全 文 ：2013 年 08 月 云南化工 Aug． 2013
第 40 卷第 4 期 Yunnan Chemical Technology Vol． 40，No． 4
doi:10． 3969 / j． issn． 1004-275X． 2013． 04． 004
·分析测试·
微波辅助萃取-高效液相色谱法测定香丝草中槲皮素
张伟光，赵国君
(齐齐哈尔大学 化学与化学工程学院，黑龙江 齐齐哈尔 161006 )
收稿:2013-03-26
基金项目:黑龙江省教育厅科学技术研究项目(11531413)。
作者简介:张伟光(1970-) ，男，硕士，副教授，研究方向:大豆产品深加工及精细化学品的研究。
摘 要: 采用微波辅助萃取法提取，以高效液相色谱法测定香丝草中的槲皮素。确定了微波辅
助萃取法提取香丝草中槲皮素的最佳条件为:溶剂乙醇的体积分数为 60%，微波辐射时间 10 min，液
固质量比 45∶1，微波提取压力 500 kPa 。所得结果的相对标准偏差为 1． 13% ～ 2． 39% ，回收率在
99． 75% ～ 101． 38%之间。
关键词: 微波辅助萃取;高效液相色谱法;香丝草;槲皮素
中图分类号: O657 文献标识码: A 文章编号: 1004-275X(2013)04-0013-03
香丝草为一年生或二年生草本，别称野塘
蒿、野地黄菊、蓑衣草，其根纺锤状，常斜升，具纤
维状根，茎直立或斜升，叶密集。雌花多层，白色，
花冠细管状;两性花淡黄色，花冠管状;瘦果线状
披针形，花期 5 ～ 10 月。香丝草具有疏风解表、减
轻疼痛等作用 ，香丝草中含有人体所需要的一些
元素［1］，也含有含槲皮素、植物甾醇、胆碱等多种
成分，其中槲皮素具有较好的祛痰、止咳功效。此
外还可当作抗氧化剂，主要用于油脂、饮料、冷饮、
肉类加工制品［2］。目前，常用的中草药有效成分
提取方法大多采用室温浸泡、索氏提取法或加热
回流的方法，这些方法提取时间长，溶剂用量
大［3］，而微波辅助萃取技术具有提取时间短、溶剂
用量少、副产物少、产物易于纯化及提取效率高等
优点［4］，已被大量用于中草药的萃取研究［5-8］。本
文研究了溶剂浓度、微波辐射时间、液固比和提取
压力对香丝草中槲皮素提取率的影响，确定了最
佳微波萃取条件。
1 实验部分
1． 1 仪器与药品
WＲ-E型样品制备系统(北京美诚公司) ，功
率为850W，提取内罐的体积为100mL，外罐为
160 mm ×62 mm(长 ×直径) ;P230 型高效液相色
谱仪，大连依利特分析仪器公司;
槲皮素标准品(中国药品生物制品检定所) ，
实验所用试剂均为分析纯试剂，实验用水由蒸馏
水经纯化器纯化所得。
1． 2 实验方法
1． 2． 1 样品处理
取干燥的香丝草，粉碎后过孔径 0． 6 mm(30
目)筛 ，然后浸泡于石油醚中，室温放置 1 h 后，倾
去浸提液 ，再加石油醚浸泡 ，反复多次 ，至浸提
液无色。倾去浸提液 ，样品置于通风处干燥。精
确称取已干燥粉末样品 0． 400 0 g 置于样品提取
罐内罐，加入适量乙醇溶液，把内罐放进外罐 ，再
盖上压力盖，再将提取罐和控压罐同时放入微波
炉中 ，进行微波加热。提取完成后，取出提取罐
和控压罐冷却至室温 ，打开罐锁紧盖，罐内提取
液经过滤后，转移至 50 mL 容量瓶中，提取罐和残
渣用提取溶剂反复清洗 4 次，合并滤液，并用提取
溶剂定容至 50 mL，取一定量试液进行测定［9］。
1． 2． 2 色谱条件
色谱柱 Diamonsil C18柱(250 mm × 4． 6 mm，5
μm，大连依利特分析仪器公司) ，流动相为 V(乙
醇)∶ V(0． 1%三氟乙酸)= 60 ∶ 40;流速 1． 0 mL /
min，检测波长 340 nm，进样量 20 μL，柱温 30℃。
1． 2． 3 槲皮素含量的测定
取 0． 5 mL 提取液于 10 mL 试管中，加入 0． 5
mL 5% NaNO2 溶液，混匀后，放置 8 min ，然后再
加入 1． 0 mL 5% NaOH 溶液，然后用乙醇溶液定
容至 10 mL，放置 15 min，在选定波长下测定并记
录峰面积，代入标准曲线计算得到样品中含槲皮
素的量［10-11］。
2 结果与讨论
2． 1 标准曲线的确定
精确称槲皮素标准品 20 mg ，用 60%乙醇水
