全 文 ：收稿日期:2006-04-03
作者简介:赵燕燕(1972-), 女(汉族), 辽宁盖州人 , 讲师 , 博士 , 主要从事天然产物活性成分的研究与开发 , Tel.
0535-6706030-8019 , E-mail Zhaoyy@luye-pharm.com;孙启时(1945-), 男(汉族), 吉林松源人 , 教授 , 主要从
事中药资源开发与利用的研究 , Tel.024-23986468 , E-mail sunqishi@sina.com。
文章编号:1006-2858(2007)02-0086-03
RP-HPLC法测定白茅根中 siderin含量
赵燕燕1 , 曹　悦2 , 孙启时3
(1.烟台大学 药学院 ,山东 烟台 264003;　2.辽宁省药品检验所 中药室 ,辽宁 沈阳 110021;
3.沈阳药科大学 中药学院 , 辽宁 沈阳 110016)
摘要:目的 建立白茅根中 siderin(4 , 7-二甲氧基-5-甲基-香豆素)的含量测定方法。方法 采
用RP-HPLC 法。色谱柱为Kromasi-ODS 柱 , 流动相为甲醇-水(体积比为 45∶55), 流速为 0.8
m L·min-1 , 检测波长为 323 nm , 柱温为 30 ℃,进样量为 20 μL。结果 同时测定了湖北恩施 、黄石 ,
湖南浏阳 ,山西运城 、榆次 ,河北保定 ,河南南阳 、郑州 , 内蒙古呼伦贝尔 , 甘肃兰州 10 个不同产地
白茅根中 siderin 的含量。以峰面积(A)为纵坐标 , siderin 质量浓度(ρ)为横坐标 ,绘制标准曲线 ,回
归方程为 A =4.0 ×106ρ-1.55×105 , 线性范围为 10.5 ～ 105 mg· L-1 , 平均加样回收率为
99.58%, RSD为 2.18%(n =6)。 10 个不同产地白茅根中 siderin 的含量为 8.00 ～ 52.8 μg·g-1。
结论 用RP-HPLC 法测定白茅根中 siderin 的含量 , 灵敏度高 , 重现性和稳定性好 , 该法为白茅根
药材建立质量标准提供了依据。
关键词:白茅根;siderin;4 , 7-二甲氧基-5-甲基-香豆素;反相高效液相色谱法
中图分类号:R 917　　　文献标志码:A
　　白茅根为禾本科植物白茅(Imperata cyl in-
drical Beauv.var.major(Nees)C.E.Hubb)的干燥
根茎 ,全国各地均产 ,具有凉血止血 、清热利尿 、保
肝等功效[ 1] 141 。白茅根中的活性成分主要有三
萜类 、香豆素类 、单糖类等[ 2-4] 。白茅根的质量
控制通常以薄层色谱扫描法确定指标性成分白茅
素和芦竹素的含量[ 5] ,而这两种成分在禾本科竹
亚科植物中普遍含有。作者通过对采自 10个不
同产地的白茅根及其伪品柳叶白前的化学成分的
研究发现 , 10个产地的药材中均含有特征性成分
siderin(4 , 7-二甲氧基-5-甲基-香豆素 ,结构
式见图 1),而禾本科其他植物和伪品中均不含
有[ 6] 。因此 ,作者选用 siderin 为对照品 ,首次用
RP-HPLC法对白茅根进行质量控制 ,为白茅根
药材建立质量标准提供了依据 。
Fig.1 　 Structure of 4 , 7-dimethyloxy -5-methyl-
coumarin(siderin)
1　仪器与材料
高效液相色谱仪(含 LC-10Avp输液泵 、SPD
-10Avp紫外检测器 、天美工作站 ,日本 Shimadzu
公司),甲醇(色谱纯 ,天津四友公司),去离子水
(自制), 对照品 siderin(自制 , 纯度质量分数 >
99%)。
白茅根药材采自湖北恩施 、黄石 ,湖南浏阳 ,山
西运城 、榆次 ,河北保定 ,河南南阳 、郑州 ,内蒙古呼
伦贝尔 ,甘肃兰州等地 ,经沈阳药科大学中药学院孙
启时教授鉴定为禾本科植物白茅(Imperata cylindri-
cal Beauv.var.major(Nees)C.E.Hubb)的根茎。
2　方法与结果
2.1　色谱条件选择
色谱柱:Kromasil C18柱(200 mm×416 mm ,
5μm);流动相:甲醇-水(体积比为 45∶55);流
速:0.8 mL·min-1;检测波长:323 nm;柱温:30
℃;进样量:20 μL。
2.2　溶液的制备
对照品溶液的制备:精密称取减压干燥至质
量恒定的 siderin对照品 5.261 mg ,加甲醇溶解 ,
第 24 卷 第 2 期
2 0 0 7 年 2 月
沈　阳　药　科　大　学　学　报
Journal of Shenyang Pharmaceutical University
Vol.24 　No.2
Feb.2007 p.86
