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DA-6对冬季迟缓期的艾纳香生长和有效成分含量的影响



全 文 :2015 年 11 月 第 17 卷 第 11 期 中国现代中药 Modern Chinese Medicine Nov. 2015 Vol. 17 No. 11
·中药农业·
△[基金项目] 国家自然科学基金项目(81403035);科技型中小企业技术创新基金(14C26214602908)
*[通信作者] 庞玉新,副研究员,研究方向:南药资源研究与开发;Tel:(0898)23300268,E-mail:blumeachina@ 126. com
DA - 6 对冬季迟缓期的艾纳香生长和
有效成分含量的影响

王丹1,马青松1,范佐旺1,李小婷1,宛骏1,袁蕾1,陈晓鹭1,邹纯礼2,庞玉新1*
(1. 中国热带农业科学院 热带作物品种资源研究所 /农业部华南作物基因资源与种质创制重点
开放实验室 /海南省艾纳香工程技术研究中心,海南 儋州 571737;
2. 海南艾纳香科技发展有限公司,海南 海口 570208)
[摘要] 目的:研究 DA-6 对冬季迟缓期艾纳香生长和有效成分含量的影响。方法:以一年生艾纳香种子苗为
实验材料,在冬季艾纳香生长迟缓期进行 3 次喷施 DA-6。测定艾纳香的株高、地径、叶长和叶宽等生长指标以及叶
干重。分别采用紫外可见分光光度法和 GC法测定艾纳香叶片总黄酮和 l-龙脑的相对含量,并计算绝对含量。结果:
DA-6 显著促进艾纳香生长,增加叶干重,其中 10 mg·L -1 DA-6 作用的效果最显著。DA-6 抑制了艾纳香叶片中总黄
酮和 l-龙脑相对含量的积累。CK处理组总黄酮和 l-龙脑相对含量最高,显著高于 100 mg·L -1 DA-6 处理组 77. 78%
和 96. 49%。DA-6 显著提高了总黄酮和 l-龙脑的绝对含量。10 mg·L -1 DA-6 处理组艾纳香叶片中总黄酮和 l-龙脑含
量最高,显著高于其他处理组,是 CK 处理组的 2. 33 倍和 3. 33 倍。结论:因此,在冬季艾纳香生长迟缓期施加
DA-6 可以促进艾纳香生长和叶干重的增加,提高总黄酮和 l-龙脑的绝对含量。
[关键词] DA-6;艾纳香;迟缓期;l-龙脑;总黄酮;叶
Effect of DA-6 on Growth and Contents of Effective Constituents in Blumea Balsamifera in
Slow Growth Period of Winter
WANG Dan1,MA Qingsong1,FAN Zuowang1,LI Xiaoting1,WAN Jun1,YUAN Lei1,
CHEN Xiaolu1,ZOU Chunli2,PANG Yuxin1*
(1. Tropical Crops Genetic Resources Institute,Chinese Academy of Tropical Agricultural Sciences /Key Laboratory of
Crop Gene Resources and Germplasm Enhancement in Southern China /Hainan Provincial Engineering
Research Center for Blumea Balsamifera,Danzhou 571737,China;
2. Hainan Xiangdaolijia Biotechnology Co. ,Ltd. ,Haikou 570208,China)
[Abstract] Objective:To investigate the effect of DA-6 on growth and contents of effective constituents in Blumea
balsamifera (L.)DC. in slow growth period of winter. Methods:The seedlings of one-year-old B. balsamifera were applied
with DA-6 in slow growth period of winter three times. The height,ground diameter,length of leaf,width of leaf and leaf
biomasses were measured. Then, the relative contents of total flavonoids and l-borneol in leaves of B. balsamifera were
determined by UV and GC methods,respectively. The absolute contents were calculated. Results:The DA-6 significantly
enhanced the growth of B. balsamifera,and increased leaf biomass. The effect of 10 mg·L-1 DA-6 treatment group was the most
obvious. The application of DA-6 significantly inhibited the accumulation of relative contents of total flavonoids and l-borneol.
