全 文 ：书第３３卷第９期
Ｖｏｌ．３３，Ｎｏ．９
草　业　科　学
ＰＲＡＴＡＣＵＬＴＵＲＡＬ　ＳＣＩＥＮＣＥ
１６５１－１６５７
９／２０１６
ｈｔｔｐ：??ｃｙｋｘ．ｌｚｕ．ｅｄｕ．ｃｎ
ＤＯＩ：１０．１１８２９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００１－０６２９．２０１５－０５８８
张蕊思，安沙舟，卡斯达尔·努尔旦别克，施宠．高温处理对披碱草种子内生真菌的杀灭效果及发芽活力的影响．草业科学，２０１６，
３３（９）：１６５１－１６５７．
Ｚｈａｎｇ　Ｒ　Ｓ，Ａｎ　Ｓ　Ｚ，Ｋａｓｉｄａｅｒ·Ｎｕｅｒｄａｎｂｉｅｋｅ，Ｓｈｉ　Ｃ．Ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｈｉｇｈ　ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ　ｔｒｅａｔｍｅｎｔｓ　ｏｎ　ｖｉａｂｉｌｉｔｙ　ｏｆ　Ｅｐｉｃｈｌｏёｓｅｅｄｓ　ｏｆ　Ｅｌｙｍｕｓ
ｄａｈｕｒｉｃｕｓ．Ｐｒａｔａｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅ，２０１６，３３（９）：
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１６５１－１６５７．
前植物
生产层
高温处理对披碱草种子内生真菌的　　　
杀灭效果及发芽活力的影响　　　
张蕊思，安沙舟，卡斯达尔·努尔旦别克，施 宠
（新疆农业大学草业与环境科学学院 新疆草地资源与生态重点实验室，新疆 乌鲁木齐８３００５２）
摘要：为了寻求去除禾草内生真菌的方法，选用披碱草（Ｅｌｙｍｕｓ　ｄａｈｕｒｉｃｕｓ）为研究材料，以６０、７０和７５℃高温分别处
理披碱草种子５、１０、１５、２０、２５和３０ｄ，研究不同强度高温对内生真菌和宿主活力的影响。结果表明，７５℃处理２０ｄ能
快速有效杀灭披碱草种子的内生真菌，使种子带菌率从９３．１７％显著降到０（Ｐ＜０．０５），所有检测幼苗均不感染内生真
菌；同时，发芽率、发芽势、发芽指数、活力指数和幼苗鲜重分别显著提高３６．３７％、７３．９４％、５０．３８％、６３．３８％和７．
７９％，且在幼苗生长初期对芽和根的生长有促进作用，芽长、根长分别增加０．５４％和１４．４３％。故高温处理是一种理想
的去除披碱草种子内生真菌的方法，同时这一方法也为探索获取不感染内生真菌其它禾草提供了理论依据。
关键词：内生真菌；高温处理；披碱草
中图分类号：Ｓ３３０．３；Ｓ４３２．４＋３；Ｑ９４５．３５　　　文献标志码：Ａ　　　文章编号：１００１－０６２９（２０１６）９－１６５１－０７＊
Ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｈｉｇｈ　ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ　ｔｒｅａｔｍｅｎｔｓ　ｏｎ　ｖｉａｂｉｌｉｔｙ　ｏｆ
Ｅｐｉｃｈｌｏёｓｅｅｄｓ　ｏｆ　Ｅｌｙｍｕｓ　ｄａｈｕｒｉｃｕｓ
Ｚｈａｎｇ　Ｒｕｉ－ｓｉ，Ａｎ　Ｓｈａ－ｚｈｏｕ，Ｋａｓｉｄａｅｒ·Ｎｕｅｒｄａｎｂｉｅｋｅ，Ｓｈｉ　Ｃｈｏｎｇ
（Ｃｏｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｐｒａｔａｃｕｌｔｕｒａｌ　ａｎｄ　Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｘｉｎｊｉａｎｇ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｋｅｙ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　ｏｆ
Ｇｒａｓｓｌａｎｄ　Ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ　ａｎｄ　Ｅｃｏｌｏｇｙ　ｏｆ　Ｘｉｎｊｉａｎｇ，Ｕｒｕｍｑｉ，Ｕｒｕｍｑｉ　８３００５２，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｉｎ　ｔｈｅ　ｐｒｅｓｅｎｔ　ｓｔｕｄｙ，ｈｉｇｈ　ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ　ｔｒｅａｔｍｅｎｔｓ（６０，７０ａｎｄ　７５℃）ｗａｓ　ｅｍｐｌｏｙｅｄ　ｔｏ　ｃｏｎｓｔｒｕｃｔ
