全 文 ：三种鼠尾草注射液对离体大鼠心肌缺血
再灌注损伤的保护作用
张荣平1 ,李惠兰2 ,郑春兰2 ,秦 剑2
(1.昆明医学院药学院植物化学教研室;2.昆明医学院药理教研室 ,昆明 650031)
摘要:目的 研究云南产鼠尾草属药物滇丹参 、甘西鼠尾 、褐毛甘西鼠尾对心肌缺血再灌注损伤的保护作用 ,并与丹参进
行对比。方法 采用 Langendorff离体心脏灌流法 , 全心停灌后再灌流造成心肌缺血再灌注模型 ,通过动脉套管侧管给药。测
定再灌注 30min 后 ,灌流液中 CK、LDH 、SOD、GSH-Px和MDA 含量;同时测定离体心脏冠脉流量 、心肌收缩幅度和心率。结果
滇丹参 、甘西鼠尾 、褐毛甘西鼠尾可以对抗离体大鼠心脏停灌后再灌注引起的冠脉流量 、心肌收缩幅度和心率的降低(P<0.
01 , P<0.05);降低灌流液中 CK 、LDH 和 MDA含量 , 提高 SOD 和GSH-Px的活力(P<0.01 , P<0.05)。结论 滇丹参 、甘西鼠
尾 、褐毛甘西鼠尾对在体和离体缺血/再灌注心肌有保护作用。
关键词:滇丹参;甘西鼠尾;褐毛甘西鼠尾;心肌缺血;再灌注损伤;血流动力学
中图法分类号:R285.5 文献标识码:A 文章编号:1009-881X(2004)01-0018-04
Effects of Salvia Yunnanensis C.H.Wright , Salvia Przerwalskii Maxim ,
Salvia Przewalskii Maxim Var Mandarinorum Stib on Acute
Myocardial Ischemia and Reperfusion Injury in Rats
ZHANG Rong-ping1 , LI Hui-lan2 , ZHENGChun-lan2 , QIN Jian2
(1.Faculty of Pharnacy of Kunming Medical College;
2.Department of phyarmacology of Kunming Medical College , Kunming 650031)
Abstract:Objective To observe the effects of Salvia yunnanensis C.H.Wright , Salvia przerwalskii Maxim and
Salvia przewalsk Maxim var mandarinorum stib in myocardial ischemia/ reperfusion in rats.Methods Via the Langen-
dorff heart reperfused model ,5 mintutes after using the drugs ,we have made the rat s heart ischemia for 15 minutes and
reperfusion for 30 minutes.During the whole process ,we examined the flow of coronary artery ,degree of myocardial con-
traction ,heart rate and the concentration of the CK , LDH ,SOD ,GSH-Px and MDA in perfusion liquid.Results In the
model of Langendorff heart perfused , the flow of coronry artery ,degree of myocardial contraction , heart rate of the treat-
ment groups are obviously higher compared with the untreated group(P<0.01 , P <0.05).The concentration of the CK ,
LDH and MDA decreased and that of SOD andMDA rised(P<0.01 , P <0.05).Conclusion Salvia yunnanensis C.
H.Wright ,Salvia przerwalskii Maxim ,Salvia przewalskii Maxim var mandarinorum stib have the cardioprotective effects in
myocardial ischemia/ reperfusion in rat hearts.