The relative contents of total flavonoids and l-borneol under CK treatment were the highest,which were over 100 mg·L -1 DA-
6 treatment with 77. 78% and 96. 49% . However,DA-6 significantly increased the absolute contents of total flavonoids and
l-borneol in leaves. The absolute contents of total flavonoids and l-borneol under 10 mg·L -1 DA-6 treatment were the highest,
which were 2. 33 and 3. 33 times than that of CK. Conclusion:Therefore,the DA-6 could significantly promote the growth and
the accumulation of leaves,as well as the absolute contents of total flavonoids and l-borneol in B. balsamifera in slow growth
period of winter.
[Keywords] DA-6;Blumea balsamifera;slow growth period;l-borneol;total flavonoids;leaf
doi:10. 13313 / j. issn. 1673-4890. 2015. 11. 017
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2015 年 11 月 第 17 卷 第 11 期 中国现代中药 Modern Chinese Medicine Nov. 2015 Vol. 17 No. 11
艾纳香为菊科(Asteraceae)植物艾纳香 Blumea
balsamifera (L. )DC. 的新鲜或干燥地上部分,别名
大风艾、大叶艾等,具有祛风除湿、温中止泻、活
血解毒等功效,还具有促进皮肤创伤的作用[1-3]。艾
纳香广泛分布于我国的海南、贵州、云南等省[4]。
主要含有挥发油类、黄酮类成分以及倍半萜类等化
合物,其主要成分为挥发油类成分 l-龙脑 (l-
borneol)[5-7]。施肥是提高药材产量和质量的有效途
径[8]。在艾纳香道地产区贵州省罗甸等地很少对栽
培艾纳香施肥或仅施少量钙镁磷肥。何元农等[9]施
用农家肥圈肥、油枯和柴灰,以及尿素、过磷酸钙
和氯化钾和复合肥等,结果表明施肥组的经济产量
和生物产量高于对照组,且有效成分含量不减。其
中氮肥对生物产量增加作用明显,得油率和 l-龙脑
含量与 K肥用量呈正相关关系。何元农等[10]研究证
实氮肥可以提高艾纳香药材的产量和有效成分的含
量。王丹等[11]研究发现锰元素极显著的提高冬季生
长迟缓期的艾纳香生长指标和生物量,对 l-龙脑和
总黄酮的相对含量的提高无显著影响,但是极显著
提高了其绝对含量,即单株质量。因此,如何在获
得较高产量的同时,显著增加有效成分的含量,是
艾纳香施肥亟待解决的问题。
DA-6(二烷氨基乙醇羧酸酯,胺鲜酯)是一种新
式细胞分裂素类的植物生长调节剂[12],具有生长
素、赤霉素和细胞分裂素等多种功能。众多研究证
实,DA-6 可以提高植物叶绿素、核酸和蛋白质等含
量,进而促进植物光合作用,增加过氧化物酶和硝
酸还原酶的活性。同时,DA-6 还可以促进植物细
胞分裂、伸长以及 C、N 代谢等[13-14]。具有安全、
高效、价格低廉以及使用方便等特点,具有广阔的
应用前景[15]。根据美国农业部的报道,少量的
DA-6 可使甜菜等经济作物增产 50%,豆类增产