Ｅｐｉｃｈｌｏё－ｆｒｅｅ　ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ　ｏｆ　Ｅｌｙｍｕｓ　ｄａｈｕｒｉｃｕｓ．Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｉｎｄｉｃａｔｅｄ　ｔｈａｔ　ｈｉｇｈ　ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ　ｔｒｅａｔｍｅｎｔｓ　ｃａｎ　ｋｉｌ
Ｅｐｉｃｈｌｏёｅｎｄｏｐｈｙｔｅ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｓｅｅｄｓ．Ａｆｔｅｒ　７５℃ｆｏｒ　２０ｄａｙｓ　ｔｒｅａｔｍｅｎｔ，ｔｈｅ　Ｅｐｉｃｈｌｏёｅｎｄｏｐｈｙｔｅ　ｉｎｆｅｃｔｅｄ　ｒａｔｅｓ　ｓｉｇ－
ｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ　ｄｒｏｐｐｅｄ　ｆｒｏｍ　９３．１７％ｔｏ　０％ （Ｐ＜０．０１），ａｎｄ　ｔｈｅ　ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｒａｔｅ，ｇｅｒｍｉｎａｔｉｎｇ　ｐｏｔｅｎｔｉａｌ，ｇｅｒｍｉｎａ－
ｔｉｏｎ　ｉｎｄｅｘ，ｖｉｔａｌ　ｉｎｄｅｘ　ａｎｄ　ｓｅｅｄｉｎｇ　ｆｒｅｓｈ　ｗｅｉｇｈｔ　ｏｆ　Ｅ．ｄａｈｕｒｉｃｕｓ　ｉｎｃｒｅａｓｅｄ　ｂｙ　３６．３７％，７３．９４％，５０．３８％，
６３．３８％ａｎｄ　７．７９％，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ（Ｐ＜０．０５）．Ｍｅａｎｗｈｉｌｅ，ｈｉｇｈ　ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ　ｉｍｐｒｏｖｅｄ　ｈｙｐｏｃｏｔｙｌｓ　ａｎｄ　ｒａｄｉｃａｌ
ｇｒｏｗｔｈ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｈｙｐｏｃｏｔｙｌｓ　ａｎｄ　ｒａｄｉｃａｌ　ｌｅｎｇｔｈ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｔｒｅａｔｅｄ　ｓｅｅｄｌｉｎｇｓ　ｉｎｃｒｅａｓｅｄ　ｂｙ　０．５４％ａｎｄ　１４．４３％．Ｔｈｅｒｅ－
ｆｏｒｅ，ｈｉｇｈ　ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ　ｏｆ　７５ ℃ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ　ｗａｓ　ａｎ　ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ　ｗａｙ　ｔｏ　ｃｏｎｓｔｒｕｃｔ　Ｅｐｉｃｈｌｏё－ｆｒｅｅ　ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ　ｏｆ
Ｅ．ｄａｈｕｒｉｃｕｓ　ｗｈｉｃｈ　ｐｒｏｖｉｄｅｄ　ｓｏｍｅ　ａｃａｄｅｍｉｃ　ｂａｓｅｓ　ａｎｄ　ｒｅｆｅｒｅｎｃｅｓ　ｆｏｒ　ｅｓｔａｂｌｉｓｈｉｎｇ　Ｅｐｉｃｈｌｏё－ｆｒｅｅ　ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ　ｏｆ
ｇｒａｓｓ．
Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：Ｅｐｉｃｈｌｏё；ｈｉｇｈ　ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ　ｔｒｅａｔｍｅｎｔ；Ｅｌｙｍｕｓ　ｄａｈｕｒｉｃｕｓ
Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ　ａｕｔｈｏｒ：Ａｎ　Ｓｈａ－ｚｈｏｕ　Ｅ－ｍａｉｌ：ｘｊａｓｚ＠１２６．ｃｏｍ
＊ 收稿日期：２０１５－１０－２６　　接受日期：２０１６－０６－１３
基金项目：新疆农业大学草业科学国家重点学科博士研究生创新基金 （ＸＪＣＹＢ－２０１１－０１）；高等学校博士学科点专项科研基金
（２０１２６５０４１１０００１）；新疆自治区研究生教育创新计划科研创新项目（ＸＪＧＲＩ２０１５０９２）
第一作者：张蕊思（１９８９－），女，河南商丘人，在读硕士生，研究方向为草地资源与生态。Ｅ－ｍａｉｌ：７８７０５５９１４＠ｑｑ．ｃｏｍ
通信作者：安沙舟（１９５６－），陕西富平人，教授，博导，博士，研究方向为草地资源与生态。Ｅ－ｍａｉｌ：ｘｊａｓｚ＠１２６．ｃｏｍ
草　业　科　学 第３３卷
ｈｔｔｐ：／／ｃｙｋｘ．ｌｚｕ．ｅｄｕ．ｃｎ
　　禾草－内生真菌是指在禾草中度过全部或大部分
生命周期，而禾草不显示外部症状的一大类真菌［１］。
自然界中感染内生真菌的植物普遍存在，真菌和禾草
共同形成互惠互利的共生体。目前，国际学术界公认
内生真菌可以对宿主植物的生长产生正面影响［２］。禾
草内生真菌能提高宿主植物对营养物质的利用效率，
从而促进植物生长［３］。研究发现内生真菌（Ｅｐｉｃｈｌｏё）
可以促进多年生黑麦草（Ｌｏｌｉｕｍ　ｐｅｒｅｎｎｅ）［４］、布顿大
麦（Ｈｏｒｄｅｕｍ　ｂｏｇｄａｎｉｉ）［５］、圆柱披碱草（Ｅｌｙｍｕｓ　ｃｙ－
ｌｉｎｄｒｉｃｕｓ）［６］和醉马草（Ａｃｈｎａｔｈｅｒｕｍ　ｉｎｅｂｒｉａｎｓ）［７］的
生长。另外，内生真菌在禾草体内产生的生物碱，致使
采食带菌禾草的马、牛、羊、鹿等家畜产生中毒症状［８］。
披碱草（Ｅ．ｄａｈｕｒｉｃｕｓ）是禾本科披碱草属多年
生、疏丛型、旱中生禾草［９］。披碱草耐旱、耐寒、耐碱、
耐风沙，先后在河北、新疆、内蒙古、青海等省（区）的牧
场、草原试验站进行过栽培驯化工作，被认定为优质高
产的饲草。国外对披碱草内生真菌的研究主要是对加
拿大披碱草（Ｅ．ｃａｎａｄｅｎｓｉｓ）和佛吉尼亚披碱草（Ｅ．
ｖｉｒｇｉｎｃｕｓ）的带菌情况进行了调查［７］，在我国最早关于
内生真菌侵染披碱草的报道见于Ｎａｎ和Ｌｉ［６］，在检测
的３份披碱草样品中发现１份带菌，带菌率为１００％。
对披碱草所带Ｅｐｉｃｈｌｏё属内生真菌的生理生物学特
性以及共生体的生长、光合速率、生理特性［１０］和对水
分胁迫的响应亦作了较系统的研究［１１］。
为了阐明内生真菌对宿主植物的作用，首先必须
获得内生真菌感染和非感染的试验植物种群。目前去
除种子内生真菌的方法主要有杀真菌剂法［１２］、湿热
法［１３］两种方法，然而，杀真菌剂的使用存在着农药残
留、危害其它物种等一系列生态问题，且不能达到完全
去除内生真菌的效果；湿热法虽能有效降低宿主内生
真菌带菌率但也不能达到完全去除的效果，同时对宿
主植物活力也产生了影响［１３］。高温处理法［１４］被证实
是一种可以去除羽茅（Ａｃｈｎａｔｈｅｒｕｍ　ｓｉｂｉｒｉｃｕｍ）种子
内的内生真菌且对宿主植物无影响的方法，李夏等［１４］
研究发现，６０℃高温处理能有效杀灭羽茅种子中的内
生真菌，当处理时间达到３０ｄ时，所有检测幼苗均不
感染内生真菌。同时高温处理对种子发芽率、发芽势
和发芽指数均无显著影响，且在幼苗生长初期对根的
生长有促进作用。本研究在前人研究基础上采用６０、
７０和７５℃３个高温处理强度，通过比较不同处理时
间条件下宿主植物内生真菌带菌率及其种子萌发率和
活力指数，寻求既能完全有效去除宿主植物种子中内
生真菌的活力，同时又对种子本身活力无影响且对环
境友好的杀菌方法。
１　材料与方法
１．１　试验材料
试验材料为披碱草，于２０１４年８月在新疆沙湾县
鹿角湾（４３°５９′１３″Ｎ、８５°１０′２２″Ｅ）野外采集，经过镜检
以及室内培养后检测带菌率均在９３％以上，采集后存
放于冰箱中４℃保存。每次从中选取大小一致、籽粒
饱满、无破损的披碱草种子为研究对象。
１．２　试验设计
在实验室进行预实验时发现８０℃高温处理５ｄ
后披碱草种子已经完全不能发芽，故试验所采用的最
高处理温度为７５℃。试验共设置３个温度梯度（６０、
７０、７５℃）和６个时间梯度（５、１０、１５、２０、２５、３０ｄ），共
