全 文 ：广东微量元素科学
2013 年 GUANGDONG WEILIANG YUANSU KEXUE 第 20 卷第 1 期
文章编号:1006 446X (2013)01 0011 07
青海省唐古特铁线莲质量控制标准的研究
刘玉萍1 苏 旭2，3 拉 本2，3 吴学明2
(1． 青海师范大学思想政治理论课教学科研部，青海 西宁 810008;
2． 青海师范大学生命与地理科学学院，青海 西宁 810008;
3． 青海师范大学青藏高原环境与资源教育部重点实验室，青海 西宁 810008)
摘 要:目的 对青海省唐古特铁线莲质量控制标准进行研究。方法 采用薄层色谱法对唐古特
铁线莲进行定性鉴定，展开剂为氯仿与丙酮(95∶ 5) ，显色剂为 10%硫酸甲醇;采用 HPLC(LC －
2010HT)法测定唐古特铁线莲中齐墩果酸的含量，色谱柱为 Phenomenex Luna C18(250 mm × 4. 6
mm，5 μm) ，流动相为 V(乙腈)+ V(0. 2%磷酸水溶液)= 35 + 65，流量为 1 mL /min，柱温为室温
(25 ℃) ，检测波长为 205 nm。结果 薄层色谱鉴定中，供试品色谱与对照品色谱相应的位置上，
显示出相同颜色的荧光斑点;齐墩果酸在 0. 023 3 ～ 0. 700 0 mg /mL范围内呈良好的线性关系，线
性回归方程为 y = 2 × 10 －6 x + 360 803，r2 = 0. 991 7，RSD为 1. 61%，并对青海省野生和栽培唐古
特铁线莲中齐墩果酸进行了定量分析，结果显示前者平均值为 0. 118 4%、RSD 为 2. 511 3%，后
者平均值为 0. 065 1%、RSD 为 2. 92%。结论 该法操作简单、快速、准确、灵敏、重现性好，
可有效控制青海省唐古特铁线莲的质量。
关键词:青海省;唐古特铁线莲;薄层色谱法;HPLC;齐墩果酸
中图分类号:O 657. 72 文献标识码:A
收稿日期:2012 12 13
基金项目:国家自然科学基金项目(31260052) ;教育部“春晖计划”合作科研项目(Z2010078) ;青海省自然科学基金项
目(2011 － Z － 745) ;青海师范大学科研创新计划项目;青海师范大学博士科研启动经费(202500205)资助
作者简介:刘玉萍(1980—) ，女，汉，青海民和人，讲师，在读博士，主要从事植物资源学研究。E-mail: lyp8527970
@ 126. com
通讯作者:苏旭(1980—) ，男，汉，山东鄄城人，副教授，博士，硕士生导师，主要从事青藏高原药用植物的开发及利
用。E-mail:xusu8527972@ 126. com
Studies on Quality Standard of Clematis tangutica in Qinghai Province
LIU Yuping1，SU Xu2，3，LA Ben2，3，WU Xueming2
(1． Department of Ideological and Political Theory Teaching and Research，Qinghai Normal University，
Xining 810008，China;2． School of Geography and Life Science，Qinghai Normal University，
Xining 810008，China;3． Key Laboratory of Education Ministry on Environments and Resources
in Tibetan Plateau，Qinghai Normal University，Xining 810008，China)
Abstract:Objective To study the quality standard of Clematis tangutica in Qinghai Province． Method
TLC was used to qualitatively identify the main ingredients using chloroform and acetone (95 ∶ 5)as a
development agent and 1% sulfuric acid methanol as a chromogenic agent． HPLC (LC － 2010HT)was
used to qualitatively determine the oleanolicacid contents in Clematis tangutica adopting Phenomenex
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DOI:10.16755/j.cnki.issn.1006-446x.2013.01.011
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2013 年 GUANGDONG WEILIANG YUANSU KEXUE 第 20 卷第 1 期