60%,也可以使人参长得如香蕉一样粗大[13]。目
前未见有关 DA-6 对艾纳香的肥效研究。因此,在
课题组前期研究的基础上,在海南的冬季艾纳香生
长的迟缓期,进行不同浓度的 DA-6 对艾纳香生长
指标、生物量以及有效成分相对含量和绝对含量影
响的肥效研究。
1 材料与方法
1. 1 材料
选择一年生艾纳香种子苗,经中国热带农业科
学院热带作物品种资源研究所庞玉新副研究员鉴定
为艾纳香 Blumea balsamifera (L. )DC. 。于 2014 年 1
月 27 日开始,每隔 10 d 进行叶面喷施 DA-6,共施
肥 3 次。于 3 月 7 日进行取样。分别设置 1、10 和
100 mg·L -1 DA-6 处理组,另设空白对照组(CK) ,
不进行任何处理。
1. 2 试验仪器和试剂
7890A气相色谱仪(美国安捷伦科技公司) ,FID
氢火焰离子化检测器(美国安捷伦科技公司) ,
G4513A 16 位自动进样器(美国安捷伦科技公司) ,
2012-PCS紫外分光光度计(尤尼柯(上海)仪器有限
公司) ,CPA225D电子分析天平(北京赛多利斯天平
有限公司) ,KQ-500DB 型超声仪(昆山市超声仪器
有限公司) ;左旋龙脑对照品(阿法埃莎化学有限公
司,批号为 10147015,纯度 > 98%) ,芦丁标准品
(中国药品生物制品检定所,批号:100080-200707,
纯度:92. 5%) ;水杨酸甲酯(天津光复精细化工研
究所) ,乙酸乙酯、甲醇、氢氧化钠(西陇化工股份
有限公司) ,亚硝酸钠(国药集团化学试剂有限公
司) ,九水合硝酸铝(广州化学试剂厂)均为国产分
析纯。DA-6 购自郑州神雨生物制品有限公司。
1. 3 生长指标的测定
用直尺和卷尺分别测量株高、叶长和叶宽,使
用电子游标卡尺测量地径,阴干后用天平测量叶
干重。
1. 4 总黄酮相对含量和绝对含量测定
1. 4. 1 对照品溶液的配制及标准曲线的制备 对照
品溶液的配制以及标准曲线的制备同王丹等[11]实验
中所用方法。
1. 4. 2 供试品溶液的制备 分别精密称取艾纳香叶
(过 20 目筛)粉末 1. 000 0 g,至具塞锥形瓶中,加
甲醇溶液 50 mL,称定重量,冷浸 30 min 后,在超
声频率为 80 Hz 的超声清洗器中超声提取 30 min,
放冷,再称定重量,用甲醇补足减失的重量,摇匀
后过滤,取滤液作为供试品。
1. 4. 3 方法学考察 分别按照精密度、稳定性、重
复性和加样回收试验进行方法学考察,结果均表明
该测定方法良好。
1. 4. 4 总黄酮相对含量测定 进行供试品溶液吸光
度指测定,计算艾纳香不同部位总黄酮相对含量,
为质量百分数,单位为%。
1. 4. 5 总黄酮绝对含量计算 总黄酮的绝对含量为
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艾纳香总黄酮产量,指艾纳香不同部位中所含总黄
酮的质量。
总黄酮绝对含量 = 不同部位总黄酮相对含量 /
100 ×对应部位药材生物量,单位为 g /株。
1. 5 左旋龙脑含量测定
1. 5. 1 l-龙脑含量测定 采用 GC 法测定艾纳香叶片
中 l-龙脑含量,具体见王丹等[11]实验中采用方法。
并且,精密度、稳定性、重复性和加样回收试验均
表明该方法良好。所得为艾纳香叶片中 l-龙脑的相
对含量。
1. 5. 2 l-龙脑绝对含量计算 l-龙脑的绝对含量为艾
纳香总黄酮产量,指艾纳香不同部位中所含总黄酮
的质量。
l-龙脑绝对含量 =不同部位 l-龙脑相对含量 /100
×对应部位药材生物量,单位为 g。
1. 6 数据分析
采用 Excel 进行数据录入及图表的绘制,采用
SPSS 16. 0 软件进行统计与 One-way ANOVA 方差分
析,并用 Duncan检验法进行多重比较。
2 结果与分析
2. 1 DA-6 对艾纳香生长指标的影响
方差分析结果表明,不同浓度 DA-6 处理,艾纳
香株高在各处理间差异显著(P < 0. 05) ,地径、叶