１８个处理，每个处理重复３次。将存放于冰箱中４℃
保存的未经高温处理的种子作为对照（ＣＫ）。
１．３　研究方法
１．３．１　种子处理方法　种子萌发和幼苗培养试验高
温源为 ＤＨＧ－９２４０Ａ 电热恒温鼓风干燥箱（共计３
台），额定电压２２０Ｖ－５０Ｈｚ，输出功率２　４７０Ｗ。研究
采取高温和时间结合的方式，将试验种子从冰箱取出
后均匀摆放在玻璃培养皿（直径为９ｃｍ）正中央，后置
于干燥箱中，温度过高可能影响种子的质量，可在进行
高温处理前将种子的含水量降低到４％以下［１５］。参照
宋顺华和郑晓鹰［１５］安全有效的阶梯式方法逐步将处
理温度从３５℃提高至目标温度，然后再进行阶梯式降
温，即：首先将温度调节至３５℃处理２４ｈ，再调节温度
至４５℃处理２４ｈ，后将温度调节至所需温度处理相应
天数，最后降低温度至５５℃处理２４ｈ后，将种子从干
燥箱中取出后置于４℃冰箱中保存，所有处理结束后
进行萌发试验。
１．３．２　种子发芽和幼苗培养试验　采用ＳＰ　Ｘ－３００Ｉ－
Ｇ型光照培养箱进行种子萌发。高温处理后及对照种
子均用５０％硫酸软化颖壳３０ｍｉｎ和次氯酸钠（有效
氯浓度２％）表面消毒１０～１５ｍｉｎ，且浸泡过夜后整齐
摆放于内置滤纸（提前用去离子水湿润）、直径９ｃｍ的
培养皿中，于２５℃培养箱中黑暗萌发，７ｄ后设置光
照／黑暗８ｈ／１６ｈ，进行培养。每天对试验种子的发芽
情况进行观察，并分别统计开始发芽时间和每天发芽
数，以胚根长度超过２ｍｍ视为发芽，连续４ｄ没有新
的发芽种子后计算最终发芽率［１６］。第１２天时对萌发
２５６１
第９期 张蕊思　等：高温处理对披碱草种子内生真菌的杀灭效果及发芽活力的影响
ｈｔｔｐ：／／ｃｙｋｘ．ｌｚｕ．ｅｄｕ．ｃｎ
生长指标统计后，将培养皿中的萌发种子转移到１８０
ｍｍ×１２５ｍｍ×１５０ｍｍ的塑料花盆中进行培养，每
天观察耗水状况并及时补加水、除杂草等。
１．３．３　种子带菌率的检测　达到预设温度处理后，对
种子先进行预处理［１７］，后进行消毒处理［１５］，之后每个
处理 随 机 选 取 ２０ 粒 种 子 等 距 离 置 于 含 有 １００
ｍｇ·Ｌ－１链霉素和１００ｍｇ·Ｌ－１氯霉素的马铃薯葡萄
糖琼脂培养基（ＡＢＰＤＡ培养基）上，每３个培养皿为
一个重复，每个处理３次重复，３０ｄ后统计菌落数并计
算带菌率。过程中用到漂洗对照、印记（迹）对照、环境
对照３种对照参照［１７］。
１．３．４　种子和幼苗带菌率的检测与验证　在种子发
芽结束后的第５０天之后所有的幼苗均长出新的分蘖，
对新生的分蘖逐株进行了镜检检测，镜检过程中若镜
检出一个分蘖带菌则认为此植株带菌；同理，镜检过程
中若未镜检出一个分蘖带菌则认为此植株不带菌。另
外，为验证种子带菌率为０的处理组植株确实不带菌，
我们还就对照组的幼苗和高温处理组幼苗的叶片和叶
鞘进行了内生真菌的分离培养，以确保验证检测结果
的准确性。叶片内生真菌的分离培养：取待检验新鲜
叶片自来水冲洗４次后放入２％的次氯酸钠溶液中震
荡５ｍｉｎ，然后至于超净工作中无菌水冲洗５次并切
成约１ｃｍ长的片段后进行内生真菌的分离工作，分离
方法同种子内生真菌分离方法。镜检使用赵晓静等的
光学显微镜法［１８］。
１．４　数据处理及计算方法
每天对试验种子的发芽情况进行观察，分别统计
开始发芽时间和每天发芽数，并计算发芽率、发芽势、
发芽指数和平均发芽天数等指标，披碱草种子的发芽
率（ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｒａｔｅ，ＧＲ）、发芽势（ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｐｏ－
ｔｅｎｔｉａｌ，ＧＰ）、发芽指数（ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｉｎｄｅｘ，ＧＩ）、活力
指数（ｖｉｔａｌ　ｉｎｄｅｘ，ＶＩ），按照以下公式［１９］计算：
发芽率＝最终正常发芽的种子粒数／供试种子粒
数×１００％；
发芽势＝在７ｄ内正常发芽的种子粒数／供试种
子粒数×１００％；
发芽指数（ＧＩ）＝∑（Ｇｔ／Ｄｔ）。
式中：Ｇｔ为在不同时间的发芽数；Ｄｔ为相应的发芽日数。
