全 文 ：平邑甜茶染色体制片技术的风油精法
周攀 , 董文轩＊ , 商月惠　(沈阳农业大学园艺学院 ,辽宁沈阳 110161)
摘要　采用风油精作为预处理药剂 ,用常规压片技术对平邑甜茶进行染色体标本制备。结果表明 ,用风油精溶液预处理的染色体 ,分散
度高 ,染色体浓缩长度适中 ,染色体不易断裂、粘连。
关键词　平邑甜茶;染色体制片;预处理 ,风油精
中图分类号　Q343.2　　文献标识码　A　　文章编号　0517-6611(2007)06-01611-01
Study on the Chromosome Technology of Pretreatment with Fengyoujing in Pingyitiancha Tea
ZHOU Pan et al　(College of Horticulture, Shenyang Agricultural University, Shenyang, Liaoning 110161)
Abstract　Fengyoujing was used as the pretreatment medicament in the Pingyitiancha tea chromosome samplemaking.The results indicated that in Fengy-
oujing pretreating the chromosomes , the separation degree of the chromosomes was evident , the condensed length of the chromosome was moderate and it
was not easy for the chromosomes to rupture and conglutinate.
Key words　Pingyitiancha;Chromosome technology;Pretreatment;Fengyoujing
　　平邑甜茶[ M.hupehensis(Pamp.)Rehd.var.pingyiensis
Jiang]为苹果属湖北海棠种的一个变种 ,是典型的具有兼性
无融合生殖性状的植物。林盛华等[ 1]报道平邑甜茶为 3倍
体植物 ,染色体数为 2n=3X=51。由于平邑甜茶染色体小且数
量多 ,在染色体制片上难度较大。制备染色体标本的关键在于
预处理 ,笔者选用风油精作为预处理药剂 ,采用常规压片
法[ 2-3]对平邑甜茶进行染色体制片 ,取得了良好的效果。
1　材料与方法
平邑甜茶取自沈阳农业大学苹果育种基地。8:00取平
邑甜茶幼芽嫩叶 ,夏季高温时应把采样时间提前。取生长
点 ,放入 0.5 μl/ml的风油精水溶液中 ,室温处理 1 ～ 1.5 h;甲
醇-冰醋酸溶液(甲醇∶冰醋酸=3∶1 ,V/V)固定 2～ 24 h(固
定后置于 70%乙醇中 4 ℃保存备用);5mol/L盐酸解离 6～ 8
min;蒸馏水冲洗 5 min;取材料 1～ 2 mm ,放于干净载玻片上 ,
滴 2 ～ 3滴改良卡宝品红染色液染色 10 min;压片 、镜检 、
照相。
2　结果与分析
利用风油精作为预处理药剂得到的片子可观察到较多
的细胞分裂相 ,染色体分散度适中 ,染色体不易断裂且易分
图1　平邑甜茶染色体(2n=3X=51)
基金项目　国家自然科学基金资助项目(30370985)。
作者简介　周攀(1979-),男 ,辽宁锦州人,硕士研究生 ,研究方向:果树
种质资源。 ＊通讯作者。
收稿日期　2006-11-13
散 ,制得的片子洁净无杂质 ,便于染色体的计数和核型分析
(图 1)。
3　讨论
以风油精作为预处理药剂 ,庄南生等[ 4]在水稻上有过成
功的报道。程晓蕾等[ 5-6]利用风油精为前处理药剂对烟草
染色体标本制备方法进行了研究与比较 ,并进行了核型分
析 ,取得了较好的效果 。袁庆军等[ 7]用风油精作为前处理药
剂对四川莴苣属及近缘属 10种植物进行了核型研究 。
预处理的作用在于阻止纺锤体的形成 ,同时又不妨碍分
裂前期活动的正常进行。由于没有纺锤体的牵引 ,使细胞分
裂终止于中期阶段 ,这样便可以获得比较多的中期分裂相 。
如出现染色体粘连或聚集成团而不能分散的情况 ,可能是预
处理时间太长 ,预处理液浓度太高 ,温度太高 ,固定的时间太
短等原因造成的 。染色体制片的预处理药剂有很多 ,如对二
氯苯 、秋水仙素 、8-羟基喹啉等。不同的样品应选择合适的
预处理药剂和浓度 ,不同药剂处理的时间也不同 ,此外 ,温度
也是一个考虑的因素。关于预处理持续时间的长短 ,取决于
染色体的大小 ,材料的大小 ,植物耐药性的差异 ,处理液的浓
度 ,温度等。风油精作为预处理药剂有其独特的优点:药液
的配制 、使用方便 ,对人体无害 ,药剂浓度低 ,处理时间短 ,缩
短了制片周期 ,提高了工作效率 ,易于掌握。
风油精的成分比较复杂 ,主要成分有:薄荷脑 、樟脑 、桉
油 、丁香酚 、水杨酸甲酯 ,辅料为液状石蜡 、玫瑰麝香香精和
色素叶绿素。究竟是风油精中哪种成分发挥作用 ,阻止破坏
纺锤体的形成 ,还不清楚 ,有待进一步研究。
参考文献
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[ 5] 程晓蕾 ,郭俊成,李洪涛.烟草染色体标本制备方法的研究[ J] .烟草科
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安徽农业科学 ,Journal of Anhui Agri.Sci.2007 , 35(6):1611　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　责任编辑　孙红忠　责任校对　李洪