全 文 ：高效液相色谱法测定扭盔马先蒿中毛蕊花苷的含量
马福军　(青海师范大学民族师范学院化学系 ,青海西宁 810008)
摘要　[目的 ] 建立 HPLC法测定扭盔马先蒿中毛蕊花苷含量的方法。 [方法] 采用HPLC法KromasilC18柱(250mm×4.6mm, 5μm),
乙腈-1%冰醋酸溶液(1∶4)为流动相 ,在 330nm波长下测定样品中毛蕊花苷的含量。 [结果 ] 该方法专属性强 ,平均加样回收率为
96.87%, RSD值为 2.18%(n=5)。 [结论] 该方法方便 ,分离效果好 ,适用于扭盔马先蒿的鉴别和质量的控制。
关键词　毛蕊花苷;扭盔马先蒿;高效液相色谱法
中图分类号　S567.21+9　　文献标识码　A　　文章编号　0517-6611(2009)08-03590-01
DeterminationofVerbascosideinPedicularisdavidiibyHPLC
MAFu-jun　(DepartmentofChemistry, TeachersColegeforNationalities, QinghaiNormalUniversity, Xining, Qinghai810008)
Abstract　[ Objective] ToestablishananalyticalmethodforthedeterminationofverbascosideinPedicularisdavidibyHPLC.[ Method] By
usingHPLC, theconditionsofchromatography:KromasilC18(250 mm× 4.6mm, 5μm)wasusedwithamobilephaseofCH3CN-1%CH3COOH(1∶4), todetermineverbascosidecontentinthesamplewithwavelength330nm.[ Result] Withhighspecificity, theaveragespi-
kingrecoveryratewas96.87%, RSDvaluewas2.18% (n=5).[ Conclusion] Thismethodwasconvenientandhadanidealresultinthe
separation, whichcouldbeadoptedintheidentificationandqualitycontrolofPedicularisdavidi.
Keywords　Verbascoside;Pedicularisdavidii;HPLC
作者简介　马福军 (1963-),男 ,青海贵德人 ,副教授 ,从事分析化学 、
化学教学论的教学与研究工作。
收稿日期　 2008-12-18
　　玄参科植物马先蒿 ,属多年生草本植物 ,主产北半球 ,多
数分布于海拔 1 700 ～ 2 900m的寒温带及高山上 ,需有较厚
的土壤以及比较充足的阳光才能生长。我国青藏高原是该
属的起源中心和演化中心 ,大约有 340多种 ,其广泛分布于
我国西北和西南地区 ,药用种类繁多 ,民间应用历史悠久 ,疗
效明显。现代本草收载有该属植物 50余种 ,其中以根 、茎入
药者 20余种 ,多有滋阴补肾 、补中益气 、健脾和胃等功能;以
花或全草入药者近 30种 ,多具有清热解毒 、利尿 、保肝等作
用 [ 1-2] 。扭盔马先蒿有清热解毒 、治疗胃溃疡 、保肝 、抗氧化
衰老等药理作用 [ 3] 。目前已经从该属植物中分离出生物碱 、
环烯醚萜苷 、苯丙素苷 ,黄酮等多种生物活性成分 ,其中苯丙
素苷具有抗菌 、抗病毒 、抗肿瘤 、清除自由基 、延缓骨骼肌疲
劳 、DNA碱基修复等多种显著的生理作用 ,引起人们广泛的
兴趣和关注 [ 4] 。作为主要的有效成分 ,有必要建立快速 、准
确 、可靠的分析方法对其进行定性定量分析 ,使之成为有用
的中药质量控制指标。笔者首次建立了扭盔马先篙中苯丙
素苷化合物的 HPLC的测定法 ,为扭盔马先蒿的开发利用和
质量控制提供一定的依据 。
1　材料与方法
1.1　材料　扭盔马先蒿于 2007年 9月采自青海省共和县 ,
并经青海师范大学民师院化学系生物教研室李加太副教授
鉴定。毛蕊花苷对照品由中国药品生物制品检定所提供 。
经检验均符合 《中国药典 》2005年版该品种项下之规定。
