全 文 ：莲瓣兰（ !#$%&%’# (%)*+)* !#$ %& ’#$）是
云南省三江并流地区特有的具有极高观赏价值和
经济价值的兰属植物。笔者曾用徒手切片法观察莲
瓣兰的胞内菌丝团，三次调查结果，其菌根感染率
分别为()*+,-、((*,.-、,/*((-；共得到.).株真菌，
属于半知菌和子囊菌〔 .〕。从优势菌中选择0株进行
生理特性实验。
. 材料及方法
.*. 菌种来源 12).菌株：丝核菌（ ,-./01/*%)
34*）；12)0菌株：花顶孢属真菌（ 2&3%4(() 34*）；
12.,/菌株：色串孢属真菌（ 5/3’() 34*）；12.+(菌
株：毛壳菌（ !-)41/#%’# 34*）；12.5.菌株：木酶
［ 基金项目］ 云南省教育厅科研基金资助项目（ 6+7.0,8）
［ 收稿日期］ (66596(9(6
［ 作者简介］ 李明（ .:559），男，云南牟定人，副教授，主要从事生物学研究*
莲瓣兰内生真菌利用碳源的生理学特性研究
李 明.，周 斌(，施继惠.，杨 琳.
（ .*大理学院，云南大理 5/.666；(*云南大学微生物研究所，云南昆明 506666）
［ 摘要］ 对分离自莲瓣兰根内的0株内生真菌利用碳源的生理学特性进行研究，方法是三点种植实验，培养
0;，测量碳源培养基上内生真菌菌落直径，同时，进行液体培养0;，将菌丝过滤，烘干至恒重，计算菌丝干重。
结果：这0株内生真菌利用碳源能力各不同；其中，属于木霉属的12.5.菌株对各种碳源均有很好的利用能
力，尤其在纤维素培养基上生长最快；并且，12.5.菌株在葡萄糖液体培养基内生长最快，培养0;后菌丝干重
达到.*.)$<.66=>。
［ 关键词］ 莲瓣兰；内生真菌；碳源
［ 中图分类号］ ?:+:*/.@)*+, ［ 文献标识码］ A ［ 文章编号］ .5/(9(,+0（ (665）6+9666.96,
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大理学院学报
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第1卷 第 2 期 3445 年 2 月
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（ !#$%&’()* !#）。
$#% 培养基配方
$#%#$ 斜面菌种培养基 &&培养基（ &’(培养基中
加$)蛋白胨）。
$#%#% 不同碳源实验培养基
（ *+,）%-., /#0)
1+%&., /#$)
23-., /#/0)
酵母膏 /#/%)
琼脂 %)
用蒸馏水配制，+4#/—4#0。
在以上培养基中加%)葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、羧
甲基纤维素粉、可溶性淀粉、麦秆糠。
$#5 菌种活化
$#, 不同碳平皿菌落三点种植实验 取/#567大小
生长旺盛的菌落植入平皿中，每皿种三块，%89温箱
培养0:，测量菌落直径，对每一种营养每株菌重复0
皿，测定求平均值，并拍照。
$#0 不同碳源摇瓶测定生物量实验
$#0#$ 培养基配方 同$#%#%，不加琼脂做成液体培
养基。用%0/7;三角瓶，每瓶装$//7;，用一层布一层
牛皮纸扎口，$/磅 %/7<=灭菌备用。
$#0#% 操作过程 取活化平皿在菌落生长旺盛区
切每块大小为/#067，取三块放入碳氮源实验三角瓶
中，并尺量捣碎，每一种营养每株菌重复0瓶，%8>
%9，共0:，$%/? @ 7<=。
$#0#5 生物量测定 所用滤纸编号称重，记下滤纸
重量。将培养好的$//7;培养液用漏斗过滤，经无菌
水冲洗多次，将菌丝及滤纸放入009烘箱，烘烤为恒
重，称菌丝与滤纸共重，减去滤纸本身重量，求0瓶
的平均值，即为菌丝干重。
$#4 菌剂的生产
$#4#$ 液体菌种的培养 用&&液体培养基，将活化
好的菌种斜面转入三角瓶中，摇瓶A:，为菌剂生产
菌种。
$#4#% 菌剂培养基配方
麸皮 5/)
麦杆糠 A/)
白糖 5)
尿素 /#A0)
1+%&., /#/$)
23-., /#/0)
花卉用微量元素$7;@B3，+4#/—4#0。
料：水为$C$#%D$#0
$#4#5 拌料灭菌
$#4#, 接种培养 接入已准备好的液体菌种，%8>
%9，放置$%D$8E，料温上升，这时要即时抖料，料温
不能超过509，经过A:培养，基料结块成团，温度下
降，即培养成功，009烘干，即为菌根菌肥菌剂。
% 实验结果
%#$ 碳源实验结果（ 见表$）
表$ 不同碳源三点种植菌落直径（ 67）
FGH;# ’
表% 菌丝干重（ 3@$//7;）
FGH%#’?O NI<3EJ KL 7O6I;
5 讨论
5#$ 0株菌对碳源利用的特点 目前对兰科内生真
菌生理学特性研究报道较少，大多数都可以在&’(
培养基上生长，可以利用的碳源包括葡萄糖、淀粉、
纤维素〔 %〕、果胶〔 5〕、木质素等，对氮源、维生素没有
严格要求。郭秀珍认为兰科内生真菌在碳源利用方
面比其它担子菌更广泛〔 ,〕。
P&8$对碳源的利用一般，但在纤维素及麦秆糠
P&$4$
A#/Q,#/
A#/Q,#/
A#/Q,#/
A#/Q,#/
满皿
满皿
碳源
种类
葡萄糖
蔗糖
麦芽糖
可溶性淀粉
羧甲基纤维素
麦秆糠
菌 号
P&8$
%#/Q$#0
$#0Q$#/
%#/Q$#0
%#0Q%#/
,#4Q5#/
,#/Q5#/
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%#/Q$#0
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5#/Q%#0
%#0R5#/Q%#0
5#0R,#/Q5#/
5#0Q5#/
P&$5A
%#/Q%#/
%#/Q%#/
%#0R5#/Q%#0
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5#0R,#/Q%#0R5#/
5#0Q%#0
P&$,%
5#/Q$#0
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%#0Q%#0
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5#/Q%#0
,#/Q5#0
P&$4$
$#$8
$#$4
/#04
碳源
葡萄糖（ 口服）
白糖
废糖蜜
菌 号
P&8$
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$#$$
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P&80
/#40
/#58
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P&$5A
/#4
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/#$0
P&$,%
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/#0A
/#$/
大理学院学报总第 ! 期 自然科学
!