Key words:Salvia yunnanensis C.H.Wright;Salvia przerwalskii Maxim;Salvia przewalskii Maxim var mandarino-
rum stib;myocardial ischemia;reperfusion injury;hemodynamics
中药丹参系唇形科(Labiatae)鼠尾草属(Salvia)
植物丹参 Salviamiltiorrhiza Bunge 的干燥根及根茎 ,
具有祛瘀止痛 、活血通经 、清心除烦 ,凉血消肿和排
脓生肌的作用。
现代研究表明丹参药理作用主要表现在:心血
管系统 、消化系统 、血液系统 、免疫系统及神经系统 ,
并具有抗菌和抗肿瘤作用 。丹参 、滇丹参 、甘西鼠
尾 、褐毛甘西鼠尾中均发现了二萜醌类化合物。此
类化合物具有抗菌消炎 、扩张冠脉 、抗血小板聚集等
作用 。近来又发现丹参酮ⅡA 有消除超氧自由基和
羟自由基的作用 ,并具有较强的消除脂质自由基的
能力[ 1～ 3] 。目前《中华人民共和国典》中规定中药丹
18 Chin J Hemorh.2004;14(1)
基金项目:云南省应用基础研究基金资助(98C067M)。
收稿日期:2003-10-03 作者简介:张荣平(1964-),男 ,江西人 ,博士 ,教授 ,硕士研究生导师 ,从事天然药物的研究与开发。
参的唯一来源是丹参 ,而民间广泛应用的丹参代用
品有滇丹参 、甘西鼠尾 、褐毛甘西鼠尾。有研究表
明:滇丹参 、甘西鼠尾 、褐毛甘西鼠尾注射液在体内 、
体外均能显著抑制ADP 、血小板激活因子(PAF)、花
生四烯酸(AA)诱导的兔血小板聚集;增加豚鼠离体
心脏冠脉流量;减轻心肌缺血时超微结构的病理变
化和心肌细胞凋亡;能对抗冠脉结扎所引起的红细
胞压积升高 ,加快血流速度 ,增加毛细血管开放数
目 ,对血液流变学异常有改善作用[ 6] 。本文研究三
种鼠尾草注射液对大鼠心肌缺血再灌注损伤的作
用。
1 材料与方法
1.1 药品 丹参注射液 ,生药含量 1.5g/ml;滇丹
参 、甘西鼠尾 、褐毛甘西鼠尾注射液 ,生药 2.0g/ml ,
由昆明医学院药学院植物化学教研室提供。
1.2 试剂 MDA试剂盒 ,批号:20020305 ,南京建成
生物工程研究所;SOD试剂盒 ,批号:20020315 ,南京
建成生物工程研究所;GSH-Px 试剂盒 , 批号:
20020318 ,南京建成生物工程研究所;CK-NAC 试剂
盒 ,批号:000202 ,北京中生生物工程高科技公司;
LDH试剂盒 ,批号:000925 ,北京中生生物工程高科
技公司;配制克氏液所需的化学试剂均为国产分析
纯。
1.3 仪器 循环水式真空泵 SHZ-D(Ⅲ):电热恒温
水浴锅;旋涡混合器 XW-80型;岛津 Cl770临床生化
分析仪:岛津平衡记录仪 U-135;微量注射泵 YBWZ-
12型:LD4-2A 型低速离心机;张力换能器;手术器
械。
1.4 实验动物 Sprague-Dawley(SD)大鼠 ,体重 250
～ 300g ,雌雄兼用 。
1.5 方法
健康 SD大鼠 90只 ,随机分为 9组。生理盐水
组 、丹参注射液组 、丹参提取液组和用药组 ,每组 10
只。受试药物高 、低剂量分别为 8mg/ml和 4mg/m1
(以上浓度均为动脉套管中的终浓度)。在缺血前
5min经动脉套管侧管由微量注射泵给药。
大鼠击头致死 ,迅速取出心脏 ,放入 4℃Kreb s
液 ,挤出心脏中的残留血液 ,剥离脂肪组织 ,游离主
动脉 ,进行主动脉插管 ,按 Langendorff 法恒压 、恒速
灌流 。心尖处夹蛙心夹 ,通过张力换能器与平衡记
录仪连接 , 记录心室心肌收缩幅度 。心脏稳定
15min开始实验 ,记录给药前冠脉流量 、心率和心肌
收缩幅度 。通过心脏插管的侧管经微量注射泵恒
量 、恒速(6ml/h ,5min)注射等体积生理盐水和药物。
5min后停止灌流 ,造成全心缺血 15min ,尔后恢复灌
流 30min。记录给药前 、全心缺血即刻 、缺血 5min 、
