全 文 ：［饮片炮制］
HPLC法测定不同产地马先蒿属植物中的毛蕊花苷
曹馨元1，2， 曹文龙3， 陶 锐1，2， 栾 飞2， 李茂星1，2*
(1． 兰州大学药学院，甘肃 兰州 730000;2． 兰州军区兰州总医院药剂科，全军高原环境损伤防治重点实
验室，甘肃 兰州 730050;3． 天祝县藏医药开发研究所，甘肃 武威 733299)
收稿日期:2015-03-20
基金项目:国家自然科学基金面上项目 (81374019) ;甘肃省中医药管理局课题 (GZK-2015-59) ;全军医药卫生科研项目 (CLZ15JA05)
作者简介:曹馨元，硕士，从事天然药物化学、中药新药研究与开发。Tel: (0931)8994676，E-mail:caoxy14@ lzu． edu． cn
* 通信作者:李茂星 (1973—) ，男，博士，副主任药师，从事中药新药研究与开发。Tel: (0931)8994676，E-mail: limaox2005@
aliyun． com
摘要:目的 建立 HPLC法测定不同产地 (甘肃、青海、四川)7 种马先蒿属 (Pedicularis L．)植物中毛蕊花苷的含
有量。方法 马先蒿属植物 75%甲醇提取液的分析采用 Waters C18色谱柱 (4. 6 mm × 150 mm，5 μm) ;流动相甲醇-
0. 27%冰醋酸水溶液 (35 ∶ 65) ;检测波长 330 nm;体积流量 1 mL /min。结果 13 个样本中毛蕊花苷含有量的差异较
大。其中，甘肃省武威市天堂乡采集到的甘肃马先蒿 (茎、根)、中国马先蒿、藓生马先蒿、俯垂马先蒿中毛蕊花苷
的含有量分别为 3. 62%、0. 27%、6. 49%、2. 17%、3. 47%，天祝县采集到的中国马先蒿、藓生马先蒿中分别为
1. 81%、2. 26%;青海省采集到的甘肃马先蒿、藓生马先蒿、白花甘肃马先蒿中分别为 3. 28%、2. 01%、2. 45%;四
川省诺尔盖草原采集到的轮叶马先蒿、碎米蕨叶马先蒿、藓生马先蒿中分别为 0. 46%、1. 22%、1. 37%，RSD 值均
小于 2%。结论 毛蕊花苷广泛存在于马先蒿属植物中，其中甘肃马先蒿地上部分中毛蕊花苷的含有量高于地下
部分。
关键词:马先蒿属;毛蕊花苷;产地;HPLC
中图分类号:R284. 1 文献标志码:A 文章编号:1001-1528(2016)01-0126-05
doi:10. 3969 / j． issn． 1001-1528. 2016. 01. 028
Determination of verbascoside in plants of Pedicularis L． from different growing
areas by HPLC
CAO Xin-yuan1，2， CAO Wen-long3， TAO Rui1，2， LUAN Fei2， LI Mao-xing1，2*
(1． School of Pharmacy，Lanzhou University，Lanzhou 730000，China;2． Department of Pharmacy，Lanzhou General Hospital of PLA;Key Laborato-
ry of Prevention and Cure for Plateau Environment Damage of PLA，Lanzhou 730050，China;3． Tianzhu County Development Research Institute for Tibet-
an Medicine，Wuwei 733299，China)
ABSTRACT:AIM To establish an HPLC method for determining verbascoside in seven kinds of plants of Pedic-
ularis L． from different growing areas (Gansu，Qinghai and Sichuan)． METHODS The analyses of plants of Pe-
dicularis L． 75% methanolic extracts were performed on Waters C18 column (4. 6 mm ×150 mm，5 μm) ，mobile
phase was MeOH-0. 27% glacial acetic acid (35 ∶ 65) ，detection wavelength was set at 330 nm，flow rate was
1 mL /min． RESULTS There were obvious differences in verbascoside content in thirteen samples． Among them，
those in P． kansuensis (stems and roots) ，P． chinensis，P． muscicola and P． cernua in Tiantang (Wuwei，Gan-
su)were 3. 62%，0. 27%，6. 49%，2. 17% and 3. 47%，those in P． chinensis and P． muscicola in Tianzhu were
1. 81% and 2. 26%，those in P． kansuensis，P． muscicola and P． kansuensis Maxim subsp． kansuensis f． albiflora
