全 文 ：疏;14周预防组 、治疗组以水变性肝细胞着色显著 , 肝硬化细胞
着色深度强于肝癌细胞;14周模型组肝硬化细胞着色与肝癌细
胞着色相似;18周治疗组肝癌细胞与肝硬化细胞着色相似 , 强度
弱。 18周模型组肝硬化与肝癌细胞着色相似 , 较强。说明虎眼
万年青皂苷具有抑制肝细胞异常增生作用。肝癌变过程中以 12
周 Ki67LI最高 ,说明此阶段肝细胞增生活跃 ,而虎眼万年青总皂
苷干预此阶段的肝细胞增生。至 14周及 18周模型组 Ki67LI逐
渐降低 , 与 12周模型组比较有统计学意义。虎眼万年青总皂苷
干预的 14周及 18周 Ki67 LI与相应的模型组间统计学无显著性
差异。是否能说明肝细胞活跃增生主要发生在肝损伤上硬变期 ,
且进一步说明虎眼万年青总皂苷干预肝细胞异常活跃增生。
多血供的肝癌结节 VEGF及其受体表达较强 , 肿瘤的生长 ,
局部浸润 , 远处转移与 VEGF及其受体密切相关 , VEGF首先来
源于旁分泌 , 在后期肿瘤自分泌是 VEGF高表达的重要来源 ,这
可能是肝癌阻断血供后 ,癌灶能存活 , 复发和转移的重要原因之
一 [ 5] 。 Kannoetal[ 6]发现 VEGF受体 -1(Flt-1)作用是促进血
管内皮细胞的迁移.Flt-1基因缺陷的小鼠则显示血管发育的
无序紊乱 , 显示 Flt-1在胚胎血管发育中的调节作用.Flt-1通
过一种拮抗 VEGF信号的可溶形式对血管生成起着调节作用 ,
以确保血管生成期间的正确萌芽 , Flt-1对血管的萌生和生长
有正向调节作用 [ 7] 。
本研究中我们发现 12周模型组水变性细胞或增生结节细胞
着色;12周预防组汇管区肝细胞着色较明显;14周预防组 、治疗
组肝硬化细胞灶状着色;14周模型组变性细胞 、汇管区细胞着色
强;18周肝癌治疗组着色弱;18周模型组肝癌细胞着色。说明虎
眼万年青皂苷具有抑制血管增生 ,具体着色细胞规律 ,待进一步
研究。诱癌 14周模型组 Flt-1 LI表达最高 , 虎眼万年青总皂苷
作用的 14周预防组 、治疗组 Flt-1 LI降低 , 且与模型组有统计
学意义。说明肝癌诱发过程中以促进期(14周)Flt-1表达较
高 , 虎眼万年青总皂苷在此期干预 Flt-1表达 , 防止肝癌的进一
步发展。模型组 12周 , 18周 LI相对低下 ,与 14周模型组比较有
统计学意义。是否能说明促进血管内皮细胞的迁移主要发生在
肝癌变期(14周)且进一步说明虎眼万年青总皂苷具有干预血管
内皮细胞迁移的作用。
虎眼万年青总皂苷对二乙基亚硝胺诱发大鼠肝癌过程中
Ki67、血管内皮生长因子受体(Flt-1)在肝脏中的表达影响 , 是
否与虎眼万年青皂苷(OSW-1)具有促进肿瘤细胞凋亡 [ 8]作用
相关 , 有待进一步深入研究。
参考文献:
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收稿日期:2009-02-05;　修订日期:2009-07-30
修订日期:广西自然科学基金项目(No.0575023)
作者简介:周吴萍(1979-),女(仫佬族),广西宜州人 ,现任广西工学院讲师 ,硕士学位 ,主要从事中药成分分析及质量研究工作.
＊通讯作者简介:李军生(1963-),男(汉族), 广西临桂人 ,现任广西工学院教授 ,博士学位 ,主要从事生物分子的结构与功能研究工作.