1.2　仪器　Waters系列高效液相色谱仪 ,包括四元梯度泵 ,二
极管阵列检测器(2996型),色谱数据工作站(Milennium32),
METTLERAE245型电子分析天平。
1.3　试剂　乙腈(色谱纯 ,江苏淮安市恒安工贸有限公司);甲
醇 ,冰醋酸(分析纯 ,天津化学试剂有限公司);水为重蒸馏水。
1.4　色谱条件　KromasilC18(250 mm×4.6 mm, 5μm,中国
科学院大连化学物理研究所);流动相为乙腈 -1%冰醋酸溶
液(20∶80);流速为 1.0ml/min;检测波长为 330 nm;进样量
为 10μl。
1.5　对照品溶液的制备　称取毛蕊花苷对照品 2.0 mg,置
于 2 ml容量瓶中 ,加乙腈 -水(1∶1)溶解并稀释至刻度 ,摇
匀 ,得对照品贮备溶液。
1.6　样品溶液的制备　取扭盔马先蒿 0.5 g,精密称定 ,置
于 50 ml具塞锥形瓶中 ,用甲醇 100 ml超声提取 2次 ,每次
30 min,合并 2次提取液 ,过滤 ,减压回收甲醇 ,残渣加
乙腈 -水(1∶1)溶解并定容至 25 ml。过 0.45 μm微孔有机
系滤膜 ,精密吸取 10μl进样 。
2　结果与分析
2.1　标准曲线与线性范围　从毛蕊花苷对照品贮备溶液中
取 1 ml用乙腈 -水(1∶1)依次稀释成一系列浓度梯度的溶
液 ,每个浓度的溶液依上述色谱条件测定 3次 ,以进样量为
横坐标(X),峰面积为纵坐标(Y),绘制标准曲线 ,得回归方
程 Y=1.416 7 ×106X+2.949 3×104 , R=0.999 9。结果表
明 , VER(毛蕊花苷)在 0.006 04 ～ 10 μg范围内线性关系良
好 ,最低检出限为 1.7 ng。
2.2　精密度试验　精密吸取一定浓度的对照品溶液 ,连续 5
次进样测定 ,得毛蕊花苷峰面积的 RSD值为 2.44%,说明该
方法具有良好的重现性和稳定性。
2.3　重现性试验　取干燥的毛盔马先蒿 0.5 g,精密称定共
5份 ,按上述样品测定项下的方法 ,进样测定 ,计算得毛蕊花
苷的平均含量为 1.98%, RSD值为 2.62%(n=5)。
2.4　加样回收率试验　精密称取已测知含量的扭盔马先蒿
0.5g样品 5份 ,分别加入 0.565 mg毛蕊花苷对照品 (取
0.565 mg,置 10ml量瓶中 ,用 5%甲醇溶液溶解并稀释至刻
度)2 ml,制备供试品溶液 5份 ,进样测定 ,结果毛蕊花苷的平
均回收率为 96.87%,其 RSD值为 2.18%(n=5)。
2.5　样品测定　分别精密吸取对照品混合溶液与提取物样
品溶液各 10 μl,注入液相色谱仪 ,按上述色谱条件测定 ,计
算出样品中毛蕊花苷的平均含量为 1.43%。
3　讨论
试验首次建立了用高效液相色谱法测定扭盔马先蒿中
(下转第 3692页)
责任编辑　庆瑢　责任校对　屈满义安徽农业科学 , JournalofAnhuiAgri.Sci.2009, 37(8):3590, 3692
植物 ,泥石堆群落中没有地上芽植物 ,乱石堆群落生活型谱
与泥石堆群落相似。
表 2　各立地类型植物群落生活型谱
Table2　Thelifeformspectrumofplantcommunityinvarioussites
%
立地类型Sitetypes
矮高位芽植物Nanophanerophytes
地上芽植物Chamaephytes
地面芽植物Hemicryptophytes
地下芽植物Geophytes
1年生植物Therophytes乱石堆(LS) 9.70 0.00 54.18 7.26 28.86
泥石堆(NS) 12.45 0.00 40.28 8.82 38.45
采石作业区(CS) 0.00 0.00 13.27 0.00 86.73
排土堆(PT) 13.64 0.00 50.12 0.00 36.24
道路边坡(DL) 0.00 0.00 40.29 0.00 59.71
山顶裸岩SL 15.29 9.54 30.18 15.43 29.56
退耕撂荒地 LH 13.45 3.02 45.28 10.00 28.25
　注:该研究区域的高位芽植物仅有 2m以下的灌木及小灌木。
　Note:Phaenerophytesinthestudyareaonlyareshrubsandundershrubsbe-
low2m.