10min 、15min 和再灌注后 1min 、5min 、10min 、20min 、
30min的心率 、冠脉流量和心肌收缩幅度 。在再灌
注 30min 后收集心肌灌流液用于测定 CK 、LDH 、
SOD 、GSH-Px 和MDA含量 。
2 结果
2.1 对离体心脏停灌15min再灌注30min后心肌灌
流液中 CK 、LDH、SOD 、GSH-Px 和 MDA 的影响
实验表明:滇丹参 ,甘西鼠尾 ,褐毛甘西鼠尾高 、低剂
量组均能显著降低离体大鼠心肌缺血再灌注后灌流
液中 CK 、LDH 、和 MDA的含量(P <0.05 , P <0.01);
同时可以使灌流液中SOD和GSH-Px 的含量升高(P
<0.05 , P<0.01),见表 1。
表 1 滇丹参 、甘西鼠尾 、褐毛甘西鼠尾注射液对心肌缺血再灌注后灌流液 CK、LDH、SOD、GSH-Px 和MDA 的影响(x±s)
组别 剂量(mg/ml) CK LDH SOD GSH-Px MDA
NS 等容量 147.89±13.24 47.25±4.23 6.75±4.62 106.19±5.40 0.56±0.06
丹参注射液 8 106.33±15.45＊＊ 33.97±4.94＊＊ 14.92±4.50＊＊ 140.12±7.17＊＊ 0.43±0.08＊＊
滇丹参 4 117.96±10.80＊＊ 37.69±3.45＊＊ 9.09±4.05 116.63±11.03 0.45±0.08＊＊
8 111.21±15.72＊＊ 35.53±5.02＊＊ 12.45±3.11＊＊ 138.63±9.76＊＊ 0.31±0.07＊＊##
甘西鼠尾 4 137.94±11.73 44.07±3.75 14.29±3.30＊＊ 114.09±10.13 0.51±0.08
8 120.23±15.75＊ 38.41±5.03＊＊# 11.83±3.12＊＊ 118.05±8.91## 0.42±0.08＊＊
褐毛甘西鼠尾 4 133.15±10.36 42.54±3.31＊ 13.82±3.80＊＊ 119.01±11.15 0.47±0.09＊＊
8 110.77±15.39＊＊ 35.39±4.92＊＊ 13.12±3.33＊＊ 113.74±13.72## 0.45±0.10＊＊
与生理盐水组比较 , ＊P<0.05 , ＊＊P<0.01;药物高剂量组与丹参注射液组比较 , #P<0.05 , ##P<0.01
2.2 对离体心脏冠脉流量 、心肌收缩幅度和离体心
脏心率的影响 各组用药前各指标无明显差异
(P>0.05)。在停灌 15min后再灌注各组冠脉流量
均下降 ,以生理盐水组下降最为明显。各用药组高 、
低剂量均可以对抗冠脉流量降低 ,冠脉流量明显高
于生理盐水组(P<0.05 , P<0.01)。从实验结果上
看 ,丹参增加再灌注后冠脉流量的作用较各受试药
物强(P<0.01)。生理盐水组在停灌至停灌后 5min
19中国血液流变学杂志.2004;14(1)
心肌收缩幅度升高 , 停灌 10min 后心脏停止跳动 。
滇丹参 、甘西鼠尾 、褐毛甘西鼠尾高剂量组在停灌和
再灌注阶段心肌收缩幅度均高于生理盐水组(P<
0.05 , P <0.01)。与丹参组相比用药高剂量组对心
肌收缩幅度的影响无明显差异 。生理盐水组在停灌
后心率逐渐降低 ,停灌后 10min心脏停跳;再灌注后
心率又逐渐加快 。甘西鼠尾和褐毛甘西鼠尾高剂量
组在停灌时和再灌注时的心率明显高于生理盐水组
(P<0.05 , P <0.01)。滇丹参也可以使心率升高 ,
但与生理盐水组比较无统计学意义(P >0.05)。说
明:滇丹参 、甘西鼠尾 、褐毛甘西鼠尾均可以对抗冠
脉流量 、心肌收缩幅度的降低 ,同时可以使心率加
快。见表 2 ,表3 ,表 4。
表 2 丹参 、滇丹参 、甘西鼠尾 、褐毛甘西鼠尾注射液对离体大鼠心肌缺血再灌注时冠脉流量的影响(ml/min x±s)
组别 剂量(mg/ml) 给药前
缺血 再灌注后
0min 5min 10min 15min 1min 5min 10min 20min 30min