活力指数（ＶＩ）＝ＧＩ×Ｓ。
式中：Ｓ为１２ｄ内幼苗长度（ｍｍ），ＧＩ为发芽指数。
试验结束时，每重复随机选取１０株，用精度０．０１
ｍｍ的数显游标卡尺（日本 Ｍｉｔｕｔｏｙｏ，型号５００－１７３）
测量胚芽长、胚根长，用精度为万分之一分析天平称取
幼苗鲜重。
第３０天时记录每皿带菌种子数并拍照，根据如下
公式［２０］计算种子内生真菌带菌率：
带菌率＝（带菌种子数／检测种子总数）×１００％。
１．５　数据处理与统计分析
对所有数据利用Ｅｘｃｅｌ　２００７统计和整理，单因素
方差分析和多重比较利用ＳＰＳＳ　２０．０软件，并将结果
以平均值±标准误形式表示，最终结果采用 Ｅｘｃｅｌ
２００７制图。
２　结果与分析
２．１　高温处理对带菌率的影响
随着温度的升高和处理时间的延长，与对照相比，
内生真菌带菌率显著下降（Ｐ＜０．０５）（图１），高温处理
对内生真菌的抑制作用逐渐增强（图２）。带菌率随着
温度升高而显著下降的速度由快到慢为７５＞７０＞
６０℃；随着处理天数的延长，带菌率也明显降低，其
中，６０℃处理３０ｄ带菌率降低为１２．５％；７０℃处理
２０ｄ和７５℃处理１５ｄ后内生真菌带菌率分别降低到
３．５１％和２．７８％；之后分别在２５和２０ｄ时内生真菌
带菌率为０。
图１　不同处理温度下披碱草种子带菌率的变化
Ｆｉｇ．１　Ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｈｉｇｈ　ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ　ｐｒｅｔｒｅａｔｍｅｎｔ　ｏｎ　ｔｈｅ
Ｅｐｉｃｈｌｏёｃｏｎｔａｍｉｎａｔｉｏｎ　ｒａｔｅ　ｏｆ　Ｅ．ｄａｈｕｒｉｃｕｓ　ｓｅｅｄｓ
注：不同小写字母表示处理间差异显著（Ｐ＜０．０５）。图３同。
Ｎｏｔｅ：Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｌｏｗｅｒ　ｃａｓｅ　ｌｅｔｔｅｒ　ｉｎｄｉｃａｔｅ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ　ａｔ　０．０５
ｌｅｖｅｌ．Ｔｈｅ　ｓａｍｅ　ｉｎ　Ｆｉｇ．３．
２．２　高温处理对种子萌发的影响
与对照相比，高温处理显著降低了种子含水量
（Ｐ＜０．０５），６０℃时种子含水量为３．８２％～５．２５％，
各处理之间种子含水量无显著差异（Ｐ＞０．０５），但是
均显著低于对照（表１）；７０℃时种子含水量为２．９４％
～３．３１％，７５℃时种子含水量为２．２８％～３．５８％。但
７０和７５℃各处理时间之间无显著差异。
３５６１
草　业　科　学 第３３卷
ｈｔｔｐ：／／ｃｙｋｘ．ｌｚｕ．ｅｄｕ．ｃｎ
图２　７５℃高温处理２０ｄ下披碱草叶片中内生真菌带菌的变化
Ｆｉｇ．２　Ｔｈｅ　ｌｅａｆ　ｏｆ　Ｅｐｉｃｈｌｏёｏｆ　Ｅ．ｄａｈｕｒｉｃｕｓ　ｔｒｅａｔｅｄ　ｂｙ　ｈｉｇｈ　ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ　ａｔ　７５℃ｆｏｒ　２０ｄ
表１　高温处理对种子萌发的影响
Ｔａｂｌｅ　１　Ｔｈｅ　ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｈｉｇｈ　ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ　ｐｒｅｔｒｅａｔｍｅｎｔ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｅ．ｄａｈｕｒｉｃｕｓ　ｓｅｅｄｓ
处理
Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ
种子含水量
Ｓｅｅｄ　ｍｏｉｓｔｕｒｅ
ｃｏｎｔｅｎｔ／％
发芽率
Ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ
ｒａｔｅ／％
发芽势
Ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ
ｐｏｔｅｎｔｉａｌ／％
发芽指数
Ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ
ｉｎｄｅｘ
活力指数
Ｖｉｇｏｕｒ　ｉｎｄｅｘ
１０株幼苗鲜重
１０ｓｅｅｄｉｎｇ　ｆｒｅｓｈ
ｗｅｉｇｈｔ／ｇ
６０℃
５ｄ ５．２５±０．００１ｂ ９４．２３±０．３３ａｂｃｄ　６９．３９±０．１１ａｂ　３．７０±０．４９ｂｃｄｅ　０．０７６±０．０１１ｂｃｄｅ　０．２０６±０．００３ａｂ
１０ｄ ５．１５±０．００１ｂｃ　 ８５．２４±０．０７ｂｃｄｅｆ　６８．７３±０．０６ａｂ　３．１１±０．２０ｃｄｅ　０．０６７±０．００５ｃｄｅ　 ０．２１４±０．００８ａ
１５ｄ ４．５１±０．００２ｂｃｄ　 ９７．９２±０．０２ａｂ　 ８６．３４±０．０６ａ ３．７１±０．２９ｂｃｄｅ　０．０７２±０．００６ｂｃｄｅ　０．１９５±０．００９ａｂ
２０ｄ ４．０３±０．００４ｂｃｄｅ　９３．４４±０．０３ａｂｃｄ　６９．３３±０．０７ａｂ　４．０１±０．３３ｂｃｄ　０．０８３±０．００８ｂｃ　 ０．２０７±０．００４ａｂ
２５ｄ ４．４３±０．００１ｂｃｄ　 ９８．５５±０．０１ａ ７２．２９±０．０１ａｂ　３．５１±０．０９ｂｃｄｅ　０．０７５±０．００３ｂｃｄｅ　０．２１３±０．００３ａ
３０ｄ ３．８２±０．００２ｂｃｄｅ　９３．３３±０．０３ａｂｃｄ　８７．５０±０．０３ａ ３．８６±０．２０ｂｃｄ　０．０８２±０．００６ｂｃ　 ０．２１３±０．０１１ａ
７０℃
５ｄ ３．０４±０．００５ｄｅ　 ９７．５３±０．０１ａｂ　 ４９．３８±０．０４ｃ ３．７９±０．３６ｂｃｄ　０．０７０±０．００８ｃｄｅ　 ０．１８３±０．００７ｂｃ
１０ｄ ２．９４±０．００３ｄｅ　 ９７．９２±０．０１ａｂ　 ８０．８８±０．０１ａ ３．８６±０．４６ｂｃｄ　０．０７８±０．０１２ｂｃｄ　 ０．２００±０．００８ａｂ
１５ｄ ３．２３±０．００３ｄｅ　 ９４．０９±０．００ａｂｃｄ　８１．１９±０．０５ａ　 ３．４６±０．４６ｂｃｄｅ　０．０７１±０．００７ｃｄｅ　 ０．２０７±０．００７ａｂ
２０ｄ ３．３１±０．００４ｄｅ　 ９６．３１±０．００ａｂｃ　 ６８．７４±０．０８ａｂ　４．６１±０．２１ａｂ　 ０．０９９±０．００４ａｂ　 ０．２１４±０．００３ａ
２５ｄ ２．９５±０．００５ｄｅ　 ９７．６２±０．０１ａｂ　 ５４．７６±０．１６ｂｃ　４．３９±０．５７ａｂｃ　 ０．０８７±０．０１１ａｂｃ　 ０．１９８±０．００３ａｂ
３０ｄ ３．１７±０．００７ｄｅ　 ９０．３２±０．０５ａｂｃｄｅ　５３．７４±０．１１ｂｃ　４．１７±０．３９ａｂｃ　 ０．０７０±０．００６ｃｄｅ　 ０．１６８±０．００８ｃｄ
７５℃
５ｄ ２．５２±０．００３ｅ ９４．５１±０．０３ａｂｃｄ　７２．６９±０．１０ａｂ　３．８０±０．７７ｂｃｄ　０．０７７±０．０１６ｂｃｄ　 ０．２０２±０．００５ａｂ
１０ｄ ３．５８±０．００３ｂｃｄｅ　８２．４５±０．０９ｄｅｆ　 ９１．９１±０．０４ａ ４．１１±０．６０ａｂｃ　０．０８４±０．０１２ｂｃ　 ０．２０４±０．００８ａｂ
１５ｄ ３．４０±０．００５ｃｄｅ　 ９８．８９±０．０１ａ ８６．３２±０．０４ａ ５．２８±０．１６ａ ０．１１０±０．００３ａ ０．２０８±０．００４ａｂ
２０ｄ ２．９３±０．００２ｄｅ　 １００．００±０．００ａ ７４．２１±０．０４ａｂ　４．１４±０．２４ａｂｃ　０．０８４±０．００４ｂｃ　 ０．２０３±０．００５ａｂ
２５ｄ ２．４０±０．００４ｅ ８４．０２±０．０３ｃｄｅｆ　 ４．８４±０．０３ｄ ３．１１±０．２６ｃｄｅ　０．０４９±０．００５ｅｆ　 ０．１５９±０．０１３ｄ
３０ｄ ２．２８±０．００７ｅ ８０．００±０．０４６ｅｆ　 ０．００±０ｄ ２．４４±０．１５ｅ ０．０４１±０．００３ｆ ０．１６９±０．００１ｃｄ
ＣＫ　 ８．２４±０．００９ａ ７３．３３±０．３５ｆ ４２．６７±０．１２ｃ ２．７６±０．４１ｄｅ　 ０．０５１±０．００７ｄｅｆ　 ０．１８８±０．０１６ａｂｃ
注：不同小写字母表示差异显著（Ｐ＜０．０５）。