Li (Qinghai)were 3. 28%，2. 01% and 2. 45%，and those in P． verticillata，P． cheilanthifolia and P． muscicola
in Nouergai prairie (Sichuan)were 0. 46%，1. 22% and 1. 37%，respectively． All the RSDs were less than 2% ．
CONCLUSION Verbascoside is widely distributed in plants of genus Pedicularis，whose content in the above-
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中 成 药
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ground part is higher than that in the under-ground part of P． Kansuensis．
KEY WORDS:Pedicularis L．;verbascoside;growing areas;HPLC
马先蒿是玄参科马先蒿属 (Pedicularis L．)植
物，关于其化学成分的研究表明［1-4］，该植物中含
有环烯醚萜苷［5］、苯乙醇苷［6-8］、生物碱等多种化
合物，具有滋阴补肾、补中益气、健脾和胃、清热
解毒、利尿、保肝等作用。其中，毛蕊花苷 (ver-
bascoside)属于苯乙醇苷类化合物，主要存在于木
兰科、菊科、蔷薇科、唇形科、玄参科等多种植物
中，因其抗炎、抗菌、抗肿瘤、保肝、抗氧化、抗
衰老、免疫调节、抗病毒、增强记忆等多种药理作
用［9］，受到广大学者的关注。作为马先蒿属植物
的主要活性成分，建立其有效的定性定量分析方法
是很有必要的。马先蒿属植物资源丰富，来源相对
廉价，故合理的开发利用不仅有利于相关医药产品
的研发，也会在一定程度上促进当地经济的发展。
有关毛蕊花苷含有量的测定方法已有较多文献报
道［10-13］，本实验首次建立了 HPLC法同时测定 3 种
产地 7 种马先蒿属植物中该成分的含有量，该方法
简单、快速、经济，能为其开发利用及品质评价提
供参考，也可为其单体生物活性的进一步研究奠定
基础。
1 仪器与材料
1. 1 仪器 Waters 高效液相色谱仪，包括 Waters
1525 四元梯度泵、Waters-2998 二极管阵列检测器、
Waters-2707 自动进样器、Waters-TCM 柱温箱 (美
国 Waters 公司) ;HP-8453 紫外可见分光光度计
(美国惠普公司) ;BP210s 电子分析天平 (德国
Sartorius公司) ;SK7200H 超声波清洗器 (上海科
导超声仪器有限公司)。
1. 2 材料 甲醇为色谱纯;水为注射用水;其他
试剂均为分析纯。毛蕊花苷对照品 (实验室自制，
MS、NMR 确定其结构，HPLC 测定其纯度 ＞
97. 5%)。7 种马先蒿药材于 2014 年 8 月采自甘
肃、青海及四川，分别为甘肃马先蒿 Pedicularis
kansuensis、中国马先蒿 P． chinensis、藓生马先蒿
P． Muscicola、碎米蕨叶马先蒿 P． cheilanthifolia、
俯垂马先蒿 P． cernua、轮叶马先蒿 P． verticillata、
白花甘肃马先蒿 P． kansuensis Maxim subsp． kan-
suensis f． albiflora Li。
2 方法与结果
2. 1 色谱条件 Waters C18色谱柱 (4. 6 mm ×
150 mm，5 μm) ;流动相为甲醇-0. 27%冰醋酸水
溶液 (35 ∶ 65) ，梯度洗脱;体积流量 1 mL /min;
柱温 25 ℃;进样量 10 μL。
2. 2 溶液的制备
2. 2. 1 对照品溶液的制备 精密称取毛蕊花苷对
照品 5. 00 mg，置于 10 mL 量瓶中，10%甲醇溶
解，定容至刻度，得标准品母液。再取母液适
量，10% 甲醇稀释至质量浓度为 52 μg /mL，
即得。
2. 2. 2 供试品溶液的制备 分别取 7 种马先蒿药
材适量，粉碎 (过四号筛) ，精密称取 2 g，置于
具塞锥形瓶中，精密加入 75%甲醇 50 mL，称定质
量，60 ℃回流提取 30 min，冷却，再称定质量，
75%甲醇补足减失质量，摇匀，滤过，取续滤液
1 mL，稀释到 10 mL 量瓶中，即得。测定前，以
0. 45 μm微孔滤膜滤过。
2. 3 测定方法 精密量取供试品和对照品溶液
10 μL，注入 HPLC 色谱仪，记录色谱图，结果见
图 1。
2. 4 线性关系考察 精密吸取对照品溶液 100、
300、500、900、1 100、1 300 μL，分别定容至
5 mL，进样 10 μL。以毛蕊花苷对照品溶液质量浓
度 (μg /mL)为横坐标 (X) ，峰面积为纵坐标
(Y)绘制标准曲线，得回归方程 Y = 7 075. 8X +
1 396. 9，r = 0. 999 8。结果表明，毛蕊花苷在
1. 3 ～ 169 μg /mL范围内与峰面积线性关系良好。
2. 5 方法学考察
2. 5. 1 精密度试验 取毛蕊花苷对照品溶液适量，
