全 文 :金光杏梅是外引杏苗中的一个梅类品种,现
定植在新乡县古寨乡林场。为多年生落叶果树,主
要分布在华北的山区丘陵地带,是杏与李子的自
然杂交后代。果实金黄色,果肉厚,且富含大量维
生素,有香气,耐储运。具有很强的栽培性、抗逆
性,且耐盐碱、耐瘠薄,在各类土壤中均能生长,而
且该品种还具有果个大,结实率高,丰产、稳产、品
质好等特点。杏梅果品还是一种富含多种营养成
分及抗癌保健功能的稀有果品。因此,杏梅市场前
景广阔,颇受种植者和消费者的欢迎,但是用常规
的繁殖方法不能快速大量推广种植,满足不了消
费者的需要,从而导致了供求矛盾冲突,而利用组
织培养的方法,可以克服这种矛盾,但到目前为
止,金光梅杏的组织培养研究尚未见报道。本试验
对金光杏梅初代培养进行了研究,为金光杏梅的
快速繁殖和大力推广及工厂化生产提供理论及操
作技术依据。
收稿日期:2009- 11- 12
作者简介:李建恒 (1980- ),女,中教,主要从事园艺技术教学
工作。
1 材料与方法
1.1 材料
金光杏梅的带芽茎段。
试验于 4~5月在组培实验室进行,选取树势
健壮,新稍长短一致,粗细均匀,生长势强,无病虫
害,多分布在树冠的中部外围枝条为试验材料。
1.2 方法
1.2.1 外植体的消毒
把采集来的外植体去掉叶片和叶柄 (需保留
0.1~0.2 cm的叶柄 ,以免伤芽),剪成 4~5 cm的
茎段放在自来水下流水冲洗干净,在无菌条件下,
用 75%的酒精浸泡 30 s,再置于 0.1%升汞溶液中
消毒 10 min,然后用无菌水冲洗 5 次,用剪子剪
成 1 cm左右的带芽茎段,接种于诱导培养基上。
1.2.2 培养基
试验有 3 种基本培养基:MS培养基、B5 培养
基、NN培养基,3 种培养基中其他添加成分为蔗
糖(sucrose)20 g/L,琼脂(tcagar)7.5 g/L。培养基 的
pH植在灭菌前用 1 mol/L氢氧化钠或 1 mol/L氯
化氢调至 5.8。
文章编号:1003- 8701(2010)02- 0043- 03
金光杏梅带芽茎段初代培养的研究
李健恒
(新安县职业高级中学,河南 洛阳 471800)
摘 要:选用不同培养基和不同浓度配比的激素对金光杏梅品种的带芽茎段进行初代培养研究。结果表
明:3 种培养基中 B5 作为基本培养基最适合诱导金光杏梅的芽增殖;在不同浓度配比的激素中以 B5+1.5mg/L
6- BA+0.02 mg/L NAA最合适。
关键词:金光杏梅;带芽茎段;初代培养
中图分类号:S662.4 文献标识码:A
Studies on Primary Culture of Stem-let with Buds of
‘Jinguang’Apricot Plum
LI Jian- heng
(Vocational High School of Xinan County, Luoyang 471800, China)
Abstract: Primary culture of stem- let with buds of Jinguang apricot plum was studied different
medium and different concentration of hormones. The results showed that among 3 medium, B5 was optimum
for inducing propagation of buds. B5 with 1.5 mg/L of 6- BA and 0.02 mg/L of NAAwas the best medium.
