全 文 ：第 27卷 第 3期
2 0 0 9年 3月
中 华 中 医 药 学 刊
CH INESE ARCH IVES OF TRAD IT IONAL CH INESE MED IC INE
Vo.l 27 No. 3
M ar. 2 0 0 9
中华中医药
653
学刊
HPLC法测定金钱草中槲皮素和山柰素含量
阎 婷1,金宪涵 2,王 盈3
( 11辽宁医学院药学院,辽宁 锦州 121001; 21营口市食品药品监督管理局, 辽宁 营口 115000;
31天津生物工程职业技术学院中药系, 天津 300462)
摘 要:目的:建立金钱草中槲皮素和山柰素的 HPLC含量测定方法。方法: 色谱柱为 D iam ond ODS柱; 流动
相为甲醇 - 0145%磷酸溶液 ( 50B50); 检测波长为 366nm。结果:槲皮素在 0104724~ 012362Lg范围内,山柰素在
011424~ 01 4272Lg范围内线性关系良好, 平均加样回收率值分别为 9918% 和 991 9% , RSD分别为 1139% 和
1148%。结论: 本方法灵敏、准确, 重现性好,为金钱草药材的质量控制提供了依据。
关键词:金钱草;槲皮素; 山柰素;高效液相色谱法
中图分类号: R284 文献标识码: A 文章编号: 1673 -7717( 2009) 03 -0653 - 02
Determ inat ion of Quercet in and Kaempfero l in Herba Lys imachiae by HPLC
YAN Ting1, JIN X ian-han2, WANG Ying3
( 11Liaon ingM edicine Un iversity, Jin zhou 121001, L iaoning, C h ina; 21Y ingkou Food and Drug Adm in is tration, Yingkou 115000, Liaoning, C hina;
31Tian jin In stitu te of B iological Enginneering, Tian jin 300462, C hina)
Abstrac:tObjective: To determ ine the con tent of quercetin and kaem pfero l in H erba Ly sim ach iae by HPLC.M ethods:
D iamond ODS co lumn was used. M obile phase consisted of m ethano l -01 45% phosphate. UV de tectorw ave leng th was set
a t 366nm. Resu lts: The linea rityw as from 0104724 to 012362Lg fo r que rce tin and from 01 1424 to 014272Lg fo rkaem pfer-
o,l and the ave rage recove ry w as 991 8% for querce tin and 9919% fo r kaem pfero l w ith RSD 1139% and 1148% re spec-
tively. Conclusion: Them e thod is sensitive and accura te, and can be u sed fo r the qua lity control o fH e rba Lysim achiae.
Keyw ords: H erba Ly sim achiae; que rc tin; kaempfe ro;l H PLC
收稿日期: 2008 - 10 - 26
作者简介:阎婷 ( 1981 - ),女,辽宁沈阳人,助教, 硕士,从事天然药
物活性成分研究及新药开发。
金钱草为报春花科植物过路黄 Lysimachia christinae
Hance. 的干燥全草 [1 ]。主产于四川 [2], 临床上用于治疗热
淋,沙淋, 尿涩作痛,黄疸尿赤, 痈肿疔疮,毒蛇咬伤,肝胆结
石,尿路结石。槲皮素和山柰素是金钱草中所含的黄酮类
化学成分,具有较强的生理与药理活性 [3]。本实验利用 RP
-HPLC色谱法对金钱草乙醇提取物项下的槲皮素和山柰
素进行含量测定,为金钱草药材的质量控制提供一定依据。
1 仪器与试药
日本岛津 LC - 10A高效液相色谱仪, SPD - 10A紫外
检测器, N3000 工作站。槲皮素对照品 (批号: 100081 -
200406), 山柰素对照品 (批号: 0861 - 200002)由中国药品
生物制品检定所提供; 甲醇为色谱纯, 其余试剂均为分析
纯,重蒸馏水; 金钱草购自四川省, 由辽宁中医药大学中药
鉴定教研室翟延君教授鉴定为正品。
2 方法与结果
211 色谱条件
色谱柱: 十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂 D iam ond
( 250mm @ 41 6mm, 5Lm ); 流动相: 甲醇 - 01 45% 磷酸溶液
( 50 B50 ); 检测波长: 366nm; 柱温: 室温 ( 25e ); 流速:
110mL /m in; 分离度大于 11 5;理论板数按槲皮素峰计应不
低于 2500。
21 2 对照品溶液的制备
精密称取经五氧化二磷干燥过夜的槲皮素 ( H )和山柰
素 ( S )对照品适量, 加甲醇制成每 1mL 各含槲皮素
23162Lg、山柰素 3516Lg的对照品溶液 ( H 为 0102362m g /
m L, S为 01 0356m g /mL )。
21 3 供试品溶液的制备
取金钱草粉末 (过 3号筛 ) 115g,精密称定,置具塞锥形
瓶中,精密加入 70%乙醇 50mL,密塞,称定重量, 加热回流
1h, 放冷,再称定重量,用 70%乙醇补足减失的重量,摇匀,
滤过。精密量取续滤液 25m L, 精密加入盐酸 5m L, 置 90e
水浴中加热水解 1h,取出, 迅速冷却,转移至 50mL量瓶中,
并加 70%乙醇稀释至刻度,摇匀,用微孔滤膜 ( 01 45Lm )滤
过,取续滤液, 即得。
21 4 测定法
分别精密吸取槲皮素对照品溶液 5LL、山柰素对照品