Luna C18 (250 mm × 4. 6 mm，5 μm)column as chromatographic column and acetonitrile + 0. 2%
H3PO4 water (35 + 65)as the mobile phase at a flow rate of 1 mL /min． The column temperature was 25
℃ and the detection wavelength was 205 nm． Result On the same plate of TLC，the reference and control
medicinal material were on the same position corresponding to particular color in the spectrum． Linear
rang of concentration was between 0. 023 3 ～ 0. 700 0 mg and the specification curve equation:y = 2 ×
10 －6 x + 360 803，r2 = 0. 991 7，The returns － ratio is 1. 61% ． Meanwhile，the oleanolicacid of wild and
cultural Clematis tangutica from Qinghai province was quantitatively analyzed． The result showed that the
content on oleanolicacid of wild samples was 0. 118 4% and the value of RSD was 2. 511 3%，and
cultural sample was 0. 065 1% and the value of RSD was 2. 92% ． Conclusion This method is simple，
rapid，accurate，sensitive and the good reproduction quality． It can be used for the quality control of
Clematis tangutica．
Key words:Qinghai province;Clematis tangutica (Maxim．) Korsh; thin layer chromatography;
HPLC;oleanolicacid
唐古特铁线莲(Clematis tangutica (Maxim．)Korsh)别名甘青铁线莲、叶芒茶保(藏名) ，为
毛莨科(Ranunculaceae)铁线莲属(Clematis L．)多年生草本植物，分布于青海、甘肃、新疆、陕
西、西藏及四川西部［1］。全草入药，可治风湿性关节炎［2］，同时能健胃、消食、治消化不良、
恶心，并有排脓、除疮、消痞块等作用［3］。
国内外有关铁线莲属植物药理和化学性质的研究已有较多报道［4 － 9］，且许多生物学者已从该
属植物中分离出多种不同类型的化合物，包括皂甙、黄酮类化合物、木质素、生物碱、挥发油
等［10］。现代药理研究表明，铁线莲属植物的皂甙类化合物具有抗肿瘤、抗炎、镇痛等药理活
性［11 － 13］;黄酮类化合物具有降血脂和胆固醇的作用［14］，同时还可以消除自由基、抗肿瘤、保
肝、泻下、保护心血管系统和抗病毒以及杀虫等光谱的生理活性［15］，而且国内一些学者对青藏
高原地区唐古特铁线莲中的黄酮类化合物、总皂甙和齐墩果酸含量也做了一定的研究报道［16 － 18］。
然而，迄今未见对该药材质量控制标准的研究探索，据此本文首次采用薄层色谱鉴定作为定性标
准、齐墩果酸的含量测定作为定量标准并利用高效液相色谱测定其含量，旨在为青藏高原地区药
用植物中有效成分的合理开发利用及质量控制提供一定的理论依据。
1 材料与方法
1. 1 材 料
唐古特铁线莲样品采于青海省西宁市西郊公园，经青海师范大学生命与地理科学学院吴学明
教授鉴定为毛茛科、铁线莲属植物唐古特铁线莲(Clematis tangutica (Maxim．)Korsh)。取其地上
部分干燥，粉碎，过 20 目筛，作为供试药材 1;采栽培唐古特铁线莲地上部分，阴干、粉碎，
作为供试药材 2。
1. 2 试 剂
齐墩果酸对照品(批号 11083l － 200802) ，购自中国药品生物制品检验所;所有有机溶剂均
为分析纯;乙腈为色谱纯;水为屈臣氏纯净水，并经 0. 45 μm水系滤膜过滤，自制 0. 2%磷酸水
溶液。
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1. 3 仪 器
Waters高效液相色谱仪(Waters 2695 泵 + Waters 1996 检测器 + EmPower 色谱工作站) ;色谱
柱 Phenomenex Luna C18(250 mm ×4. 6 mm，5 μm) ;KQ 3200 DE 型医用数控超声波清洗器，由