Keywords:‘Jinguang’apricot plum; Stem- let with buds; Primary culture
吉林农业科学 2010,35(2):43-45 Journal of Jilin Agricultural Sciences
DOI:10.16423/j.cnki.1003-8701.2010.02.017
所用的激素为:6- BA (上海化学试剂总厂)、
NAA(北京化工厂)。
1.2.3 培养容器及灭菌
所用培养容器为 100 mL的大试管 225 个,
每试管倒培养基 20 mL。
培养基灭菌用手提式高压灭菌锅,在灭菌前,
先检查灭菌锅中是否放了足量的水,然后将培养
基保持直立状态,依次码入锅中盖上锅盖,接通电
源,当压力上升到 0.05 个大气压时,打开排气阀
放出锅内冷空气后关闭排气阀,使温度慢慢上升
到 121~123℃,维持 25 min,然后断开电源,使温
度慢慢下降到 0.05 个大气压时放气,直到无蒸汽
排出,打开锅盖,拿出培养基,放入接种室凝固后
待用。
1.2.4 接种
接种前用常规消毒方法对接种室进行消毒,
室内的地拖干净,再用 75%的酒精喷洒一遍,打
开紫外灯照射 30 min。工作台的操作表面用 75%
的酒精擦洗一遍,双手也用 75%的酒精擦一遍,
然后打开灭菌的器具(剪子、镊子、小刀等)。带上
口罩,把所用器具在酒精灯上灼烧灭菌,把消过毒
的外植体接到培养基上,接种时试管口倾斜 45°
角,试管口接近酒精灯内焰,以防杂菌进入。
1.2.5 培养条件
培养室中温度为 25℃,光照强度为 2 000~3 000
lx,光照周期为光 /暗 =16 h/8 h。
1.3 试验设计
第一个设计方案设置了 3 种基本培养基的筛
选,激素浓度配比固定时,筛选 3 种基本培养基,
从中选出最适合金光杏梅生长的培养基。第 2 个
设计方案为:基本培养基固定时,筛选不同激素浓
度配比,从中选出最适合金光杏梅带芽茎段生长
的激素浓度配比。
1.4 结果统计
统计芽的萌发率、生长势和小子叶展开数。数
据采用百分数 t测验分析法。
2 结果与分析
2.1 不同基本培养基对金光杏梅带芽茎段的影
响
表 1 基本培养基与不同激素组合的设置
代号 基本培养基
激素配比(mg/L)
6- BA NAA
M1 0.5 0.02
M2 1.0 0.02
M3 MS 1.5 0.02
M4 2.0 0.02
M5 0 0
B1 0.5 0.02
B2 1.0 0.02
B3 B5 1.5 0.02
B4 2.0 0.02
B5 0 0
N1 0.5 0.02
N2 1.0 0.02
N3 NN 1.5 0.02
N4 2.0 0.02
N5 0 0
表 2 基本培养基对金光杏梅带芽茎段萌发率的影响
基本培养基 CK
激素浓度配比(mg/L)
生长势 小子叶展开数(个)6- BA+0.02NAA
0.5 1.0 1.5 2.0
MS 73.3% 56% 50% 31.2% 83.3% 长势慢 5
B5 68.1%a 90%a 85.7%a 94.7%a 88.2%a 长势快 22
NN 50%a 89.4%a 79.1%a 84.6% 88.8%a 长势一般 16
由表 2 可知,在激素水平相同的情况下,3 种
培养基的芽的萌发率、生长势及小子叶展开数存
在差异。
金光杏梅的带芽茎段接种到培养基 MS、B5、
NN中生长 7 d 左右,芽开始萌动,经过 45 d 的观
察与记录,发现金光杏梅萌发情况在 3 种培养基
中是不同的,从表 2 可以看出,在 MS培养基上,
无论是哪种激素浓度配比其萌芽率都较低,而且
发芽不整齐,芽生长势缓慢,小子叶展开只有 5
个;在 B5 培养基上 5 种激素浓度配比其萌发率
都是最高的,最高达到 94.7%,而且整体萌芽情况
都非常好,小子叶展开数 22 个;在 NN培养基上
萌芽率也较高,最高的达到 89.4%,小子叶展开数
为 16个。经百分数 t检验。B5和 NN培养基差异
不显著,而与 MS培养基相比则差异显著。可见,
B5 和 NN培养基都适合金光杏梅带芽茎段的生