不同产地一点红总生物碱的提取与分析
周吴萍 ,陈晓伟 ,韦媛媛 ,李军生＊
(广西工学院 ,广西 柳州　545006)
摘要:目的 通过测定不同产地一点红中总生物碱含量 , 建立一种以总生物碱含量变化为基础的一点红质量测定方法。
方法 利用单因素法考察最佳提取条件 , 采用紫外 -可见分光光度法 ,以苦参碱为对照品 ,于 414nm波长处测定总生物碱
含量。结果 各产地样品的总生物碱含量在 0.441% ～ 0.756%之间 , 贵州贵阳的一点红总生物碱含量较高。结论 用所
建立的方法检测一点红药材质量 ,重复性好 , 准确度高。
关键词:一点红;　总生物碱;　质量测定方法
中图分类号:R284.2　　文献标识码:A　　文章编号:1008-0805(2009)12-3061-02
Extraction and AnalysisofTotalAlkaloidsContentsin Emiliasonchifolia from
DifferentRegions
ZHOUWu-ping,CHENXiao-wei,WEIYuan-yuan, LIJun-sheng＊
(DepartmentofBiologicalandChemicalEngineering, GuangxiUniversityofTechnology, Liuzhou, Guangxi,
545006, China)
Abstract:ObjectiveToestablishatotalalkaloids-basedmethodfordeterminingthequalityoftheEmiliasonchifolia.Meth-
odsTheoptimumextractingconditionwassetupbysingle-factormethod, andthetotalalkaloidsweredeterminedbyUV-visi-
blespectrophotometryunder414 nmusingmatrineasacontrol.ResultsThetotalalkaloidscontentsinthesamplesfromdifferent
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regionswere0.441 ～ 0.756%.TheresultsshowedthetotalalkaloidscontentinthesamplewhichcolectedfromGuiyangof
Guizhouprovincewasthehighest.Conclusion Themethodhasgoodduplicationandhighexactitudeforqualitydeterminationof
Emiliasonchifolia.
Keywords:Emiliasonchifolia;　Totalalkaloids;　Quality-determinationmethod
　　一点红 EmiliasonehifoliaDC.,又名羊蹄草 、红背叶 、叶下红 、
红背果等 , 菊科一点红属一年生或多年生草本 , 分布于我国华南 、
华中和西南等地。一点红性味凉 ,具清热解毒 、活血散淤之功效 ,
临床上常用于治疗上呼吸道感染 、口腔溃疡 、肺炎 、乳腺炎 、疖肿
疮疡 、皮肤湿疹等 [ 1] ,是广西花红药业股份有限公司生产的妇科
临床常用药花红片的主要原料药 [ 2] 。一点红在印度喀拉拉邦是
用于治疗炎症 、蚊虫叮咬 、结膜炎 、风湿病及创伤等的一种植物
药。已报道该植物地上部分含有吡咯双烷类生物碱和黄酮类化
合物 , 并且发现一点红的抗氧化和抗炎作用 [ 3 ～ 5] 。一点红还含有
植物甾醇 、脂肪酸等化学成分。目前对于一点红总黄酮成分已有
相关研究报道 [ 5 ～9] 。一点红总生物碱的研究还比较缺乏 , 对一点
红的鉴定和质量检测也只通过经验和外观品质进行简单的验证 ,
而其生物碱类物质也有抗炎抗菌药理功效 [ 10] 。为了加强原药材