NS 等容量 7.97±0.23 0 0 0 0 6.28±0.97 6.67±0.61＊＊ 6.40±0.35＊＊ 6.28±0.40 5.88±0.38
丹参注射液 8 8.03±0.14 0 0 0 0 7.61±0.39 7.77±0.36＊＊ 7.78±0.42＊＊ 7.47±0.40＊＊ 7.57±0.40＊＊
滇丹参 4 7.90±0.19 0 0 0 0 7.18±0.38 7.44±0.42 7.03±0.29＊ 6.85±0.26＊＊ 6.68±0.44＊＊
8 8.12±0.20 0 0 0 0 7.20±0.45 7.73±0.25＊＊ 7.58±0.20＊＊ 7.18±0.38＊＊ 6.93±0.51＊＊##
甘西鼠尾 4 8.06±0.11 0 0 0 0 6.95±0.58 7.38±0.44 7.32±0.39＊＊ 7.15±0.48＊＊ 6.80±0.39＊
8 8.01±0.14 0 0 0 0 7.34±0.41 7.86±0.40＊＊ 7.71±0.30＊＊ 7.45±0.22＊＊ 7.24±0.34＊＊
褐毛甘西鼠尾 4 8.02±0.18 0 0 0 0 7.03±0.52 7.70±0.20＊ 7.59±0.31＊＊ 7.04±0.36＊＊ 6.80±0.40＊＊
8 8.03±0.14 0 0 0 0 7.18±0.38 7.62±0.13＊ 7.42±0.28＊＊# 7.22±0.31＊＊ 7.01±0.41＊＊##
与生理盐水组比较＊P<0.05 , ＊＊P<0.01;药物高剂量组与丹参注射液组比较#P<0.05 , ##P<0.01
表 3 丹参 、滇丹参 、甘西鼠尾 、褐毛甘西鼠尾注射液对离体大鼠心肌缺血再灌注时心肌收缩幅度的影响(g , x±s)
组别 剂量(mg/ml) 给药前
缺血 再灌注后
0min 5min 10min 15min 1min 5min 10min 20min 30min
NS 等容量 1.75±0.31 2.51±0.44 3.14±0.73 0 0 2.67±0.52 1.63±0.51 0.74±0.40 0.55±0.35 0.41±0.25
丹参注射液 8 1.81±0.50 3.21±0.81＊＊ 4.67±1.29＊＊ 3.71±1.62＊＊ 0 3.57±0.67＊ 2.25±0.72＊ 2.26±1.01＊ 2.01±1.19 1.58±1.01＊＊
滇丹参 4 1.65±0.39 2.75±0.45# 3.88±1.23 2.63±1.17＊＊ 0 3.01±0.71 2.23±0.66＊ 1.65±0.43＊＊ 1.00±0.28 0.73±0.31
8 1.76±0.35 3.54±0.55＊＊ 4.94±0.79＊＊ 3.7±1.35＊＊ 0 3.84±1.05＊＊ 2.38±0.71＊＊ 2.07±0.58＊＊ 1.68±0.66＊ 1.47±0.62＊
甘西鼠尾 4 41.77±0.24 2.41±0.33## 4.44±0.92＊＊ 3.08±1.33＊＊ 0 3.04±0.64 1.74±0.42 1.38±0.32＊ 1.13±0.39 0.87±0.31
8 1.82±0.31 2.79±0.56 4.24±0.71＊ 3.57±0.85＊＊ 0 3.91±0.95＊＊ 1.72±0.47 1.57±0.35＊＊ 1.51±0.45＊＊ 1.17±0.42＊＊
褐毛甘西鼠尾 4 2.04±0.27 2.60±0.27# 4.30±0.80＊ 4.74±0.99＊＊ 0 3.91±0.60＊＊ 2.14±0.56 2.08±1.05 1.94±1.16 1.42±0.81＊＊
8 1.90±0.24 2.73±0.45# 4.09±1.09＊ 3.60±0.66＊＊ 0 4.16±0.98＊＊ 2.37±0.70＊ 2.04±0.74＊＊ 1.64±0.48＊＊ 1.31±0.42＊＊
与生理盐水组比较 , ＊P<0.05 , ＊＊P<0.01;药物高剂量组与丹参注射液组比较 , #P<0.05 , ##P<0.01
