全 文 ：重瓣铁线莲愈伤组织诱导研究
张涛1 ,周 琼2＊ ,张丽琼2 ,屈国胜2 ,廖咸康2　(1.陕西省安康市农科所 ,陕西安康 725021;2.安康学院 ,陕西安康 725000)
摘要　[目的]为运用现代生物技术开发利用重瓣铁线莲提供参考。[方法]以重瓣铁线莲的茎段为外植体 ,在MS 基本培养基中添加 0.2
mg/L IAA , 0.5、1.0、1.5、2.0mg/ L的 6-BA和 0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mg/L的2 , 4-D ,观察重瓣铁线莲愈伤组织的诱导情况 ,统计诱导率。
[结果]各处理诱导出的愈伤组织均为致密型愈伤组织 ,很少进行分裂分化 ,故在增殖培养中需提高植物生长物质的浓度。培养基MS+
1.0 mg/L 6-BA+0.8 mg/L 2 , 4-D+0.2 mg/ L IAA的诱导效果最好 ,不仅形成的愈伤组织量多 ,而且诱导率高达 90.0%。在重瓣铁线莲愈
伤组织诱导中 ,植物生长物质 6-BA、2 ,4-D、IAA的适宜比例为 5∶4∶1。[结论] 重瓣铁线莲茎段愈伤组织适宜的诱导培养基为:MS+1.0
mg/L 6-BA+0.8 mg/L 2 , 4-D+0.2 mg/L IAA。
关键词　重瓣铁线莲;茎段;愈伤组织;诱导;分化
中图分类号　S 722.3+1　　文献标识码　A　　文章编号　0517-6611(2008)22-09402-01
Study on Induction of Clematis florida var.Plena Callus
ZHANG Tao et al　(Agricultural Science Reseach Institute of Ankang , Ankang, Shaanxi 725000)
Abstract　[Objective] The study was to provide an reference for exploitation Clematis florida var.plena using modern biotechnology.[Method] With the
stem of C.florida var.plena as explant , the induction effect of C.florida var.plena calluswas observed and the induction ratewas statisticed , after adding
0.2 mg/L IAA , 0.5, 1.0 , 1.5 , 2.0mg/L 6-BA and 0.1, 0.2 , 0.4 , 0.6, 0.8 , 1.0 mg/ L2 , 4-D intoMS medium.[ Result] The induced calluses of differ-
ent treatments were all compact callus and were seldom in division and differentiation.So it was needed to improve the concn.of growth substances in enrich-
ment culture.The induction effect of medium MS +BA 1.0 mg/L+2 , 4-D 0.8 mg/L+IAA 0.2 mg/L was best with more callus and higher inductivity
(90.0%).In the process of induction of C.florida var.plena callus , the optimum proportion of regulator BA , 2 , 4-D , IAA was 5∶4∶1.[Conclusion] The
optimum induction medium for callus of C.florida var.plena stem was MS+1.0 mg/ L6-BA+0.8 mg/L 2 , 4-D+0.2 mg/L IAA.