质量监控 , 以苦参碱为对照品 , 总生物碱为考察指标 , 通过测定 6
个产地一点红总生物碱含量 ,以期建立一种以总生物碱含量变化
为基础的一点红质量测定方法。
1　材料与仪器
UV2100型紫外可见分光光度计(尤尼柯仪器有限公司);
AL104型电子天平(梅特勒 -托利多仪器有限公司);B2200S2T
型超声波发声仪(必能信上海有限公司);苦参碱对照品(中国药
品生物制品检定所);所用试剂均为分析纯 。
2 　方法与结果
2.1　对照品溶液制备 精密称取苦参碱对照品 4.2 mg, 加氯仿
定容至 100 ml,即得浓度为 42 μg/ml苦参碱对照品储备液。
2.2　显色剂的配制 准确称取溴麝香草酚蓝 62.5 mg, 置 500ml
量瓶中 , 加配置好的 pH=7.6磷酸二氢钾缓冲溶液至刻度 , 摇匀
即得。
2.3　 波长的选择 分别取苦参碱对照品液 、一点红总生物碱样
品液适量 , 加入溴麝香草酚蓝显色剂 10 ml,密塞 , 剧烈振摇 2min
提取 , 静置 2h,分取氯仿层。以未加样液的氯仿显色层作为参比
在 400 ～ 800 nm范围内进行光谱扫描 , 结果苦参碱对照品液和一
点红样品液均在 414 nm波长处有最大吸收 , 故测定时选用此
波长。
2.4　 线性考察 精密吸取苦参碱对照品储备液 0.0, 0.5, 1.0,
2.0, 3.0, 4.0, 5.0, 6.0, 7.0 ml,分别置 10ml容量瓶中 , 加氯仿至
刻度 , 按照上述条件显色 , 以第 1管未加苦参碱的氯仿层作空白
对照 , 在 414 nm处测吸光度。以苦参碱对照品浓度为横坐标 ,吸
光度为纵坐标 , 绘制标准曲线 , 结果苦参碱在 0.002 1 ～ 0.029 4
mg/ml范围内浓度与吸光度呈良好的线性关系。得到回归方程
为 Y=20.086X+0.135 6, R2 =0.9921(n=8)。
2.5　 提取条件的选择
2.5.1　不同提取方式的考察 取同一批一点红药材粉末 4份 ,
每份约 2 g, 精密称定 ,加浓氨水 10滴 , 精密加入氯仿 60 ml,分别
用索氏提取法 、冷浸法 、超声提取法 、回流提取法提取 , 比较提取
效果 , 结果超声提取法操作简单 ,提取率高 ,所用提取时间可相对
较短。结果见表 1。
表 1　不同提取方法的对比
提取方法 样品液吸光度
索氏提取法 0.473
冷浸提取法 0.411
超声提取法 0.612
回流提取法 0.144
2.5.2　提取时间的确定 称取一点红药材粗粉 3份 , 每份约 0.5
g, 精密称定 ,置 50ml具塞锥形瓶 ,加入 4滴浓氨水 , 精密加入氯
仿 50ml。分别超声提取 15, 30, 45, 60 min, 冷却 , 补足失重 , 滤
过 , 取续滤液 1.00ml用氯仿定容至 10ml, 样液备用。取 5.00ml
样液加入 10ml显色剂 ,密塞 , 振摇 2min,静置 2 h,取氯仿层 , 以
5 ml未加样的氯仿做空白参比 , 在 414 nm处测吸光度值。结果
见表 2, 超声提取 30 min提取量较高。
表 2　不同超声提取时间的对比
超声时间 t/min 样品液吸光度
15 0.339
30 0.494
45 0.479
60 0.461
2.6　精密度实验 取苦参碱对照品溶液 , 按显色条件显色后 , 于
414 nm处测其吸光度 ,连续测定 , 吸光度的 RSD为 0.125%(n=
6), 结果显示仪器精密度良好。
2.7　稳定性实验 取供试品溶液显色后于 0, 1, 2, 3, 4, 5 h进行
吸光度测定 ,供试品溶液吸光度的 RSD为 0.537%(n=6)。结果
显示样品溶液显色后在 5h内测定稳定。
2.8　重复性实验 取同一批号一点红 6份 , 精密称定 ,按照样品
测定项下制备供试品液 , 进行测定 , 测得吸光度 RSD为 1.176%
(n=6), 结果说明方法重复性良好。
2.9　加样回收率实验 取同一批已知含量的一点红全草粗粉 6
份 , 分别精密加入苦参碱对照品液适量 , 混匀蒸干 ,按照样品测定