表 4 丹参 、滇丹参 、甘西鼠尾 、褐毛甘西鼠尾注射液对离体大鼠心肌缺血再灌注时心率的影响(Bt/min , x±s)
组别 剂量(mg/ml) 给药前
缺血 再灌注后
0min 5min 10min 15min 1min 5min 10min 20min 30min
NS 等容量 270±15 100±20 19±3 0 0 90±11 147±15 167±24 176±23 178±16
丹参注射液 8 267±18 104±22 11±3＊＊ 7±2＊＊ 0 142±30 173±17＊＊ 251±25＊＊ 272±27＊＊ 252±40＊＊
丹参提取物 8 280±19 170±16＊＊## 13±4＊＊ 6±2＊＊ 0 111±29＊ 262±36＊＊##341±30＊＊## 314±37＊＊ 291±38＊＊
滇丹参 4 272±20 87±13 11±3＊＊ 7±4＊ 0 84±10 110±18＊＊## 166±17## 195±26## 176±25##
8 260±20 98±17 17±4## 10±2＊＊ 0 79±8 165±17＊ 203±29# 20±29## 204±33
甘西鼠尾 4 259±15 121±12＊＊ 12±3＊＊ 7±2＊＊ 0 84±12 189±22＊＊ 247±20＊＊ 249±24＊ 235±23＊＊
8 271±16 88±16 16±4## 10±2＊＊ 0 121±14＊＊ 247±16＊＊## 256±25＊＊ 252±23＊＊ 239±14＊＊
褐毛甘西鼠尾 4 4279±26 131±35＊＊## 14±4＊＊ 6±2＊＊ 0 118±26 207±40＊＊## 244±37＊＊ 243±42＊＊ 227±46
8 265±32 143±16＊＊## 15±4＊# 9±3＊＊ 0 112±23 240±48＊＊ 276±45＊＊ 259±45＊＊ 241±35＊＊
与生理盐水组比较 , ＊P<0.05 , ＊＊P<0.01;药物高剂量组与丹参注射液组比较 , #P<0.05 , ##P<0.01
3 讨论
心肌缺血再灌注损伤的主要原因是氧自由基的
大量生成 ,组织内抗氧化能力下降 ,氧自由基与细胞
膜上的多聚不饱和脂肪酸反应 ,发生脂质过氧化 ,其
过氧化产物MDA对细胞膜有很强的破坏作用 ,使其
流动性和通透性发生变化 ,细胞内 、外离子分布异
20 Chin J Hemorh.2004;14(1)
常 ,细胞内 Ca2+严重超负荷 ,使线粒体合成三磷酸
腺苷(ATP)的量明显减少 ,进而抑制心功能 ,最终导
致心肌细胞从可逆性损伤发展为细胞死亡 ,大量的
CK 、LDH 从坏死的心肌细胞中漏出 。SOD对机体的
氧化和抗氧化平衡起着重要的作用 ,并具有清除超
氧阴离子自由基(O2-)保护细胞免受损伤的功能 。
GSH-Px 是体内广泛存在的一种重要的催化过氧化
物分解的酶 ,它在细胞内能消除有害的过氧化代谢
产物 ,阻断脂质过氧化链锁反应 ,从而起到保护细胞
膜和细胞功能完整性的作用。本次试验采用了在体
心肌缺血再灌注模型和离体心肌缺血再灌注模型来
观察丹参 、滇丹参 、甘西鼠尾和褐毛甘西鼠尾对心肌
缺血再灌注损伤的保护 。实验表明:丹参 、滇丹参 、
甘西鼠尾 、褐毛甘西鼠尾可以降低大鼠缺血 30min
再灌注 60min后血清中 CK 、LDH和 MDA的含量;提
高SOD 和 GSH-Px 的活力。丹参 、滇丹参 、甘西鼠
尾 、褐毛甘西鼠尾均能对抗心肌细胞坏死引起的 CK
和 LDH 的升高;能提高内源性抗氧化剂 SOD 和
GSH-Px的活力 ,减少脂质过氧化产物MDA 的生成 。
而且在滇丹参 、甘西鼠尾 、褐毛甘西鼠尾高剂量下 ,
降低血浆 CK 、LDH 和 MDA ,升高血浆 SOD 和 GSH-
Px的能力较丹参略强 。说明:4种药物通过减少心
肌细胞坏死 、抑制再灌注过程中自由基的生成和提
高机体内源性抗氧化系统的活性 ,发挥对心肌缺血
再灌注损伤的保护作用 。
参考文献
[ 1] 郑虎占 ,董泽宏 , 余靖 ,等.中药现代化研究与应用(第
二卷)[ M].北京:学苑出版社 , 1997.1093.