长和叶宽差异极显著(P < 0. 01)。由表 1 可见,较
CK处理相比,10 mg·L -1和 100 mg·L -1 DA-6 处理
组的株高显著增加了 49. 71%和 48. 87%。1、10 和
100 mg·L -1DA-6 处理组的叶长和叶宽均极显著高于
CK处理,其中叶长分别是 CK 的 1. 89、2. 26 和
2. 22 倍。
表 1 DA-6 对艾纳香生长指标的影响
处理组
生长指标
* 株高 / cm **地径 /mm **叶长 / cm **叶宽 / cm
1 mg·L -1 DA-6 26. 13 ± 4. 68ab 8. 44 ± 0. 71b 14. 57 ± 1. 29a 4. 56 ± 0. 36a
10 mg·L -1 DA-6 33. 79 ± 6. 59a 10. 94 ± 0. 61a 17. 45 ± 1. 10a 5. 15 ± 0. 78a
100 mg·L -1 DA-6 33. 76 ± 3. 74a 9. 86 ± 1. 23ab 17. 12 ± 3. 03a 5. 06 ± 1. 25a
CK 22. 57 ± 1. 33b 5. 35 ± 1. 07c 7. 73 ± 2. 46b 2. 02 ± 0. 89b
注:* 表示不同处理间在 0. 05 水平差异显著;**表示在 0. 01 水平差异极显著;表中不同小写字母表示不同处理间在 0. 05 水平差异显著。
2. 2 DA-6 对艾纳香叶干重的影响
方差分析结果表明,不同浓度的 DA-6 处理组,
艾纳香叶干重在各处理间差异极显著(P < 0. 01)。
由表 2 可见,10 mg·L -1和 100 mg·L -1 DA-6 处理组
的叶干重极显著高于 CK处理组,分别是 CK处理组
的 5. 59 和 3. 39 倍。较 1 mg·L -1 DA-6 处理组相比,
二者显著增加了 124. 44%和 36. 14%。1 mg·L -1 DA-
6 处理组的叶干重是 CK的 2. 49 倍。
表 2 DA-6 对艾纳香叶干重的影响
处理组 **叶干重 / g
1 mg·L -1 DA-6 43. 53 ± 6. 24b
10 mg·L -1 DA-6 97. 70 ± 10. 92a
100 mg·L -1 DA-6 59. 26 ± 13. 53a
CK 17. 48 ± 2. 92c
注:**表示在 0. 01 水平差异极显著;表中不同小写字母表示不同
处理间在 0. 05 水平差异显著。
2. 3 DA-6 对艾纳香叶片中总黄酮相对和绝对含量的
影响
方差分析结果表明,不同浓度的 DA-6 处理,艾
纳香叶片中总黄酮相对含量和绝对含量均差异极显著
(P <0. 01)。由表 3可见,施加不同浓度的 DA-6显著
降低了总黄酮的相对含量,其中 CK处理组的总黄酮
相对含量为 2. 24%,显著高于 1、10 和 100 mg·L -1
DA-6处理组 53. 43%、140. 86%和 96. 49%。10 mg·L -1
DA-6 处理组艾纳香叶片中总黄酮含量最高,为
0. 91 g,显著高于其他处理组,是 CK 处理组的
2. 33 倍。
表 3 DA-6 对艾纳香叶片总黄酮相对含量和
绝对含量的影响
处理组
总黄酮含量
**相对含量(%) **绝对含量 / g
1 mg·L -1 DA-6 1. 46 ± 0. 18 b 0. 63 ± 0. 02 b
10 mg·L -1 DA-6 0. 93 ± 0. 18 c 0. 91 ± 0. 17 a
100 mg·L -1 DA-6 1. 14 ± 0. 29 bc 0. 65 ± 0. 06 b
CK 2. 24 ± 0. 19 a 0. 39 ± 0. 04 c
注:**表示在 0. 01 水平差异极显著;表中不同小写字母表示不同
处理间在 0. 05 水平差异显著。
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2. 4 DA-6 对艾纳香叶片中 l-龙脑相对和绝对含量的