项下操作 , 测定含量 , 结果平均加样回收率为 99.0%, RSD=
1.49%(n=6)。结果见表 3。
表 3　加样回收率
样号 样品原含量 m/mg
加入量
m/mg
测得量
m/mg
回收率
(%)
平均回收率
(%)
RSD
(%)
1 1.84 1.47 3.33 101.4
2 1.85 1.47 3.29 98.0
3 1.83 1.83 3.66 100.0 99.0 1.49
4 1.84 1.83 3.64 98.4
5 1.85 2.20 3.99 97.3
6 1.83 2.20 4.01 99.1
2.10　样品测定 取 6个不同产地的一点红全草粗粉约 0.8 g, 置
具塞锥形瓶中 , 加入浓氨水 4滴 , 精密加入氯仿 40 ml, 超声提取
30 min, 冷却 ,补足失重 ,滤过 , 精密吸取续滤液 1 ml用氯仿定容
至 10ml备用。取 5 ml样液至分液漏斗 ,加入溴麝香草酚蓝显色
剂 10ml, 密塞 ,剧烈振摇 2 min提取 ,静置 2 h, 分取氯仿层 ,以未
加样液的氯仿层为空白 , 在 414 nm波长处测吸光度。结果一点
红总生物碱含量在 0.441% ～ 0.756%, 不同产地的一点红中总
生物碱含量累积存在着一定差异 ,贵州贵阳的一点红总生物碱含
量最高 ,广东两产地的次之 , 广西 3个产地的一点红总生物碱含
量相对较低。结果见表 4。
表 4　不同产地样品测定
样品产地 取样量 m/g 样品总生物碱含量 C/mg· g-1
广西南宁 0.810 4.505
广西柳州 0.809 4.411
广西贵港 0.808 4.533
广东佛山 0.811 6.082
广东韶关 0.810 5.984
贵州贵阳 0.811 7.558
3 　讨论
根据查阅文献 , 未见有相关一点红总生物碱含量测定的报
道 , 本实验利用生物碱显色后进行光谱扫描 ,寻找到苦参碱为合
适的对照品 , 经显色后与总生物碱样品液在 414 nm波长处均有
较大吸收。故以苦参碱为总生物碱含量考察的对照品 , 414 nm
为检测波长。
实验采用超声提取技术 ,具有能耗低 、效率高 、不破坏有效成
分的特点 ,利用超声波产生的强烈振动 、高加速度 、空化效应 、搅
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时珍国医国药 2009年第 20卷第 12期 LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH 2009VOL.20NO.12
拌作用等 , 加速植物材料中的有效成分进入溶剂 , 从而增加有效
成分的提取率 , 缩短提取时间 , 并且避免回流提取中高温对提取
成分的影响。实验曾试用乙醇 、丙酮 、醋酸乙酯 、甲苯 、氯仿作为
提取溶剂 , 发现氯仿碱提法提取效果较合适较好。
一点红资源丰富 ,是我国南方部分地区人们喜爱的野菜或清
凉解暑的凉菜 [ 11] ,也是我国传统中药之一 , 具有广泛的开发和利
用价值。实验以苦参碱为对照品 , 通过检测不同产地一点红生物
碱含量 , 建立了适合一点红药草质量检测的方法 , 方法准确可靠 ,
结果满意。从各产地采集的样品总生物碱含量来看 , 不同产地 、
不同的生长环境 、温度 、湿度等多种因素对总生物碱的含量影响
很大。提示我们是否可以选择最适宜生长条件的地域建立药材
的 GAP生产基地 , 进行大规模规范化的栽培和生产 , 提高药材内
在质量的稳定性 , 保证临床用药安全性和有效性。
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收稿日期:2008-08-23;　修订日期:2009-07-30
基金项目:甘肃省科技攻关计划项目(No.2GS064-A43-020-22);
甘肃省兰州市科技局计划项目(No.06-2-87)
作者简介:梁玉杰(1962-),男(汉族),甘肃兰州人 ,现任甘肃中医学院副
教授 , 学士学位 , 主要从事中医学基础 , 中西医结合防治脾胃病的研究
工作.