昆山市超声仪器有限公司生产;DK － S26 型电热恒温水浴锅，由上海精宏试验设备有限公司生
产;6202 小型高速粉碎机，由北京环亚天元机械技术有限公司生产;RE － 52CS 型旋转蒸发仪，
由上海亚荣生化仪器厂生产;SHB －Ⅳ双 B型循环水式多用真空泵，由郑州长城科工贸有限公司
生产;TC －15 恒温电热套 2 000 mL，由上海宁市华星仪器厂生产;DHG － 9053A 型电热恒温鼓
风干燥箱，由上海一恒科学仪器有限公司生产;Zf 20D 型暗箱式紫外分析仪，由上海顾村电光
仪器厂生产。
1. 4 薄层色谱鉴定
分别取 55 g供试药材 1、2，加 500 mL石油醚冷浸脱脂 24 h，过滤，加入 1 mol /L盐酸 400
mL，水浴加热回流水解 4 h，放冷后加入 400 mL氯仿继续回流 1 h，在分液漏斗中分离氯仿层，
残液用氯仿萃取 2 次，合并氯仿层，回收氯仿至 8 mL，作为供试品 1、2。在同一硅胶 G 薄层板
上，以 V(氯仿)+ V(丙酮)= 95 + 5 为展开剂展开，取出，晾干，喷以 10%硫酸甲醇溶液，115
℃烘干，显色 15 min，置于荧光下观察，以齐墩果酸作为对照品。
1. 5 定量分析
1. 5. 1 色谱条件 流动相为 V(乙腈)+ V(0. 2%磷酸水溶液)= 35 + 65;流量 1 mL /min;检测波
长 205 nm。
1. 5. 2 对照品溶液的制备 精密称取干燥至恒质量的齐墩果酸 0. 140 0 mg，加甲醇溶解并定容
至 10 mL，作为对照品溶液。
1. 5. 3 供试品溶液的制备 野生唐古特铁线莲供试品溶液(供试品溶液 1)的制备:取 15 g 野生
唐古特铁线莲药粉，加 100 mL石油醚冷浸脱脂 24 h，过滤，加入 1 mol /L盐酸 40 mL，水浴加热
回流水解 4 h，放冷后加入 40 mL氯仿继续回流 1 h，在分液漏斗中分离氯仿层，残液用氯仿萃取
2 次，合并氯仿层，回收至干，加甲醇溶解，过滤，甲醇溶液定容至 5 mL 容量瓶中，即得供试
品 1。
栽培唐古特铁线莲供试品溶液(供试品溶液 2)的制备:取 15 g 栽培唐古特铁线莲药粉按上
述方法制备，即得供试品 2。
1. 5. 4 方法学考察
(1)线性关系考察:分别精密吸取对照品溶液 0. 2、0. 4、0. 6、0. 8、1. 0 和 1. 2 mL 进样测
定，以齐墩果酸的峰面积积分值(A)为纵坐标，齐墩果酸对照品的质量浓度(mg /mL)为横坐标，
绘制标准曲线，得到回归方程。
(2)精密度试验:取 0. 014 mg /mL的齐墩果酸对照品溶液，按上述色谱条件进样 10 μL，共
5 次，测定峰面积，计算出峰面积的相对标准偏差。
(3)重现性试验:取野生唐古特铁线莲(供试品溶液 1)进行平行试验，按上述色谱条件测
定其含量，然后计算各齐墩果酸峰面积相对标准偏差(RSD) ，观察结果。
(4)稳定性试验:在室温条件下，精密吸取供试品溶液 1 在 1、3、6、9 和 12 h进样测定。
(5)加样回收率试验:精密称取供试溶液 1，5 份，准确加入齐墩果酸对照品适量，依法测
定，计算回收率。
1. 5. 5 测定方法 取对照品溶液，供试品溶液 1、2 各 10 μL，注入高效液相色谱仪，记录 65
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min的色谱图。
2 结果与讨论
2. 1 薄层色谱鉴定结果
薄层色谱(图 1 －图 2)显示，供试品色谱中，与对照品色谱上具有相同的 R f 值，显出相同颜
色的斑点;斑点自然光下显紫色，在荧光下显灰色，说明唐古特铁线莲地上部分含有齐敦果酸化
合物。此外，在试验中还发现最初阶段采用的多种提取方法，如石油醚、甲醇、氯仿、乙醇回流
等，粗制样品溶液经薄层检识均没有发现与齐敦果酸 R f 值一致的斑点，当再次取 20 g 用盐酸氯
仿精制，依然没有看到对照斑点，然而最后将 55 g 药粉用盐酸氯仿精制至 8 mL，结果看出了斑
点。因此，本研究认为唐古特铁线莲中齐墩果酸是多以苷的形式存在的。
2. 2 HPLC方法学考察结果
2. 2. 1 线性关系考察 由齐墩果酸线性关系考察结果可知，其线性回归方程为 y = 2 × 10 －6 x +
360 803，r2 = 0. 991 7，表明齐墩果酸在 0. 023 3 ～ 0. 700 0 mg·L －1范围内呈良好的线性关系(图
3)。
2. 2. 2 精密度试验 本研究精密度实验结果如表 1 所示。由表 1 可知，齐墩果酸峰面积的 RSD
为 0. 603 7%，表明仪器的精密度良好。
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图 3 齐墩果酸对照品的标准曲线
Fig 3 Calibration curves of Oleanolicacid reference
表 1 HPLC测定唐古特铁线莲的精密度和重现性实验(n = 5)