Ｎｏｔｅ：Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｌｏｗｅｒ　ｃａｓｅ　ｌｅｔｔｅｒｓ　ｉｎｄｉｃａｔｅ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ　ａｔ　０．０５ｌｅｖｅｌ．
　　高温处理提高了披碱草种子发芽率，促进了种子
萌发。６０℃时，随着处理天数的增加发芽率升高幅度
高低不齐，但与对照相比整体呈现显著上升趋势（Ｐ＜
０．０５）。７０和７５℃时，随着处理天数的增加发芽率呈
现先降低后升高再降低的有规律的变化趋势，分别在
处理１０和２０ｄ时发芽率达到最大值。２０ｄ时的发芽
率大小为７５＞７０＞６０℃，但３个温度之间无显著差异
（Ｐ＞０．０５）；当处理天数超过２５ｄ时，各温度的发芽率
会出现不同程度的下降趋势，下降幅度大小为：７５＞
７０＞６０℃，但处理时间为３０ｄ时，发芽率仍高于对照
（表２）。这表明，在一定的高温处理强度范围内，低温
长时或短时高温对发芽率有促进作用，随着处理强度
的加大这种促进作用逐渐减弱。
６０℃高温处理较对照显著（Ｐ＜０．０５）提高了种
子发芽势，６０℃各时间处理之间无显著差异（Ｐ＞
０．０５），随着处理天数的延长，发芽势整体呈现上升
变化趋势；７０和７５℃时，随着处理天数的增加发芽
势呈现先升高后降低的变化趋势：７０℃处理１５ｄ发
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第９期 张蕊思　等：高温处理对披碱草种子内生真菌的杀灭效果及发芽活力的影响
ｈｔｔｐ：／／ｃｙｋｘ．ｌｚｕ．ｅｄｕ．ｃｎ
芽势最高；７５℃处理１０ｄ发芽势上升且达到最大
值，但随着处理时间的延长，发芽势下降。幼苗鲜重
也呈现类似的变化。
６０℃时各处理发芽指数与对照无显著差异（Ｐ＞
０．０５）。７０℃时处理时间短于２０ｄ时与对照无显著
差异，超过２０ｄ时则显著高于对照（Ｐ＜０．０５），此后，
发芽指数随着处理时间的延长逐渐降低。７５℃时，随
着处理天数的增加发芽指数呈现先升高后降低的变化
趋势：处理１５ｄ时发芽指数显著增加且达到最大值
（Ｐ＜０．０５）。活力指数也呈现类似的变化。
２．３　高温处理对幼苗生长的影响
高温处理后芽长的变化（图３）：６０℃时芽长随处
理天数的延长逐渐增长；７０和７５℃时，芽长随着处理
时间的延长均出现先升高后降低的变化，处理１５ｄ时
芽长达到最大值。高温可以促进芽生长，这种促进作用
的程度大小随温度的变化为６０＞７０＞７５℃。
高温处理后根长的变化（图３）：６０℃时各处理的
根长与对照相比都有所增加，无明显规律。７０℃时根
长随着处理时间的延长呈现先增加后降低的变化趋
势，处理１５ｄ时根长达到最大值。７５℃时根长随着
处理天数的延长也呈现先增加后降低的变化趋势，７０
℃处理５ｄ时根长达到最大值。
图３　不同高温处理强度下的幼苗芽长和根长
Ｆｉｇ．３　Ｔｈｅ　ｈｙｐｏｃｏｔｙｌｓ　ｌｅｎｇｔｈ　ａｎｄ　ｒａｄｉｃａｌ　ｌｅｎｇｔｈ　ｏｆ　Ｅ．ｄａｈｕｒｉｃｕｓ　ｓｅｅｄｌｉｎｇｓ　ｔｒｅａｔｅｄ　ｂｙ
ｈｉｇｈ　ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ　ａｔ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｔｉｍｅ
３　讨论
６０℃时种子含水量为３．８２％～５．２５％，发芽率均
高于对照，表明此区间种子含水量促进种子萌发。
７０℃时种子含水量为２．９４％～３．３１％，７５℃时种子
含水量为２．２８％～３．５８％。７０℃处理１０ｄ发芽率显
著高于对照（Ｐ＜０．０５），２０ｄ发芽率达到最大值，２５
和３０ｄ时发芽率相比最大值有所下降但仍显著高于
对照；７５℃处理１０ｄ发芽率显著高于对照（Ｐ＜０．
０５），２０ｄ发芽率达到最大值，３０ｄ时发芽率有所下降
但仍略高于对照（Ｐ＞０．０５），表明此区间种子含水量
对发芽率无抑制作用。
本研究中６０℃高温处理在所有处理时间内和７０
℃在处理时间≤２５ｄ和７５℃在处理时间≤２０ｄ对披
碱草种子的发芽率、发芽势、发芽指数和活力指数以及
生物量均无影响且能提高发芽参数，说明适当的高温
处理可以促进种子萌发，这与Ｄａｙａｍｂａ等［２１］发现热