3　讨论
借助于模糊数学 ,运用模糊聚类分析方法是一种理想的
立地类型及植物群落间相似性分析的方法 ,可得到比较客
观 、合理的分类结果 [ 13-14] 。在该研究中 ,模糊聚类法较好地
将 22个样地分为 7种立地类型 ,人工加速废弃采石场植被恢
复时可以考虑按照此聚类结果对各个类型分别设计工程改
造措施和植物配置模式 。另外 ,从聚类图可知 ,虽然各立地
类型生境条件存在差异 ,群落发育的起点不同 ,但是随着植
被恢复的推进 ,各立地类型中出现了一部分共有种。由此可
知 ,群落发育初期生境相似是影响群落相似性的重要原因 ,
但随着演替的推进 ,差异较大的群落生境条件得以改善 ,共
有种数增多 ,群落的相似性也会增加。
植物群落生活型结构反映了该区域的生态环境相当干
旱 ,生境条件较为恶劣 ,物种多样性较低 ,结合各立地类型的
土层厚度 、土层中泥石比例 、形成时间等因素分析其植物群
落多样性的差异(表 1)。结果表明 ,土壤是采石废弃地植被
自然恢复的主要限制因子 ,土层厚 ,保水保温保肥能力强 ,有
利于植物群落物种多样性的增加 ,促进植物群落结构由简单
到复杂的完善 ,从而提高其生态功能 。可见 ,生境的稳定性
是提高群落物种多样性的必要条件之一。乱石堆和道路边
坡的物种丰富度较高 ,植物群落中偶见种的数目较多 ,但或
者由于地表土质松 、石块松动或者受人为的干扰频繁 ,使植
物群落物种多样性偏低。因此 ,人工加速废弃采石场植被恢
复的工程可以考虑在采石作业区铺一定厚度的客土 ,在乱石
堆和道路边坡进行清除表面石块和土壤压实处理 ,加速其演
替进程 ,降低工程成本。
对该区域各立地类型的植物群落的生活型结构分析可
知 ,相似立地条件 ,恢复时间越长 ,对空间和资源的利用越充
分 ,物种间的关系更和谐 ,反映了植被与土壤之间的反馈关
系。因此 ,在植被恢复过程中应充分利用乡土物种 ,遵循自
然演替的规律 ,加速其植被恢复的进程 。另外 ,人工恢复废
弃采石场植被时要基于采石场支离破碎的地形特点 ,选择背
风的阴坡和沟谷生境作为植被恢复的起始平台 ,然后利用植
被恢复的自然恢复力向外围拓展 ,不断扩大植被的有效恢复
范围。对于不稳定的生境 ,应采取有力措施排除生境的不稳
定因素。人工辅助植被恢复时还应选择适应性较强的植物
作为植被恢复的先锋种。如在土壤条件较好的地方可以试
栽一些如山槐 [ Albiziakalkora(Roxb.)Prain] 、臭椿(Ailanthus
altisima)、黑松(Pinusthunbergi)等阳性先锋树种 ,人工加速
其演替进程 。在土壤条件极差的地方可采取客土改良并运
用直播法和营养钵栽植法增加植物种类 ,人工加速植被恢复
进程。
参考文献
[ 1] 陈波 ,包志毅.国外采石场的生态和景观恢复 [ J] .水土保持学报, 2003,
17(5):71-73.