Table 1 The results of precision and repeatability test
样 号
精密度实验 重现性实验
吸收峰面积
/(mAU·s)
RSD
/%
吸收峰面积
/(mAU·s)
齐墩果酸含量
/(mg·mL －1)
平均值
/(mg·mL －1)
标准偏差
(s)
相对标准
偏差 /%
RSD
/%
1
2
3
4
5
10 688 707
10 707 701
10 738 681
10 600 069
10 596 614
0. 605 7
5 360 288
5 354 246
5 409 113
5 317 020
5 336 346
0. 036 2
0. 036 1
0. 036 6
0. 035 8
0. 036 0
0. 036 1 0. 000 3 0. 55 0. 80
2. 2. 3 重现性试验 由表 1 可知，齐墩果酸含量的 RSD为 0. 80%，表明重现性良好，实验数据
可靠。
2. 2. 4 稳定性试验 由表 2 计算得知，齐墩果酸含量的 RSD 为 0. 463%，说明样品溶液在 12 h
内稳定。
2. 2. 5 加样回收率试验 由表 3 可知，齐墩果酸的平均回收率为 98. 71%，RSD为 1. 61%。
2. 3 样品含量测定结果
取供试溶液，分别进样 10 μL，测定野生与栽培唐古特铁线莲中齐墩果酸的含量(n = 3) ，结
果如表 4 所示。
从表 4 可见，唐古特铁线莲中齐墩果酸的含量较低，干粉野生唐古特铁线莲中齐墩果酸平均
值为 0. 118 4%、RSD为 2. 511 3%，栽培唐古特铁线莲中平均值为 0. 065 1%、RSD 为 2. 92%。
产生上述含量的不同可能是由于野生和栽培条件的差异所致，这是由于在栽培驯化过程中，药用
植物唐古特铁线莲需要有一个长期适应新外界环境条件的过程。
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表 2 HPLC测定唐古特铁线莲中齐墩果酸的稳定性实验(n = 5)
Table 2 The Results of stability test
进样间隔时间 /h 吸收峰面积值 /(mAU·s) 标准偏差(s) 相对标准偏差 /% RSD /%
1 5 360 288
5 358 525
3 5 354 249
5 357 686
6 5 409 113
5 367 972
9 5 317 020
5 364 702
12 5 336 346
5 355 966
23 401. 378 0. 26 0. 436 7
表 3 HPLC测定唐古特铁线莲中齐墩果酸的加样回收率实验(n = 5)
Table 3 The results of recovery test
样 号
称样量中齐墩果酸的
质量 /g
加对照量
/mg
测得总量
/mg
回收率
/%
平均回收率
/%
RSD
/%
1 0. 036 2 0. 023 3 0. 059 0 98. 00
2 0. 036 2 0. 028 0 0. 064 1 99. 77
3 0. 036 2 0. 035 0 0. 071 1 99. 81 98. 71 1. 61
4 0. 036 2 0. 046 7 0. 081 1 96. 22
5 0. 036 2 0. 070 0 0. 106 0 99. 76
表 4 野生与栽培唐古特铁线莲中齐墩果酸含量的比较
Table 4 The comparison on oleanolicacid contents of wild and cultural Clematis tangutica
样 号
野生唐古特铁线莲 栽培唐古特铁线莲
含量 /mg 平均值 /% RSD /% 含量 /mg 平均值 /% RSD /%
1 0. 034 7 0. 019 7
2 0. 036 4 0. 118 4 2. 511 3 0. 018 9 0. 065 1 2. 92
3 0. 035 1 0. 020 0
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有协同作用的元素
Cu  Fe、Mn、Mo、F、As、Co、I、V、Si、S
Fe  Co、Cu、Cr、Ni、Mn、P、Zn、Mo、V
Mo  Ca、Mg、Cu、Zn、S、P、Fe、I
Ca  Sr、Zn、Mn、Fe、F、Mg、Si
Zn  Na、P、Ca、Fe、Co、Mo、Se
Mn  Fe、Co、Cu、Na、Ca、Mg
F  Fe、Al、Ca、Mg、Cu、B
V  Li、Zn、Mg、Mn、Co、Cu
I  Cl、Se、Co、Mo、Cu
P  Zn、Mo、K、Fe、Ca
Co  Cu、Zn、Fe、I、Mn
As  Mn、Fe、Co、Cu
Mg  Zn、Mn、Na、Ca
S  Cu、Se、Mo
Se  I、S、Mo
Mn  Pb、Zn
Si  Cu、Ge
B  F
Sr  Ca
Cr  Fe
V  Fe
Ge  Si
引自《元素医学防病治病实用手册》
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