[ 2] 肖小河 ,方清茂 , 夏文娟 , 等.药用鼠尾草属数值分类
与丹参药材地道性[ J] .植物资源与环境 , 1997 , 6(2):
17～ 21.
[ 3] 薛明 ,史彦斌 ,崔颖 , 等.甘西鼠尾草化学成分的研究
[ J] .天然产物研究与开发 , 1999 , 12(6):27 ～ 31.
[ 4] 徐淑云 ,卞如濂 ,陈修.药理实验方法学[M].第 3 版.
北京:人民卫生出版社 , 2002.976 ～ 1059.
[ 5] 邓汉武.大鼠心肌缺血再灌注损伤实验法[ J] .中国药
理学通报 , 1989 , 5(5):317～ 320.
[ 6] 闫彩珍 ,李惠兰 ,张荣平 , 等.滇丹参 、甘西鼠尾 、褐毛
甘西鼠尾对离体豚鼠心脏的影响[ J] .昆明医学院学
报 , 2003 , 23(1).:14～ 17.
降纤酶注射液对家兔血液粘度影响的实验研究
于戈群
(新缰乌鲁木齐市友谊医院 , 乌鲁木齐 830049)
摘要:目的 了解降纤酶注射液对家兔血液粘度的影响。方法 采用大耳白兔 33只 , 随机分为两组 ,实验组给予降纤酶
注射液腹腔内注射 ,每日注射两次 , 与对照组进行血液流变学指标对照检测。结果 在注射后全血粘度 、全血还原粘度明显
降低 ,血沉加快 , 血清粘度与血浆粘度出现倒置和逆转。结论 降纤酶注射液对家兔血液粘度有改变 , 尤其是血浆粘度和纤
维蛋白原显著改变。降纤酶可降低血液粘度和红细胞聚集性 , 是一种作用明显的降纤 、溶栓剂 , 这对于研究血栓性疾病有重
要意义。
关键词:降纤酶;血液粘度;纤维蛋白原
中图法分类号:R943 文献标识码:A 文章编号:1009-881X(2004)01-0021-01
降纤酶具有降低血浆纤维蛋白原的作用 ,其有
效成分是从蛇毒中经生物技术纯化精制的凝血酶
(TLE),是临床上治疗血栓疾病常选用的药物 。本
实验主要研究了降纤酶对家兔血液粘度的影响 ,现
报告如下 。
1 材料与方法
1.1 动物 实验动物选用日本健康大耳白兔 16
只 ,雌雄兼有 ,体重 2.0 ～ 3.2kg ,由上海中山医院动
物实验室提供 。
1.2 药品 降纤酶注射液(5U)由广西医科大学生
产和中国蛇协急危重症研究所提供。
1.3 仪器 采用 LIANG-200型计算机化和切变率
可调毛细管式血液粘度计。
(下转第 71页)
21中国血液流变学杂志.2004;14(1)
基金项目:新疆维尔自治区基金资助(编号:200121103)。
收稿日期:2003-11-29 作者简介:于戈群(1955-),女 ,河北人 ,副主任医师,主要研究方向为临床血液流变学。