全 文 ：收稿日期:2005-01-31;　修订日期:2005-05-22
基金项目:吉林省教育厅科学研究计划项目(No.2004-04)
作者简介:张学武(1973-),男(汉族),吉林大安人 , 现任延边大学医学院
讲师 ,博士学位 ,主要从事中草药开发与肝脏生物化学研究工作.
反相高效液相色谱法测定珍珠梅中槲皮素的含量
张学武1 , 关丽萍2 , 李天洙1
(1.延边大学医学院 ,吉林 延吉　133000;　2.延边大学药学院 ,吉林 延吉　133000)
摘要:目的:建立珍珠梅中槲皮素反相高效液相色谱法(RP-H PLC)含量测定方法。方法:采用 RP-H PLC 对槲皮素进
行定量测定;采用 YMC-pack ODS-A(4.6 mm×250 mm , 5μm)色谱柱 , 检测波长为 370 nm。结果:色谱条件为流动相
甲醇-0.2%磷酸溶液(50∶50),柱温为 35℃,流速 0.4 m l· min-1。 此法线性范围 0.025 ～ 0.15 μg , r=0.999 9 , 精密度
(RSD)为 0.72%(n=5);平均回收率为 98.8%, RSD 为 0.69%(n=5)。结论:测定方法简便快捷 、精密度高 、准确性好 ,
可以作为珍珠梅中黄酮的测定方法 ,以控制其原料的质量。
关键词:珍珠梅;　反相高效液相色谱;　槲皮素;　含量
中图分类号:R284.2　　文献标识码:A　　文章编号:1008-0805(2005)09-0830-01
Determination of Quercetin in Sorbaria sorbi f olia by RP-HPLCAssay
ZHANG Xue-wu1 , GUAN Li-ping2 , LI T ian-zhu1
(1.Collegeo f Medicine , Y anbian Universi ty , Yanj i , J i lin , 133000 , China;2.College o f Pharma-
cognosy , Yanbian Universi ty , Yanj i , J il in , 133000 , China)
Abstract:Objective:To e stablish an RP-HPLC method for the determination o f quercetin in S orbaria sorbi f olia .Meth-
ods:The content o f quer ce tin w as determined by RP-HPLC.YMC-pack ODS-A(4.6 mm×250 mm , 5 μm)column was
used.The de tection waveleng th w as se t at 370 nm.Results:The mobile phase consisted of methano l-0.2% pho sphatic
acid(50∶50)with flow rate 0.4 ml·min-1 and co lumn temperature at 35℃.The me thod w as linea r within the range of
0.025 ～ 0.15 μg ,(r=0.999 9).The method RSD was 0.72%(n=5).The ave rage recovery o f assay was 98.8% and
RSD 1.45%(n=5).Conclusion:The method is simple , rapid and highly accura te and precise.I t can be used for the quan-
titative determina tion of quer ce tinin S orbaria sorbi f olia.