Key words　 C.florida var.plena;Stems;Callus;Induction;Differentiation
基金项目　安康学院科研启动专项经费项目(AYQDZR-200631)。
作者简介　张涛(1968-), 男 ,贵州贵阳人 ,农艺师 ,从事生物技术研
究。 ＊通讯作者。
收稿日期　2008-05-19
　　重瓣铁线莲(Clematis florida var.Plena)属于毛茛科植物 ,
因其适应性强 ,抗旱耐寒 ,花期长 ,成为现代园林中垂直绿化
的优良植材 ,国外园林中应用甚多 ,多用于花篱 、花架 、拱门 、
绿廊等园林小品装饰。盆栽可布置阳台 、窗台和室内盆架 ,
或者悬挂栽培。由于重瓣铁线莲雄蕊全部成花瓣状[ 1] ,无法
按常规的方式产生种子用于播种 ,只能采用压条 、扦插等无
性繁殖方式繁殖种苗 ,但其繁殖系数很低。为此 ,笔者以重
瓣铁线莲茎段为材料 ,研究了植物激素 6-BA和 2 ,4-D不同浓
度组合对重瓣铁线莲愈伤组织诱导的效应 ,为现代生物技术
开发利用这一植物提供参考。
1　材料和方法
1.1　试验材料　供试材料为安康市本地品种绿花重瓣铁线
莲的幼茎。
1.2　试验方法　将供试材料用自来水冲洗 20 min后 ,在无
菌操作台上用 70%酒精浸泡处理 5 s ,再用 0.1%的升汞消毒
8min ,无菌水冲洗 34次 ,将茎段切成 1 cm左右小段接种于培
养基上培养[ 2-3] 。
1.3　培养基及培养条件
1.3.1　培养基。以MS培养基为基础培养基 ,附加 0.3%蔗糖 ,
0.7%琼脂 ,pH值 5.8。在此基础上分别添加不同浓度的 6-BA
(0.5、1.0、1.5、2.0 mg/L)、2 , 4-D(0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0
mg/L)、IAA(0.2mg/L)共组成 24个培养基 ,其组合配方见表 1。
1.3.2　培养条件。培养温度为 25 ℃,光照强度 1 500～ 2 000
lx ,光照 12 h/d ,湿度 60%。
2　结果与分析
2.1　不同激素组合对茎段愈伤组织诱导的影响　重瓣铁线
莲茎段培养 7 d后 ,茎段开始膨大 ,10 d后在茎段切口部位形
成较致密的颗粒状愈伤组织 ,呈淡黄色。培养 30 d后除培养
基 5号 、9号 、11号 、14号 、19号的愈伤组织诱导率较高外(表
2),其余各培养基的愈伤组织诱导率均较低。
表1　不同激素组合配方
Table 1　 Formula of different hormone combinations mg/ L
培养基序号
No.of media 6-BA 2, 4-D IAA
培养基序号
No.of media 6-BA 2 ,4-D IAA
1 0.5 0.1 0.2 13 1.5 0.1 0.2
2 0.5 0.2 0.2 14 1.5 0.2 0.2
3 0.5 0.4 0.2 15 1.5 0.4 0.2
4 0.5 0.6 0.2 16 1.5 0.6 0.2
5 0.5 0.8 0.2 17 1.5 0.8 0.2
6 0.5 1.0 0.2 18 1.5 1.0 0.2
7 1.0 0.1 0.2 19 2.0 0.1 0.2
8 1.0 0.2 0.2 20 2.0 0.2 0.2
9 1.0 0.4 0.2 21 2.0 0.4 0.2
10 1.0 0.6 0.2 22 2.0 0.6 0.2
11 1.0 0.8 0.2 23 2.0 0.8 0.2
12 1.0 1.0 0.2 24 2.0 1.0 0.2
　注:以上培养基均以 MS为基础培养基 ,附加 0.3%蔗糖 , 0.7%琼脂 ,
pH值均为 5.8。
　Note:In the above media , 0.3% sucrose and 0.7% agar were added into MS
basic medium with pH value of 5.8.
表 2　不同激素组合对基段愈伤组织诱导的影响
Table 2　Effects of different hormone combinations on the callus induction
of stem segments
培养基序号
No.of media
接种茎段数
Number of inoculated
stem segments
诱导愈伤数
Number of
induced calli
诱导率∥%
Induction
rate
5 20 10 50.0
9 20 13 65.0
11 20 18 90.0
14 20 14 70.0
19 20 11 55.0
(下转第 9542页)
安徽农业科学 , Journal of Anhui Agri.Sci.2008 , 36(22):9402, 9542　　　　　　　　　　　　　　　　　　责任编辑　章练红　责任校对　况玲玲