DOI :10.14066/j.cnki.cn21-1349/r.2007.02.006
定容于 25 mL 量瓶中 ,摇匀 ,用 0.45 μm 微孔滤
膜过滤 ,取续滤液备用。
供试品溶液的制备:精密称取白茅根药材粉末
10 g ,置 250 mL 索氏提取器中 ,加氯仿200 mL ,
90 ℃提取4 h ,回收提取液至干 ,残渣用甲醇溶解 ,
定容于 10 mL量瓶中 ,摇匀 ,用 0.45 μm 微孔滤膜
过滤 ,取续滤液备用。
2.3　系统适应性试验
取对照品溶液及供试品溶液在上述色谱条件
下测定 ,色谱图见图 2。理论塔板数按 siderin计
算不低于 5 000 , 与相邻色谱峰的分离度大于
1.5 ,对称因子为 1.00 ,在 siderin的出峰位置未见
其他色谱峰干扰。
A—Standard;B—Sample;1—Siderin
Fig.2　RP-HPLC chromatograms of siderin and sample
2.4　线性关系考察
分别精密吸取 0.5 、1.0 、2.0 、3.0 、5.0 mL 对
照品溶液至 10 mL 量瓶中 ,加甲醇稀释 ,定容 ,分
别吸取上述不同质量浓度的对照品 20 μL 进样 ,
测定峰面积 ,以峰面积(A)为纵坐标 , siderin质量
浓度(ρ)为横坐标 ,绘制标准曲线 。回归方程为
A =4.0 ×106ρ-1.55×105 , r =0.999 6。在
1.05×10-2 ～ 0.105 g·L-1内 , siderin的质量浓度
与色谱峰面积呈现良好的线性关系 。
2.5　精密度试验
精密吸取对照品溶液 20 μL ,重复进样 5次 ,
测定 ,根据 siderin 的峰面积计算其含量 , RSD为
0.78%,表明仪器具有良好的精密度。
2.6　重复性试验
精密称取湖北恩施供试品 5份 ,按“2.2”条方
法制备供试品溶液 ,测定 ,根据 siderin 峰面积计
算其含量 , RSD为 1.74%,表明方法具有良好的
重复性。
2.7　稳定性试验
精密吸取“2.6”条供试品溶液 ,分别于 0、1 、2、4 、
8、16、32、48 h进样 ,测定 ,计算 siderin峰面积 ,RSD为
1.83%,表明供试品具有良好的稳定性。
2.8　加样回收率试验
精密称取已知 siderin 含量的同一批次供试
品6份 ,精密加入对照品适量 ,按“2.2”条方法操
作 ,测定 ,结果见表 1。
Table 1　Recoveries of siderin in Rhizoma Imperatae
Samples madded/mg m found/mg Recovery/ % Average/ % RSD/ %
1 0.210 0.205 102.5
2 0.210 0.206 97.9
3 0.420 0.412 98.0 99.58 2.18
4 0.420 0.428 102.0
5 0.630 0.615 97.6
6 0.630 0.627 99.5
2.9　供试品含量测定
精密称取 10批不同产地的白茅根药材粉末 ,
按“2.2”条方法制备对照品溶液及供试品溶液 ,分
别精密吸取 20 μL ,按上述色谱条件测定 ,根据
siderin峰面积用外标两点法计算供试品含量 ,结
果见表 2。
3　讨论
白茅根以根茎洁白 、味甜者质量为佳。传统
药材中 ,湖北产白茅根甜度高 ,质量好[ 1] 141 。对热
87第 2 期 赵燕燕等:RP-HPLC 法测定白茅根中 siderin 含量　　　
Table 2　Contents(c)of siderin in Rhizoma Imperatae in different areas
Samples Area
c/(μg·g -1)
1 2 3
c/(μg·g-1) RSD/ %
1 Hubei Huangshi 52.8 53.2 52.4 52.8 0.76
2 Hebei Baoding 46.7 47.1 47.0 46.9 0.44
3 Gansu Lanzhou 25.9 26.2 25.5 25.9 1.40
4 Hunan Liuyang 7.90 8.30 7.80 8.00 3.10
5 Shanxi Yuci 27.3 26.4 26.3 26.7 2.00
6 Neimeng Hulunbeier 41.7 40.7 41.7 41.4 1.40
7 Henan Nanyang 13.5 14.5 14.1 14.0 3.80
8 Shanxi Yuncheng 23.0 23.1 22.4 22.9 1.60
9 Henan Zheng zhou 23.1 22.6 22.2 22.6 1.80
10 Hubei Enshi 41.2 41.7 41.2 41.4 0.69
回流提取 、索氏提取和超声提取的考察结果表明 ,