Key words:Sobaria sorbi f olia ;　RP-H PLC;　Que rce tin;　Determina tion
　　珍珠梅 Sobaria sorbi f olia 属蔷薇科植物 , 又称“山高梁”“八
木条” , 广泛分布于云南 、贵州 、四川 、湖北 、甘肃 、宁夏及东北 , 有
活血化瘀 ,消肿止痛 , 治骨折及跌打损伤的作用 ,其主要成分为黄
酮类化合物[ 1] 。其药理作用有抗缺氧作用 、保护肝脏及抗肿瘤作
用等[ 2 ,3] 。槲皮素为珍珠梅中一种黄酮类化合物 , 研究表明 , 槲
皮素具有抗自由基[ 4] 、抑制酪蛋白激酶Ⅱ(CK Ⅱ)等作用[ 5] 。 槲
皮素为珍珠梅中含量较高的活性成分 ,目前尚未见有珍珠梅中槲
皮素含量测定的报道。本实验建立了 RP-H PLC 法测定珍珠梅
中槲皮素含量的方法。
1　仪器 、试剂和药品
SC L-10Avp 型高效液相色谱仪(日本岛津);S PD-10Avp
型紫外-可见检测器(日本岛津);XW-80A 旋涡混合器(上海
青浦沪西仪器厂);AS3120A 型超声波清洗脱气器(奥特宝恩斯
仪器有限公司)。
甲醇(色谱纯),槲皮素(对照品 ,中国药品生物制品检定所)。
珍珠梅样品采自吉林省延吉市市郊 ,由延边大学药学院刘永镇教
授鉴定为真品。
2　方法与结果
2.1　色谱条件 色谱柱为 YMC-pack ODS-A(4.6 mm ×250
mm , 5 μm)色谱柱 ,流动相为甲醇-0.2%磷酸溶液(50∶50),柱温
35℃,流速 0.4 ml·min-1 。
2.2　波长的选择 取槲皮素对照品配制成一定浓度的甲醇溶液 ,
在 200～ 500 nm 波长范围内进行紫外光谱扫描 , 确定 370 nm 为
测定波长。
2.3　标准曲线的绘制
2.3.1　标准溶液的配制 精密称取槲皮素对照品 50 mg , 置于 50
ml量瓶中 , 加入甲醇溶解 , 定容于 50 ml , 所得浓度 1 mg/ ml ,
备用。
2.3.2　对照品溶液的制备 精密吸取对照品贮备液 1 ml , 置 100
ml量瓶中 ,加甲醇稀释至刻度 , 摇匀 , 即得 0.01 mg/ ml槲皮素 ,
备用。
2.3.3　线性范围 取上述槲皮素对照品溶液 , 分别进样 2.5 , 5 ,
7.5 , 10 , 12.5 , 15μl ,按色谱条件测定峰面积积分值 , 以峰面积为
纵坐标 ,浓度为横坐标 , 绘制标准吸收曲线 , 并用最小二乘法求回
归方程 ,得槲皮素(C)与峰面积(A)的关系 , A =47 999.9C+
11 895 , 相关系数 r=0.999 9。结果表明 , 槲皮素溶液浓度在
0.025 ～ 0.15 μg 内 ,槲皮素峰面积(A)与浓度(C)之间呈良好的
线性关系。
2.4　精密度实验 精密吸取对照品供试液(约 10 μg ·ml-1), 按
“2.1”条件 , 连续进样 5 次 , 每次 10 μl , 测定峰面积为:468 655 ,
460 152 , 466 348 , 464 901 , 462 265 , 平均峰面积为 464 464 , 积分
值计算 RSD 值 , 结果 RSD =0.72%, 说明仪器和色谱条件均具
有良好的精密度。
2.5　重现性实验 精密称取药品粉末 0.1 g 共 5 份 , 按“ 2.8”项
下样品溶液的制备操作 , 按“ 2.1” 项下条件连续进样 5 次 , 每次
20 μl , 测定峰面积为:208 211 , 206 843 , 205 448 , 202 156 ,
204 560 ,平均峰面积为 205 444 , R SD=1.12%, 结果显示 , 该方
法具有较好的重现性。
2.6　稳定性实验 在室温条件下 , 将样品按测定方法处理后 , 分
别在 2.0 , 4.0 , 8.0 , 12.0 , 24.0 h 每次进样 20 μl , 测得峰面积为:
207 532 , 206 743 , 205 842 , 204 562 , 206 570 , 平均峰面积为