DOI :10.13989/j.cnki.0517-6611.2008.22.088
效果最好的发酵产物与 2种抗生素比较 ,其中对沙门氏菌的
抑菌活性 2种抗生素明显高于内生真菌发酵产物 ,对大肠杆
菌的抑菌活性内生真菌发酵液与硫酸链霉素抑菌活性相当 ,
强于青霉素的抑菌活性 ,菌丝体丙酮提取液活性明显强于 2
种抗生素(表 5)。
表 5　内生真菌发酵产物抑菌活性比较
Table 5　The antibacterial activity comparison of endophytic fungi fermen-
tation products
样品
Samples
抑菌圈大小∥cm
Size of bacteriostatic circle
大肠杆菌
Escherichia coli
沙门氏菌
Salmonella
PG1发酵液 2.15 -
PG1 fermentation liquid
PG2菌丝体丙酮提取液 2.50 -
Acetone extract of PG2 mycelium
硫酸链霉素Streptomycin sulfate 2.05 1.84
青霉素 Penicillin 1.47 1.36
丙酮溶液Acetone solution - -
3　结论与讨论
蒲公英素有“天然抗生素”的美称 ,常作为饲料添加剂使
用。近年来 ,从蒲公英中提取出的有效化学成分有三萜类 、
黄酮类 、香豆精类 、倍半萜内酯类 、植物甾醇类 、色素类 、挥发
油类 、乙酰酯类 、绿原酸等[ 7] 。近年来 ,植物内生菌研究的热
点在于如何从内生菌的代谢产物中得到与宿主相似或者新
的有效的生物活性物质 。蒲公英内生真菌的代谢有效物质
同样可以作为绿色 、环保 、无残留的禽类抗生素的替代产品 。
这样以来蒲公英和其内生真菌就是有待开发的宝贵资源 。
该研究的结果表明 ,蒲公英内生真菌发酵物对从禽类分
离出的 2种致病菌中的大肠杆菌有较强的抑菌能力 ,同其他
常用抗生素比较效果相同 ,甚至强于抗生素 。但不足之处在
于 , 2种发酵产物对沙门氏菌均没有抑菌效果 ,可能的原因是
打洞法准确率不高 ,对菌丝体的处理应选取几种不同极性的
溶剂提取 ,同时 ,内生真菌传代次数过多导致抑菌能力降低
所致等。蒲公英内生真菌在禽类细菌性疾病的防治中的应
用前景十分广阔 ,在今后的试验中应该进一步对内生真菌的
有效抑菌成分进行细致的研究。
参考文献
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与营养 , 2005(4):47-48.
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的影响[ J] .应用生态学报 , 2003, 14(9):1526-1528.
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(上接第 9402页)
　　从各处理愈伤组织的诱导率来看 ,在愈伤组织诱导率
较高的 5个培养基中 ,以 11号培养基的诱导效果最好 ,不
仅形成的愈伤组织量多 ,且诱导率高达 90%;其次是处理
14号培养基 ,诱导率达到 70%;其余各培养基的诱导率依
次为处理 9>处理 19 >处理 5 。这说明培养基 MS +6-BA
1.0 mg/L+2 ,4-D 0.8mg/L +IAA 0.2mg/L最利于重瓣铁线
莲茎段愈伤组织的诱导 。
2.2　植物激素适宜诱导茎段愈伤组织的比例　在植物的
组织培养中 ,细胞分裂素与生长素的比例影响着外植体的
器官分化及愈伤组织的形成 ,比例过高 ,促进长芽 ,过低则
促进生根 ,只有比例适中时才能诱导愈伤组织的形成 。在
该试验所使用的植物激素中 ,细胞分裂素 6-BA和 2 , 4-D能
促进细胞分裂 ,诱导愈伤组织的形成 ,生长素 IAA能促进生
根 , 由试验结果可知 ,在重瓣铁线莲的茎段培养中 ,6-BA∶2 ,
4-D∶IAA的适中比例为 5∶4∶1。
3　结论与讨论
(1)适宜重瓣铁线莲茎段愈伤组织诱导的最佳培养基
为MS+6-BA 1.0mg/L+2 ,4-D 0.8mg/L+IAA 0.2mg/L。各
培养基诱导出的愈伤组织均为致密型愈伤组织。而致密型
的愈伤组织内部由管状细胞组成维管组织 ,细胞间有果胶
质紧密地粘连 ,细胞为高度液泡化的细胞 ,很少进行分裂分
化 ,故需要加入高浓度的植物激素使其转变为松脆型的愈
伤组织 ,才有利于进一步分化诱导形成完整的植株 。这说
明该试验所设计的激素组合配方中激素浓度偏低 ,故在增
殖培养中需进一步提高植物激素的浓度。
(2)当植物激素 6-BA 、2 ,4-D和 IAA配合使用时 ,其诱导
重瓣铁线莲茎段愈伤组织的适宜比例为 6-BA∶2 , 4-D∶IAA=
5∶4∶1。
参考文献
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