索氏提取法提取最完全。采用正交设计考察了提
取溶剂 、加入溶剂的量和提取时间对提取效果的影
响 ,最终证明用氯仿 200 mL 、90 ℃提取4 h效果最
佳。王明雷等[ 2]曾经分离得到在白茅根中含量甚
微的治疗肝炎的有效成分联苯双酯 ,作者对 10个
产地的药材进行RP-HPLC分析 ,均未发现联苯双
酯的存在 ,可能与采收时间有关。
4　结论
作者首次采用RP-HPLC 法测定白茅根中特
征性指标成分 siderin的含量 ,10个不同产地的药
材中以湖北产药材 siderin的含量最高。该法灵敏 、
稳定 ,为有效控制白茅根的质量提供了新的依据。
参考文献:
[ 1] 凌一揆.中药学 [ M] .上海:上海科学技术出版社 ,
1984.
[ 2] 王明雷 , 王素贤 ,孙启时 , 等.白茅根化学成分的研究
[ J] .中国药物化学杂志 , 1996 , 6(3):192-195.
[ 3] WANG Ming-lei , WANG Su-xian , SUN Qi-shi , et al.
Chemical constituents of Imperata cy lindrica Rhizomes
[ J] .Journal of Chinese Pharmaceutical Sciences , 1996 , 5
(1):53-54.
[ 4] 王明雷 , 王素贤 , 孙启时.白茅根化学及药理研究进
展 [ J] .沈阳药科大学学报 , 1997 , 14(1):67-69.
[ 5] 路金才 , 孙启时 ,王明雷 , 等.白茅根中芦竹素和白茅
素的含量测定 [ J] .沈阳药科大学学报 , 1996 , 13(4):
290-291.
[ 6] 赵燕燕 , 贾凌云 , 孙启时.白茅根药材的指纹图谱
[ J] .沈阳药科大学学报 , 2002 , 19(5):352-354.
Determination of content of siderin in Rhizoma Im-
peratae by RP-HPLC
ZHAO Yan-yan1 , CAO Yue2 , SUN Qi-shi3
(1.The Pharmaceutical School of Y antai University , Y antai　264003 , China;　2.Liaoning Insti tute
for the Control of Pharmaceut ical Products , Shenyang　110021 , China;　3.School of Tradit ional Chi-
nese Materia Medica , Shenyang Pharmaceutical University , Shenyang　110016 , China)
Abstract:Objective To establish a method for the determination of the content of siderin in Rhizoma Im-
peratae by RP-HPLC.Methods The separation w as performed on a Kromasil ODS column(200 mm ×
416 mm , 5 μm).Mobile phase composed of methanol-water(V∶V =45∶55).The f low rate was
0.8 mL·min-1 and the column temperature w as ambient.All the peaks were monito red at UV 323 nm.Re-
sults The standard curve was linear in the range of 10.5 -105 mg·L-1.The average recoveries was
99.58%, the RSD was less than 2.18%(n=6).Contents of siderin in Rhizoma Imperatae in dif ferent areas
w ere 8.00-52.8μg·g -1.Conclusions The method is simple , accurate w ith a good reproducibility.It is the
first time to control the quality of Rhizoma Imperatae by RP-HPLC method.
Key words:Rhizoma Imperatae;siderin;4 ,7-dimethoxy l-5-methy l-coumarin;RP-HPLC
88 　　　沈　阳　药　科　大　学　学　报 第 24卷