206 249.8 , RSD=0.54%, n=5。结果表明 , 该溶液在 24 h 内的
含量基本保持不变。
2.7　回收率实验 精密称取样品 0.1 g 共 10 份 , 其中 5 份按
“2.8”测定样品本底含量 , 5份各加入槲皮素对照品溶液适量 , 溶
解 ,按“ 2.8”依反相高效液相色谱法测定槲皮素含量 , 计算回收
率。结果见表 1。
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时珍国医国药 2005 年第 16卷第 9期 LISH IZHEN MEDICINE AND MA TERIA MEDICA RESEA RCH 2005 VOL.16 NO.9
表 1　珍珠梅中槲皮素的回收率
序号 加入量
C/μg·ml-1
测得值
C/μg·m l-1
回收率(%) 平均回收率(%) RSD(%)
1 9.50 9.38 98.7
2 9.48 9.28 97.9
3 9.72 9.64 99.2 98.8 1.45
4 9.48 9.50 100.2
5 9.52 9.32 97.9
　　n=5
2.8　珍珠梅提取物中槲皮素含量的测定 称取干燥并切成细段
的珍珠梅 50 g , 用 6 倍量 75%乙醇浸泡过夜 ,加热回流 , 过滤 , 干
燥。精密称取提取物 100 mg ,加入少量甲醇溶解 , 移入 50 ml量
瓶中 ,定容 , 摇匀 ,用微孔滤膜过滤 , 作为供试液 ,精密移取供试液
20 μl ,注入高效液相色谱仪 , 在 370 nm 处测定峰面积 ,根据线性
回归方程 ,用外标两点法测定含量。结果见表 2。
表 2　珍珠梅中槲皮素的含量测定
序号 峰面积 槲皮素含量
C/μg·m l-1
平均值
C/μg·ml-1 RSD(%)
1 207 147 4.07
2 204 441 4.01 4.04 0.69
3 205 101 4.03
　　n=3
3　讨论
本实验利用高效液相法测定珍珠梅中槲皮素的含量尚属首
次 ,该方法简便 、准确 , 重现性好 , 为珍珠梅药物的开发提供了质
量控制标准。分离黄酮类化合物的实验多采用 0.4%的磷酸 , 但
磷酸影响柱子的稳定性 , 为延长色谱柱的使用寿命 , 在保证样品
分离度的情况下 ,将磷酸的含量降至 0.2%。
参考文献:
[ 1 ] 　江苏新医学院.中药大辞典[ M ] .上海:上海科学技术出版社 ,
1994:8-9.
[ 2 ] 　张学武 ,金海玲 ,赵　红 ,等.珍珠梅提取物对四氯化碳所致大鼠急
性肝损伤的保护作用[ J] .中国中医药科技 , 2001 , 8(6):373-374.
[ 3 ] 　Zhang XW ,Zhang XB , Quan JS , et al.Inhibitory ef fect of sorbifo-
lia on DEN-induced precan cerou s hepatic foci and it s ant ioxidative
act ivies in rat s[ J] .肿瘤防治杂志 , 2003 , 10(11):1137-1140.
[ 4 ] 　Comish KM , William son G , S anders on J.Quercet in metabolism in
the lens:role in inhibi ti on of h ydrogen peroxide induced cataract
[ J] .Free Radical Biology &Medicine , 2002 , 33(1):63-65.
[ 5 ] 　康铁邦 , 黄　才 ,梁念慈.槲皮素对大鼠肝酪蛋白激酶Ⅱ的抑制作
用[ J] .生物化学杂志 , 1996 , 12(3):322-325.
收稿日期:2005-02-16;　修订日期:2005-05-09
基金项目:北京市中医药科技资助项目
作者简介:章红英(1961-),女(汉族),浙江绍兴人 , 现任首都医科大学中
医药学院副教授 ,硕士学位 ,主要从事中医糖尿病研究工作.