长。而 B5虽与 NN差异不显著,但萌发率都高于
NN,而且子叶展开个数大于 NN,且长势快,所以
B5最适合金光杏梅带芽茎段的生长。
2.2 不同激素浓度配比对金光杏梅带芽茎段的
影响
由表 3可知,金光杏梅带芽茎段接种到激素浓
度配比不相同的培养基中,激素对金光杏梅带芽茎
段的生长有一定的影响作用,培养基相同,添加激素
的萌发率都显著高于对照,说明激素在其中起很大
作用 (从表 2可知,MS培养基最不适合金光杏梅的
44 35卷吉 林 农 业 科 学
表 3 不同激素浓度配比对金光杏梅带芽茎段萌发率的影响
激素浓度配比(mg/L) B5 NN
6-BA NAA 萌发率(%) 生长势 小子叶展开数(个) 萌发率(%) 生长势 小子叶展开数(个)
0.5 0.02 90.0 一般 6 89.4 长势快 6
1.0 0.02 85.7 缓慢 3 79.1 长势缓慢 1
1.5 0.02 94.7 快 9 84.6 长势慢 4
2.0 0.02 88.2 缓慢 4 88.8 长势较快 5
0 0 68.1 较慢 0 50.0 长势最慢 0
生长,故在此不再叙述)。当基本培养基为 B5时,6-
BA浓度为 1.5 mg/L时,萌发率达到 94.7%,而且长
势最快,小子叶展开数 9 个,效果最佳;其次是 6-
BA浓度为 0.5 mg/L时萌发率达到 90%,长势较快,
小子叶展开数为 6个。而当基本培养基为 NN时,6-
BA浓度为 0.5 mg/L时,萌发率达到 88.8%,小子叶
展开数为 5个。由此可见,在 B5培养基中,当 6-BA
浓度为 1.5 mg/L NAA为 0.02 mg/L时最适合金光杏
梅的带芽茎段生长,在 NN培养基中,6-BA为 0.5
mg/L时最适合。
3 讨论
3.1 金光杏梅初代培养影响因素中激素的作用
激素尤其是细胞分裂素和生长素在调节外植
体生长中起着关键作用,植物细胞具有全能性,但
对于特定的器官能否表现出全能性则取决于是否
具有合适的激素诱导,因此,在组织培养中要根据
外植体确定合理的激素配比。许多资料表明,诱导
芽一般必须要求与细胞分裂素与生长素进行合理
搭配。本试验在最合适培养基 B5的基础上,通过
调整 BA与 NAA的浓度比发现,二者比例偏大时
效果最好,这与 Miller 研究的结果相一致。
3.2 金光杏梅初代培养影响因素中基本培养基
的作用
由于培养基所含的大量元素、微量元素、维生
素不同,造成外植体对其适应性不同,当培养基适
合外植体生长时,其萌发率就高,反之,则较低,试
验发现:在 MS培养基上金光杏梅带芽茎段萌发率
最低,可能是因为 MS含有高浓度的无机盐,金光
杏梅的生长受到抑制,而有关资料表明,B5培养基
含有较低的铵盐,对有些植物如双子叶植物特别
是木本植物更适合生长。试验结果也证明 B5培养
基是最适合金光杏梅带芽茎段萌发的培养基。
3.3 培养条件对培养材料的影响
通过培养接种材料还发现,有少量萌动的芽
会慢慢变成黄白色,出现生长停滞现象,最后,呈
萎蔫状,这可能是由于培养室温度(最高达 40℃)、
湿度(最高有 30%左右)变化太大,不能适合其生
长而造成的,或者是由于随容器里的水分以气态
逸出,培养基的含水量下降,不能满足外植体对水
的需要而造成的。
在观察中还发现,有一个玻璃化苗出现,这也
可能是由于温湿度没有控制好所造成的,但有的
学者则以为培养基中 6- BA浓度与玻璃化呈正相
关,6- BA浓度越高,玻璃化苗比率越大 [1],还有人
以为,玻璃化苗是培养瓶内气体与外界交换不畅
造成的,密闭的封瓶口材料是导致玻璃化的原因
之一,但目前为止仍未得出一致看法。
4 结论
最适合金光杏梅的带芽茎段生长培养基是
B5 培养基,其次是 NN培养基,最不适合的为 MS
培养基。
基本培养基相同不同激素浓度配比中,最适
合的是 B5+6- BA1.5 mg/L+0.02 mg/L NAA,其次
是 NN+0.02 mg/L NAA。
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2期 45李健恒:金光杏梅带芽茎段初代培养的研究