[ 2] 陈芳清 ,卢斌 ,王祥荣.村坪磷矿废弃地植物群落的形成与演替 [ J] .生
态学报, 2001, 21(8):1347-1354.[ 3] CRONKQCB, FULLERJL.Plantinvaders:threattonaturalecosystem
[M].London:EarthscanPublications, 2001.
[ 4] 束文圣,蓝崇玉,黄铭洪,等.采石场废弃地的早期植被与土壤种子库
[ J] .生态学报 , 2003(17):1305-1313.
[ 5] 马文希.厦门裸露山体植物治理设计方案 [ J].亚热带水土保持, 2005,
17(2):50-52.
[ 6] 张荣盛.厦门市岛外裸露山体的植物治理技术探讨[ J].中南林业调查
规划 , 2004, 23(2):17-22.
[ 7] 彭少麟.植物群落演替研究Ⅱ.动态研究方法 [ J].生态科学 , 1994(2):
117-119.[ 8] 肖位枢.模糊数学基础及其应用 [ M].北京:航空工业出版社, 1992.
[ 9] 许再富 ,朱华 ,王应祥 ,等.澜沧江下游/湄公河上游片断热带雨林物种
多样性动态[ J].植物生态学报, 2004, 28(5):585-593.
[ 10] 项华均 ,安树青 ,王中生 ,等.热带森林植物多样性及其维持机制[ J].
生物多样性 , 2004, 12(2):290-300.
[ 11] 蔡建琼 ,于惠芳 ,朱志洪 ,等.SPSS统计分析实精选[ M].北京:清华大
学出版社, 2006.
[ 12] 张明如 ,翟明普 ,王学勇.太行山低山丘陵区植被恢复构建的生态对策
与途径 [ J].中国水土保持科学 , 2006, 4(2):75-81.
[ 13] 胥晓,苏智先,黎云祥.嘉陵江流域南充金城山地森林群落的模糊数学分析[ J].四川师范学院学报, 1999, 20(2):182-189.
[ 14] 许彬,张金 ,杨洪晓 ,等.京西百花山植物群落数量分析[ J].北京师范
大学学报:自然科学版, 2006, 42(1):90-94.
[ 15] 陈璟.废弃采石场立地类型及植物群落间的相似性分析 [ J].安徽农业
科学, 2009, 37(3):1251 -1252.
[ 16] 杨朝东 ,张霞,向家云.三峡库区消落带植物群落及分布特点的调查
[ J].安徽农业科学, 2008, 36(31):13795-13796 , 13866.
[ 17] 高远,朱秀林,邱振鲁.山东茶山植物群落结构及物种多样性[ J].安徽
农业科学, 2007, 35(16):4841-4843.
(上接第 3590页)
毛蕊花苷含量的方法 ,采用所建立的波长和洗脱体系 , 10 min
内即实现了该指标成分的含量测定。测定结果表明 ,该方法
简单易行 、准确度高 、重现性好 ,适宜作为扭盔马先蒿的质量
控制方法。
参考文献
[ 1] 中国科学院中国植物志编辑委员会.中国植物志 [ M].北京:科学出版
社, 1963.
[ 2] 青海省生物研究所.青藏高原药物图鉴 [ M] .西宁:青海人民出版社,
1972.
[ 3] 江苏新医学院.中药大辞典[ M] .上海:上海人民出版社 , 1997.[ 4] 吴臻,李发荣 ,杨建雄.马先蒿属药用植物研究进展 [ J] .时珍国医国
药, 2002(5):305-307.
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