品的 NIＲ 图谱作为
参照光谱，选择其在中成药及保健食品中不受干扰
的典型特征的光谱区域，利用相似系数法与中成药
的 NIＲ图谱进行比较，通过设定合理的阈值，判定
被检测中成药及保健食品是否添加了该化学药。这
是一种简单有效的快速筛查方法，而且准确率高于
95%，同时将近红外光谱通过不同的图谱分析方式，
结合特征谱段的比对后，准确率进一步提高接近
98%。近红外光谱具有快速无损失、低消耗的特点，
在高通量筛选非法添加的阳性样品时，可以考虑其
作为前期鉴定方法，应用于实际工作中。
参考文献
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(收稿日期 2013-05-13
檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿
)
(上接第 13 页)
配伍药味。迄今文献报道了菝葜黄酮类成分为其主
要抗肿瘤活性物质，并从中分离和筛选出多种抗肿
瘤活性化合物［2-3］。笔者选取 3 种具有代表性的非小
细胞肺癌细胞 A549、NCI-H23 及 NCI-H522 为实验
用细胞株，对菝葜乙醇粗提物、总鞣质部位和总黄
酮部位进行了抗肺癌细胞活性筛选。研究结果表明
菝葜总鞣质部位致 3 种肺癌细胞死亡率最高，且在
浓度范围内呈现良好的计量依耐性，说明菝葜鞣质
部位具有良好的体外抗非小细胞肺癌活性，从而为
进一步诠释菝葜治疗肺癌的物质基础提供实验依据，
具有重要意义。
参考文献
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(收稿日期 2013-08-09)
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