在“2. 1”项色谱条件下连续进样 6 次。结果，
RSD为 0. 68%，表明仪器精密度良好。
2. 5. 2 稳定性试验 取同一供试品溶液，室温下
分别于 0、2、4、6、12、24 h 进行测定。结果显
示，各样品峰面积的 RSD 分别为 2. 0%、0. 89%、
1. 3%、0. 72%、1. 8%、2. 1%、0. 89%、1. 9%、
1. 5%、0. 93%、0. 40%、0. 27%、1. 4%，表明供
试品溶液在 24 h内稳定。
2. 5. 3 重复性试验 取各药材粉末适量，按
“2. 2. 2”项下方法平行制备 6 份供试品溶液，在
“2. 1”项色谱条件下测定。结果，各样品中毛蕊
花苷的 RSD 分别为 1. 91%、3. 35%、1. 15%、
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1. 85%、 1. 03%、 1. 76%、 3. 61%、 2. 22%、
2. 13%、1. 17%、2. 65%、1. 72%、0. 59%，表明
该方法重复性良好。
2. 5. 4 加样回收率试验 精密称取含有量已知的
甘肃马先蒿 6 份，每份 0. 75 g，加入 16. 9 mg /mL
对照品溶液 500 μL，按“2. 2. 2”项下方法制备样
品溶液，在“2. 1”项色谱条件下平行测定，记录
色谱图，并计算加样回收率，结果见表 1。
1． 毛蕊花苷
1． verbascoside
图 1 HPLC色谱图
Fig. 1 HPLC chromatograms
2. 5. 5 含有量测定 精密称取 7 种药材粉末 3 份，
每份 2 g，按“2. 2. 2”项下方法制备供试品溶液，
在“2. 1”项色谱条件下分析，结果见表 2。
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表 1 加样回收试验结果
Tab. 1 Results of recovery tests (n =6)
成分
称样量 /
g
原有量 /
mg
加入量 /
mg
测得量 /
mg
回收率 /
%
平均回收
率 /%
RSD /
%
毛蕊花苷
0. 75 27. 30 8. 45 35. 82* 100. 8
0. 74 26. 85 8. 45 34. 85 94. 7
0. 74 26. 86 8. 45 35. 12 97. 7
0. 76 27. 35 8. 45 35. 57 97. 3
0. 74 26. 82 8. 45 35. 23 99. 5
0. 76 27. 46 8. 45 35. 92 100. 1
98. 36 2. 30
* :样品经制备后，毛蕊花苷的最终浓度约为 71. 64 μg /mL
(35. 82 mg /50 mL，稀释 10 倍) ，在标准曲线项下的测定范围在
1. 3 ～ 169. 0 μg /mL之间
表 2 马先蒿样品中毛蕊花苷含有量 (n =6)
Tab. 2 Content of verbascoside in Pedicularis L． samples
(n =6)
药材名称 采集地 含有量 /% RSD /%
甘肃马先蒿(茎) 甘肃武威 3． 62 1． 06
甘肃马先蒿(根) 甘肃武威 0． 27 1． 70
中国马先蒿 甘肃武威 6． 49 1． 93
藓生马先蒿 甘肃武威 2． 17 0． 92
俯垂马先蒿 甘肃武威 3． 47 1． 35
中国马先蒿 甘肃武威 1． 81 0． 31
藓生马先蒿 甘肃武威 2． 26 0． 55
甘肃马先蒿 青海 3． 28 1． 52
藓生马先蒿 青海 2． 01 1． 19
白花甘肃马先蒿 青海 2． 45 1． 09
轮叶马先蒿 四川诺尔盖 0． 46 1． 89
碎米蕨叶马先蒿 四川诺尔盖 1． 22 1． 89
藓生马先蒿 四川诺尔盖 1． 37 1． 47
3 讨论
3. 1 流动相的选择 毛蕊花苷是苯乙醇苷类化合
物，具有多个酚羟基，在酸性条件下稳定性较好。
本实验考察了不同比例的乙腈-水、甲醇-水系统作
为流动相的效果，最终确定色谱条件为甲醇-
0. 27%冰醋酸水溶液 = 35 ∶ 65。
3. 2 检测波长的选择 毛蕊花苷化学结构复杂，
具有多个共轭双键，经紫外分光光度计全波长扫
描，测得其最大吸收波长为 330 nm，并以此作为
检测波长。
3. 3 样品制备 在供试品制备方法上，本实验考
察了 75%甲醇及水对毛蕊花苷提取效率的影响，
发现以前者为提取溶剂时效率最高。在此基础上，
又比较了热回流和超声对提取结果的影响，发现前
者提取效率高。因此，确定以 75%甲醇热回流提
取 30 min 为供试品制备方法，既简便可靠，又不
会造成有效成分的破坏。
3. 4 资源利用 本实验采用 HPLC 法测定了 7 种
不同马先蒿植物中毛蕊花苷的含有量，并以其为指
标，考察了不同产地及品种马先蒿的品质差异。结
果显示，7 种马先蒿植物茎叶中均含有毛蕊花苷，
但含有量有差异，甘肃马先蒿地上部分中毛蕊花苷
的含有量高于地下部分，这为进一步保护资源、开
发扩大用药部位及资源的可持续利用提供了科学依
据。而且，不同地区海拔、气候等原因均可造成药
材中目标成分含有量的差异，本实验比较了 3 个省
份马先蒿中毛蕊花苷的含有量，可为药材品质评价
及该成分生物活性的深入研究奠定基础。
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