激对禾本科物种的发芽参数无负影响的结论是一致
的。本研究发现，６０℃处理时间≤３０ｄ、７０和７５℃处
理时间≤２０ｄ对披碱草种子根长和芽长无影响且能
促进芽长和根长，说明适当高温处理可以起到促进生
长的作用，这与张百俊等［２２］对西葫芦（Ｃｕｃｕｒｂｉｔａ　ｐｅ－
ｐｏ）种子进行不同温度和时间的干热处理时发现的高
温处理能提高种子的发芽势并促进幼苗生长的结论是
一致的。综合高温处理对披碱草种子活力影响来看，
适当高温处理可以促进披碱草种子的萌发和幼苗的生
长，这与李夏等［１４］发现６０℃高温处理羽茅种子对种
子发芽率、发芽势和发芽指数均无显著影响且在幼苗
生长初期对根的生长有促进作用的结论是一致的。
大量研究逐渐表明，环境条件对内生真菌的影响
要大于对宿主的影响。不同储藏条件下，温度和种子
含水量的控制对保持黑麦草（Ｌｏｌｉｕｍ　ｐｅｒｅｎｎｅ）内生真
菌的活力都是十分重要的，内生真菌比种子对高温更
敏感［２３］。在较低温度条件下内生真菌和种子的活力
都较高，而在高温高湿条件下内生真菌和植物种子活
力下降都很快，但对内生真菌的影响更大［２４］。本研究
中内生真菌的带菌率随着处理天数的延长或处理温度
的增加而不断显著降低（Ｐ＜０．０５），７５℃处理２０ｄ时
带菌率也已显著下降到０，所有检测幼苗以及分蘖均
为无菌，而且对种子的发芽活力及生长均无影响，这说
５５６１
草　业　科　学 第３３卷
ｈｔｔｐ：／／ｃｙｋｘ．ｌｚｕ．ｅｄｕ．ｃｎ
明适当高温处理是可以实现完全去除种子内的内生真
菌而又不影响种子活力的目的。这与李夏等［１４］研究
发现６０℃高温处理羽茅种子３０ｄ能有效杀灭种子内
的内生真菌的结论是相似的，本研究中６０℃处理３０ｄ
能有效降低但并不能完全去除披碱草种子内的内生真
菌，这可能与种子自身特性有关。董晓飞等［２５］的研究
也表明，干热处理既可在一定程度上杀灭表面菌又不
影响种子的生活力。目前，国内去除禾草内生真菌的
方法总结起来有杀菌剂法、水浴湿热法和高温干热法，
姚祥等［２６］研究甲基托布津和苯醚甲环唑两种内吸性
杀菌剂对中华羊茅（Ｆｅｓｔｕｃａ　ｓｉｎｅｎｓｉｓ）种传内生真菌的
影响时发现，甲基托布津稀释３００～５００倍浸泡种子８
ｈ为剔除中华羊茅种传内生真菌的最佳方法；张金
锋［１３］研究结果表明，垂穗披碱草（Ｅ．ｎｕｔａｎｓ）种子６０
℃水浴２０ｍｉｎ处理杀灭内生真菌效果较好，但由于其
对发芽率的影响及种子活力的影响，该方法适用于种
子量丰富的情况下。虽然前人也曾用高温干热法对种
子内生真菌进行过去除试验，但试验中所采用温度过
于单一，为了弥补这一缺点，本研究采用６０、７０和７５
℃３个温度进行５、１０、１５、２０、２５、３０ｄ的持续高温时
间，结果表明，７５℃处理２０ｄ能有效完全杀灭披碱草
种子内生真菌而又不影响种子活力。
４　结论
本研究发现，７５℃处理２０ｄ能快速有效杀灭披
碱草种子内的内生真菌，使带菌率降为０，所有７５℃
处理２０ｄ的幼苗检测均为无菌，适当高温处理适当时
间可以促进种子的萌发活力。所以，高温处理是一种
有效杀灭披碱草种子内生真菌的方法，同时这一方法
也为探索获取不感染内生真菌禾草提供了理论依据。
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第９期 张蕊思　等：高温处理对披碱草种子内生真菌的杀灭效果及发芽活力的影响
ｈｔｔｐ：／／ｃｙｋｘ．ｌｚｕ．ｅｄｕ．ｃｎ
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ｔｕｒｅ　ｃｏｎｔｅｎｔｓ　ａｎｄ　ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅｓ．Ｎｅｗ　Ｚｅａｌａｎｄ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ，１９８６，１４（３）：２９７－３００．
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（责任编辑　苟燕妮）
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