溶液定容至 100 mL 容量瓶中，精密吸取上述溶液
适量，用乙醇溶液释成含槲皮素分别为 10、20、40、
70、90、100 μg /mL 的一系列标准溶液，在 340 nm
波长下测定其峰面积。得到槲皮素的得到回归方
程为:A = 10165C + 2356． 7(r = 0． 9996)。
2． 2 最佳条件的确定
为进一步优化微波提取香丝草中槲皮素的实
验条件，按 L9(3
4)正交表安排实验，影响因素为乙
醇体积分数、微波时间、微波提取压力和液固质量
比，各因素和水平列于表 1。
表 1 正交设计的因素和水平
Table 1 Factors and levels of orthogonal design
水平
A
ρ(乙醇)/%
B
微波时间
/min
C
液固质量比
D
微波提取
压力 /kPa
1 40 8 35 400
2 50 10 40 500
3 60 12 45 600
按照表 1 正交实验设计确定的配方，进行正
交设计，以提取率为指标见表 2。
由表 2 可知:微波辅助提取的最佳条件为
A3B2C3D2。由 Ｒ值可以看出影响大小为 C 液固
质量比 ＞ D微波提取压力 ＞ A 乙醇浓度 ＞ B 微波
时间。
表 2 不同微波提取因素对槲皮素提取率的影响
Table 2 Microwave extraction factors on
extraction yield of quercetin
实验号
A
ρ(乙醇)/%
B
微波时间
/min
C
液固质量比
D
微波提取
压力 /kPa
提取率
1 1 1 1 1 30287
2 1 2 2 2 3． 816
3 1 3 3 3 3． 742
4 2 1 2 3 3． 459
5 2 2 3 1 3． 572
6 2 3 1 2 3． 315
7 3 1 3 2 3． 791
8 3 2 1 3 3． 609
9 3 3 2 1 3． 458
K1 10． 845 10． 537 10． 211 10． 317
K2 10． 346 10． 997 10． 733 10． 922
K3 10． 858 10． 515 11． 105 10． 810
Ｒ 0． 512 0． 482 0． 894 0． 605
2． 3 精密度和回收率实验
取同一批香丝草样品，在最佳条件下进行萃
取，分别测定各自的槲皮素含量，结果见表 3。表
明其相对标准偏差为 1． 13% ～ 2． 39%，重现性较
好。同时对样品进行了加标样回收实验，加入不
同量的槲皮素对照品溶液在微波条件下进行萃
取，测定峰面积，计算回收率，结果见表 4。表明
回收率在 99． 75% ～101． 38%，说明此方法有较好
的准确度。
表 3 精确度的测定结果
Table 3 The results of measuring accuracy
样品 槲皮素质量分数 /(mg /g) ＲSD/%
1 15． 67 1． 13
2 16． 15 2． 07
3 15． 27 1． 43
4 16． 09 2． 39
5 15． 48 1． 86
·41· 云南化工 2013 年第 4 期
表 4 回收率的测定结果
Table 4 The recovery measurement results
样品 原有量 /mg 加入量 /mg 总量 /mg 回收率 /%
1 15． 67 15． 0 30． 81 100． 93
2 16． 15 12． 0 28． 13 99． 83
3 15． 27 12． 0 27． 38 100． 92
4 16． 09 8． 0 24． 07 99． 75
5 15． 48 8． 0 23． 59 101． 38
3 结论
采用微波辅助萃取法提取，以高效液相色谱
法测定香丝草中槲皮素含量。并且通过正交实验
设计优化了溶剂浓度、微波辐射时间、液固比和微
波提取压力等微波提取条件，确定了微波辅助萃
取法提取香丝草中槲皮素的最佳条件为:溶剂乙
醇的体积分数 60%，微波辐射时间 10 min，液固质
量比为 45∶1 ，微波提取压力为 500 kPa 。
参考文献:
［1］ 郭振库，金钦汉，范国强．微波帮助提取中药金银花
中有效成分的研究［J］． 中国中药杂志，2002，27
(3) :189-192．