其　　它
消渴古籍数字化研究势在必行
章红英1 , 刘　宁1 , 彭　莉2 , 赵　飞3 , 王秀英3 ,
李文刚1 , 史　青1 , 梁　贲1 , 付永慈2 , 齐　佳4
(1.首都医科大学中医药学院 ,北京　100054;　2.中国中医研究院 ,北京　100700;
3.北京联合大学自动化学院 ,北京　100101;　4.清华大学计算机与信息学院 ,北京　100084)
摘要:在概述了古籍数字化现状问题后 , 从专科疾病史 、糖尿病临床研究 、科技文献资源的有效利用三方面阐述了消渴
专题古籍数字化研究的必要性 ,介绍了北京市中医药管理局课题“宋以前消渴数据资源库建设”的建设概况。
关键词:古籍;　数字化;　消渴
中图分类号:R2-03　　文献标识码:B　　文章编号:1008-0805(2005)09-0831-02
1　古籍数字资源研究概况
古籍数字资源开发最早的是 20 世纪 70 年代末美国的
OCLC 和 RLIN 。它使不少流传外的古籍得以被中国学者利用。
我国从 20 世纪 80 年代中期开始工作。尽管艰难 ,但还是取
得了可喜的成果。
台湾地区有代表性的是:1984-02-01台湾中央研究院史籍自
动化计划之“汉籍电子文献” [ 1](旧称:古籍全文资料库);近年由
台湾中央研究院历史语言研究所文物图像资料室开发的“简帛金
石资料库” [ 2] ;中医古籍文献全文检索系统 , 1990 年由高雄市中
医医院苏贯中完成。其中有《内经》及金元四大家索引系统 ,近年
又增加了《景岳全书》《类证治裁》等全文库 ,并制作了资料库管理
系统。别还发行了中药本草古籍善本光盘。
香港 ,主要是香港中文大学中国文化研究报依靠香港“大学
及理工拔款委员会” 、“台湾蒋经国学术交流基金会” 、“香港研究
资助局”的拔款 , 从 1988 年开始进行中国古代文献资料库的建
设 ,现已基本完成。出版了“汉达古籍资料库”光盘 , 可提供 1 100
万字的古籍检索服务 , 部分已上网[ 3] 。 但现在尚没有中医古
籍库。
大陆最初的古籍数据库主要是书目数据库 , 它始于南京图书
馆 、辽宁图书馆 、浙江图书馆等省市级大型图书馆 , 后以古籍光盘
库为主 ,一般有图像版 、全文版 、图文版三种类型。现今 , 网络化
是古籍数字化的发展趋势 , 现有网上主要中文古籍数据库可见:
《网上主要中文古籍据库调查统计表》 [4] 。中医古籍光盘库 , 目前
以“中华医典”为全。这是“九五”国家重点出版规划项目 ,由长沙
市宏宇科技开发有限公司策划 , 湖南电子音像出版发行。该光盘
有强大的检索功能 ,可对任意字 、词 、句进行检索 , 但文中错误 、缺
字不时出现。国家中医药管理局中国中医药文献检索中心利用
虚拟研究中心平台 ,联合全国十多家中医药大学 、学院及科研机
构于 2002 年开始建设结构型中药科技基础信息数据库。该数据
库共设计了中药单味药 、中药品种 、中药生药材鉴定 、中药药理 、
中药临床药理 、中药毒理及中药化学成分等 7 个单表数据库 , 7
个数据库共设立了 158 字段。到 2003 年底 , 该数据库已经通过
国际互联网投入使用 ,但尚无古籍库。
总之 ,古籍数字化研究虽成果累累 , 但与浩瀚的传统古籍相
比 ,数字资源还只是少数 , 另外它的开发利用 , 还存在一些问题:
1.1　古籍数字资源缺乏深度开发 表现在数字资源库文献种类
上 ,全书 、全文库多 , 专题类库少;文中库多 , 医学等自然科学
类少。
1.2　中医数据资源库建设的组织方式不适应需求 表现为一方
面对中医古籍的整理缺乏规划及成龙配套方案 , 而另一方面却又
因怕重复建设 、资金浪费 、质量不保 ,而形成少数单位对中医古籍
数字资源库建设的垄断。在既无竞争 、经济效益不明显的情况
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LISHIZH EN MEDICINE AND MA TERIA MEDICA RESEARCH 2005 VOL.16 NO.9 时珍国医国药 2005 年第 16 卷第 9 期