敦煌大宝胶囊对肾阳虚小鼠抗应激作用影响的研究
梁玉杰 1 ,段永强1 ,成映霞 1 ,朱立鸣 1 ,程　容1 ,张立青 2
(1.甘肃中医学院 ,甘肃兰州　730000;　2.甘肃省兰州市七里河区人民医院　730050)
摘要:目的 研究敦煌大宝胶囊对肾阳虚小鼠抗应激作用的影响。方法 用氢化可的松给小鼠皮下注射 , 造成肾阳虚动
物模型 , 观察敦煌大宝胶囊对肾阳虚小鼠体重 、负重游泳时间 、常压耐缺氧能力 、负重游泳后肝糖原和血清乳酸含量的影
响。结果 与模型组比较 ,敦煌大宝胶囊能明显增加肾阳虚小鼠体重 ,显著延长负重游泳时间和常压耐缺氧生存时间 , 提
高负重游泳后肝糖原含量 ,降低运动后血清乳酸含量。结论 与模型组比较 , 敦煌大宝胶囊能明显增加肾阳虚小鼠体重 ,
显著延长负重游泳时间和常压耐缺氧生存时间 ,提高负重游泳后肝糖原含量 ,降低运动后血清乳酸含量。
关键词:肾阳虚证;　抗应激;　敦煌大宝胶囊
中图分类号:R285.5　　文献标识码:A　　文章编号:1008-0805(2009)12-3063-02
StudyontheAnti-stressEffectofDHDBontheMicewithKidney-YangDeficiency
LIANGYu-jie1 , DUANYong-qiang1 ,CHENGYing-xia1 , ZHULi-ming1 ,CHENGRong1 ,ZHANGLi-qing2
(1.GansuColegeofTraditionalChineseMedicine, Lanzhou, 730000, China;2.ThePeoplesHospitalofQilihe
District, Lanzhou, 730050, China)
Abstract:ObjectiveToobserveanti-stresseffectofDHDBonthemicewithkidney-yangasthenia.MethodsThemodel
micewithdeficiencyofkidney-yangwasinducedbysubcutaneouslyinjectinghydrocortisone.TheefectsofDHDBonthesetar-
gets, referingtothechangesofbodyweight, theloadedswimmingtime, survivaltimeunderanoxia, levelofglycogenandlactic
acid, wereobserved.ResultsComparedwithmodelgroup, DHDBcouldincreasethebodyweight, prolongtheloadedswimming
time, survivaltimeunderanoxiaandlevelofglycogen(P<0.05, P<0.05), alsodecreasethecontentoflacticacidobviously
(P<0.05, P<0.05).Conclusion DHDBcanimproveanti-stresseffectonthemicewithkidney-yangasthenia.
Keywords:SyndromeofKidney-YangDeficiency;　Anti-stress;　DunhuangDabaoCapsule(DHDB)
　　敦煌大宝胶囊(DunhuangDabaoCapsule, DHDB)由熟地 、黄
芪 、当归 、茯苓 、大黄等组成 ,具有强肾填精 、健脾益气 、涤痰祛瘀 、
安和五脏之功效。该制剂经临床应用显示能够有效防治各种虚
劳病症。为进一步探讨该药的药理作用及机制 ,本研究通过小鼠
负重游泳实验以及测定小鼠运动后肝糖原和血乳酸水平的变化 ,
探讨 DHDB的抗应激作用。
1 　材料与仪器
1.1　动物 采用 SPF级昆明种小鼠 , 雌雄各半 ,体质量(20±1)
g, 由甘肃中医学院医学实验中心提供 [ SPF级动物合格证号:
SCXK(甘)2004-0006-0000201;SPF级实验设施合格证:SYXK
(甘)2004-006-000092] 。
1.2 　药品试剂 敦煌大宝胶囊 (DHDB, 院内制剂 , 批号:
040925);桂附地黄丸(阳性对照组 ,兰州佛慈制药厂生产 , 批号:
20040925)。乳酸(LA)测试盒(南京建成生物工程研究所 , 批号:
20050123);肝糖原测试盒 (南京建成生物工程研究所 , 批号:
20050123)。
1.3　仪器 游泳箱(36cm×25cm×30cm);快速混匀器(规格型
号:XK96-A);数显恒温水浴锅(规格型号:HH-4,郑州杜甫仪
器厂);离心机(规格型号:D-37520 ,德国);数显电子分析天平
(规格型号:FA2004N)。
2　方法
2.1 　动物分组给药及模型的建立 受试动物按体重编号 , 用随
机数字表法 [ 1]分为空白对照组 , 模型组 , DHDB大剂量组 , DHDB
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LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH 2009VOL.20NO.12 时珍国医国药 2009年第 20卷第 12期