溶液 5LL、供试品溶液 10LL, 注入液相色谱仪, 测定, 即得
见图 1~ 3。
21 5 线性关系考察
21 51 1 槲皮素线性关系考察 精密称取槲皮素对照品
11181m g,置 50mL量瓶中, 加甲醇溶解并稀释至刻度, 摇
匀,精密吸取 1m L置 10m L量瓶中, 加甲醇至刻度制成每
1mL含 23162Lg的对照品溶液, 精密吸取 21 0、410、61 0、
81 0、101 0LL注入高效液相色谱仪中, 测定色谱峰面积, 以
进样量为横坐标,色谱峰面积为纵坐标, 求得槲皮素的回归
方程为: Y= 15826751699X - 25061 4, r= 019999, 线性范围
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DOI：10.13193/j.archtcm.2009.03.206.yant.052
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学刊
为 0104724~ 012362Lg。
2151 2 山柰素线性关系考察 精密称取山柰素对照品
171 80m g, 置 50m L量瓶中, 加甲醇溶解并稀释至刻度, 摇
匀,精密吸取 1mL置 10m L量瓶中, 加甲醇至刻度制成每
1mL含 3516Lg的对照品溶液, 精密吸取 410、610、810、
101 0、121 0LL注入高效液相色谱仪中,测定色谱峰面积,以
进样量为横坐标,色谱峰面积为纵坐标,求得山柰素的回归
方程为: Y= 12318931258X -7521 2, r= 01 9999,线性范围为
011424~ 014272Lg。
216 精密度实验
精密吸取同一供试品溶液 10LL, 按上述色谱条件, 连
续进样 5次,测定色谱峰面积,结果槲皮素、山柰素的 RSD
值分别为 01 48%、11 67% ,表明仪器精密度良好。
217 稳定性实验
精密吸取同一供试品溶液 10LL, 按 0、2、4、6、8h时间间
隔,分别进样分析,测定色谱峰面积, 结果槲皮素、山柰素的
RSD值分别为 1136%、1109% ,表明供试品溶液在 8h内稳定。
218 重复性实验
按供试品溶液制备方法平行操作制备供试品溶液 5
份,分别进样进行分析, 结果槲皮素、山柰素的 RSD值分别
为 1106% , 1109% ,表明方法重复性良好。
219 加样回收率实验
2191 1 槲皮素回收率实验 精密称取已知含量的样品 5
份,分别加入对照品溶液 210mL (浓度 01 4052m g /mL ), 按
供试品溶液的制备及含量测定方法同法操作,结果见表 1。
表 1 槲皮素加样回收率实验结果
编
号
样品含量
( mg)
对照品加
入量 (m g)
实测量
(m g)
回收率
(% )
平均回收
率 (% )
RSD
(% )
1 0. 8179 0. 8104 1. 6287 100. 1
2 0. 8129 0. 8104 1. 6217 99. 8
3 0. 8015 0. 8104 1. 6141 100. 3 99. 8 1. 39
4 0. 8174 0. 8104 1. 6085 97. 6
5 0. 8040 0. 8104 1. 6259 101. 4
测定结果提示: 本方法回收率在 9716% ~ 1011 4% 之
间, RSD为 1139% , 符合有关规定。
21 91 2 山柰素回收率实验 精密称取已知含量的样品 5
份,分别加入对照品溶液 21 0m L (浓度 019538mg /mL ), 按
供试品溶液的制备及含量测定方法同法操作,结果见表 2。
表 2 山柰素加样回收率实验结果
编
号
样品含量
(m g)
对照品加
入量 (m g)
实测量
(m g)
回收率
(% )
平均回收
率 (% )
RSD
(% )
1 1. 9227 1. 9076 3. 7961 98. 2
2 1. 9111 1. 9076 3. 8401 101. 1
3 1. 8843 1. 9076 3. 8262 101. 8 99. 9 1. 48
4 1. 9216 1. 9076 3. 8142 99. 2
5 1. 8901 1. 9076 3. 7849 99. 3
测定结果提示: 本方法回收率在 9812% ~ 1011 8% 之
间, RSD为 1148% , 符合有关规定。
21 10 样品含量测定
按供试品溶液制备方法制得样品 3批, 按上述色谱条
件测定,测定结果见表 3。
表 3 3批样品含量测定结果
批次 槲皮素
(% )
山柰素
(% )
槲皮素与山柰素
含量之和 (% )
1 0. 054 0. 128 0. 182
2 0. 036 0. 099 0. 135
3 0. 052 0. 094 0. 146
3 讨 论
31 1 曾比较了不同浓度 不同提取方法和不同提取时间的
影响
结果表明, 70% 乙醇提取液色谱图, 各峰的响应值比
50%乙醇和 95% 乙醇的高。回流提取的响应值比超声提
取高, 并且回流提取 01 5h色谱峰响应值很小, 回流提取
1h, 2h色谱峰数量一致, 且峰值差别不大, 出于经济考虑,
因此本文选择 70%乙醇回流提取 1h作为提取方法。
31 2 流动相的选择
本实验分别采用了不同系统的流动相进行测试比较,
结果样品中的槲皮素、山柰素在甲醇 - 01 45% 磷酸溶液
( 50B50)系统中分离度较好, 且保留时间恰当, 并无干扰
峰,故采用甲醇 - 01 45%磷酸溶液 ( 50B50)作为流动相。
31 3 检测波长的选择
金钱草中主要成分为黄酮类化合物, 此类化合物紫外
光谱的最大吸收为 270nm和 366nm, 通过比较, 366nm下被
检测的色谱峰峰形对称性好, 峰尖锐, 故选择 366nm 作为
检测波长。
参考文献
[ 1 ] 国家药典委员会.中华人民共和国药典 [S ].北京:化学工业
出版社, 2005: 152.
[ 2 ] 宋立人.现代中药学大辞典 (上册 ) [M ].北京:人民卫生出版社,
2001.
[ 3 ] 刘隽,邹国林.金钱草的研究进展 [ J ].唐山师范学院学报,
2002, 24( 2 ) : 8.
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