培养基上生长较好，表现有纤维素酶活性，可能与
共生习性有关。从菌落的生长看，!#$也是能有效
利用纤维素物质的菌株。
!%&’、!%()两株菌，除了形态特征，菌丝色泽
不同外，其他生物学特性十分相似。表现在对碳源
的利用能力相近，在摇瓶培养时，菌丝生长稀少，三
角瓶底部产生大量的断裂杆状菌丝，可能属一种厚
垣孢子，值得进一步研究。在这一点上与许多内生
菌相似，笔者在观察杏黄兜兰内生菌时，也发现菌
丝上生长大量的厚垣孢子。
!%*%菌株经发酵或促孢，初步鉴定为绿木霉，
它对各种不同碳源均能较好的利用，特别是在麦秆
糠培养基中，长势很快，可能含有较高的纤维素酶
活性。在菌物的不同生长发育阶段，它们的活性是
有变动的。用不同培养基培养侧耳（ !#$%&’$(）的过
程中，测定其羧甲基纤维素酶和半纤维素酶。结果
发现，在菌丝生长阶段这些酶的活性比较低，等到
菇原基形成后，酶活性就迅速上升。当子实体形成
时达到高峰，以后又下降。在不同培养基同一生长
发育阶段中，酶活性的差异并不显著，但是当子实
体成熟时，其纤维素酶活性受基物的影响很大。研
究人员研究玉蕈（ )*+(,-$.$( /0%&%#$(）的酶功能，
发现此菌分解纤维素和半纤维素的能力极强而分
解木质素的能力较弱。从此菌分离出来的酶有羧甲
基纤维素酶、滤纸纤维素酶、半纤维素酶、淀粉酶和
朊酶，酶活性的变动和子实体的形成成正比例。
!%*%菌株含有哪些纤维素酶？在菌丝生长阶段这
些酶活性变化规律如何？仍待研究。
不利于菌物合成新物质的碳源有可能推迟新
物质的合成从而延长菌物生长的迟发期，迟发期之
后便进入指数伸长期，此时菌丝伸长速度很大。当
然，影响这种速度的因素也是碳源物质。有些物质
的作用非常特别，例如葡萄糖是一种很好的碳源营
养，但是，它的浓度却是一个限制因素。例如在培养
基中把葡萄糖的浓度从%+,升到(+,，那么赤霉菌
的生长速率就会减退。因此，通过实验寻找出每一
种内生真菌最佳碳源的最适浓度是值得深入研究
的课题。有关研究表明，对于食用菌来说，最好的碳
源为葡萄糖〔 $〕。本次实验，没有用价廉易得的豆饼
粉、花生饼粉及麸皮的浸出液进行实验，值得进一
步补充实验。
&-) 生物量得率 由于菌种对碳氮源的利用能力
不同，!#%、!#$、!%&’、!%()菌株生物量得率较
低，只有!%*%达到国内一般中等水平。国内最高可
到)-+./%++01，一般为%-+左右〔 $〕。经过改良，!%*%菌
株将有一定的应用价值。
&-& 菌剂应用前景 由于!%*%菌株在麦杆糠培养
基上生长较好，可以用它作为多效有机菌肥发酵菌
种，即以农村有机废弃物为原料，经过专性微生物
腐熟，使其含有较高的有机肥效，再植入固氮菌、磷
转化细菌、钾转化细菌，使其在此基质中增殖，达到
一定含菌量，组合菌剂具有促进作物吸收利用、促
进植物生长、抗病害、降解农药等作用。
［ 参考文献］
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学版），)++(，)(（ %）3$(4$’-
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李 明，周 斌，施继惠，等 莲瓣兰内生真菌利用碳源的生理学特性研究 第 ! 卷总第 # 期
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