［2］ 马莹莹，李英杰，刘雅静．分光光度法测定蒙药材多
叶棘豆中槲皮素的含量［J］． 内蒙古民族大学学报:
自然科学版，2010，25 (1 ) :26-28．
［3］ 王德先，杨更亮，王琳颖．毛细管区带电泳测定芦荟
中的有效成分［J］．色谱，2000，18 (5) :423-425．
［4］ 张 征，武永昆．微波辅助萃取废烟叶中茄尼醇工艺
研究［J］．云南化工，2005 ，32 (1 ) :7-10．
［5］ 蔡熠，郁颖佳，归靓． 微波辅助萃取-高效液相色谱
法测定金银花药材中槲皮素和木樨草素的含量
［J］． 中国临床药学杂志，2010，19 (4 ) :236-239．
［6］ 马君义，张继，徐小龙．正交试验优化茄尼醇的微波
辅助萃取工艺［J］． 中国医院药学杂志，2010 ，30
(12 ) :1010-1012．
［7］ 张帆，周峰．微波辅助萃取-分光光度法测定卫矛中
总黄酮［J］． 光谱学与光谱分析，2008，28 (7 ) :
1633-1636．
［8］ 彭金年，邹思璐，孙博．微波辅助萃取法提取菟丝子总
黄酮的最佳工艺［J］． 光谱实验室，2011 ，28 (2 ) :
674-677．
［9］ 李敏晶，游景艳，刘忠英．微波辅助流动萃取槐花中
的黄酮类成分［J］． 高等学校化学学报，2004 ，25
(5 ) :850-852．
［10］ 陈斌，郁颖佳，归靓．微波辅助萃取 －高效液相色谱
法测定鱼腥草药材中槲皮素的含量［J］． 复旦大学
学报:医学版，2008 ，35 (1 ) :142-144．
［1］ 赵光望，许文举． HPLC法测定千里光中槲皮素的含
量［J］． 中国药房，2011 ，22 (11 ) :1022-1023．
Determination of Quercetin from Conyza bonariensis by Microwave-Assisted
Extraction and High Performance Liquid Chromatography
ZHANG Wei-guang ，ZHAO Guo-jun
(College of Chemistry and Chemical Engineering，Qiqihar Unversity ，Qiqihar 161006，China)
Abstract: Determination of quercetin from Conyza bonariensis by HPLC and microwave-assisted ex-
traction was reported． The effects of solvent concentration，microwave time，ratio of solution to solid and mi-
crowave-assisted extraction pressure were evaluated． The extraction conditions of quercetin from Conyza
bonariensis by microwave － assisted method were optimized :ethanol concentration is 60 %(V/ V) ;micro-
wave time is 10 min;ratio of solution to solid is 45∶1 and microwave-assisted extraction pressure is 500 kPa．
The relative standard deviation is 1． 13%～ 2． 39% and the recovery is 99． 75%～ 101． 38% ． Microwave-as-
sisted extraction and high performance liquid chromatography was simple and accurate with good reproduc-
ibility．
Key words: Microwave-assisted extraction;HPLC;Conyza bonariensis;Quercetin
·51·2013 年第 4 期 张伟光等:微波辅助萃取-高效液相色谱法测定香丝草中槲皮素