影响
方差分析结果表明,不同浓度的 DA-6 处理组,
艾纳香叶中 l-龙脑相对含量和绝对含量在各处理间
差异极显著(P < 0. 01)。由表 4 可见,CK 处理组
的 l-龙脑相对含量最高,为 0. 16%,显著高于
10 mg·L - 1和 100 mg·L -1 DA-6 处理组 60. 00% 和
77. 78%。10 mg·L -1 DA-6 处理组的艾纳香叶片中 l-
龙脑绝对含量最高,显著高于其他处理组。
表 4 DA-6 对艾纳香叶片中 l-龙脑相对含量和
绝对含量的影响
不同处理组
l-龙脑含量
**相对含量(%) **绝对含量 / g
1 mg·L -1 DA-6 0. 14 ± 0. 02 ab 0. 06 ± 0. 006 b
10 mg·L -1 DA-6 0. 10 ± 0. 02 bc 0. 10 ± 0. 03 a
100 mg·L -1 DA-6 0. 09 ± 0. 03 c 0. 05 ± 0. 01 bc
CK 0. 16 ± 0. 01 a 0. 03 ± 0. 006 c
注:**表示在 0. 01 水平差异极显著,表中不同小写字母表示不同
处理间在 0. 05 水平差异显著。
3 讨论与结论
适当浓度的 DA-6 有助于冬季迟缓期艾纳香生
长:DA-6 是一种细胞分裂素类植物生长素,它可以
通过提高植物叶片中叶绿素的含量,进而提高植物
的光合速率,促进叶片生长。研究表明,低浓度
DA-6 可以显著促进秋季草莓[15]、菠菜[16]、黄灯笼
辣椒[17]、野大麦[18]等叶片生长,提高叶片的生物
量。周天等[19]研究发现,10 mg·L -1 DA-6 处理组可
以显著提高羊草幼苗的生物量,与对照组相比显著
增加了 64. 0%。何元农等[20]研究发现 1 ~ 2 月是艾
纳香生长迟缓期,3 月为生长恢复期。本研究在海
南冬季即艾纳香生长迟缓期进行 DA-6 对艾纳香的肥
效研究。未进行任何处理的 CK 组,艾纳香生长缓
慢,甚至停止生长。施加不同浓度的 DA-6 可以显著
促进艾纳香生长,提高生长指标和叶干重,其中
10 mg·L -1 DA-6 处理组作用的效果最明显。因此,
在海南冬季,艾纳香生长的迟缓期施加10 mg·L -1
DA-6 有利于促进艾纳香植物生长和生物量的积累。
DA-6 抑制了冬季迟缓期艾纳香叶片中总黄酮和
l-龙脑的相对含量,然而,增加了其绝对含量:本研
究发现在冬季艾纳香生长的迟缓期,施加 DA-6 抑制
了艾纳香叶片中总黄酮和 l-龙脑相对含量的积累。
其中 100 mg·L -1 DA-6 处理组显著抑制了叶片中总
黄酮和 l-龙脑相对含量,CK 处理下相对含量最高,
显著高于 100 mg·L -1 DA-6 处理组 77. 78% 和
96. 49%。这主要可能由于总黄酮和 l-龙脑是次生代
谢产物,其积累代谢是一个持续而动态变化的过程,
而在良好的环境条件下,植物生长的越快,其次生
代谢产物数量越少[21],并且次生代谢产物的积累也
受到季节的影响[22],这一结果说明在海南冬季艾纳
香生长迟缓期,总黄酮和 l-龙脑的积累比较缓慢,
外源施加植物激素会抑制其积累过程,导致其积累
量的降低。然而,不同浓度的 DA-6 均显著提高了艾
纳香叶片中总黄酮和 l-龙脑的绝对含量。这说明在
本实验的处理阶段,艾纳香的初生代谢进程较快,
受 DA-6 的影响大,效果远超过对次生代谢过程的影
响。本研究为后续进行艾纳香专用肥的研究提供了
数据支持和理论依据。
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(收稿日期 2015-01-26
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(收稿日期 2015-01-08)
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