全 文 ： Journal of Pharmaceutical Analysis药物分析杂志
·486· 药 物 分 析 杂 志 Chin J Pharm Anal 2016,36(3)
Chinese
* 深圳市基础研究计划基础研究项目（中药丹参的化学模式识别研究，项目编号：JYCJ20130402144215891）
** 通信作者 Tel：（0755）26031700； E-mail： wangtj88@163.com
第一作者 Tel：（0755）26031762； E-mail： 1142212683@qq.com
RP-HPLC法同时测定甘西鼠尾草中 12种成分的含量 *
胡伟慧 1，韩东岐 2，3，4，江坤 2，3，4，金一宝 2，3，4，殷果 2，3，4，王珏 2，3，4，郭兴杰 1，王铁杰 1，2，3，4**
（1.沈阳药科大学药学院，沈阳 110016；2.深圳市药品检验所，深圳 518057；
3.深圳药品质量标准研究重点实验室，深圳 518057；4.深圳岭南道地药材资源开发与应用工程实验室，深圳 518057）
摘要 目的：建立RP-HPLC法同时测定甘西鼠尾草药材及饮片中的丹参素钠、咖啡酸、异阿魏酸、丹酚酸D、迷
迭香酸、紫草酸、丹酚酸 B、丹酚酸A、二氢丹参酮Ⅰ、隐丹参酮、丹参酮Ⅰ、丹参酮ⅡA 8种水溶性化合物和 4种脂
溶性化合物的含量。方法：采用 Shim-pack XR-ODSⅡ（75 mm×2.0 mm， 2.2 μm）色谱柱，流动相为乙腈 -0.12%
甲酸水溶液，梯度洗脱，流速为 0.2 mL·min-1，柱温 30 ℃，检测波长 270 nm，进样量 4 μL。结果：在 50 min内，
甘西鼠尾草中的 12种成分可实现完全分离，丹参素钠、咖啡酸、异阿魏酸、丹酚酸D、迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸
B、丹酚酸A、二氢丹参酮Ⅰ、隐丹参酮、丹参酮Ⅰ、丹参酮ⅡA质量浓度分别在 0.22~22.3 μg·mL-1（r=0.999 8，n=6）、0.05~4.91 μg·mL-1（r=0.999 8，n=6）、0.18~18.25 μg·mL-1（r=1.000，n=6）、0.28~28.40 μg·mL-1（r=0.999 9，n=6）、13.50~1 349.89 μg·mL-1（r=0.999 9，n=6）、0.23~23.22 μg·mL-1（r=0.999 7，n=6）、9.93~993.16 μg·mL-1
（r=0.999 8，n=6）、0.04~3.87 μg·mL-1（r=1.000，n=6）、0.81~81.33 μg·mL-1（r=0.999 8，n=6）、0.87~86.85 μg·mL-1
（r=0.999 9，n=6）、0.67~67.47μg·mL-1（r=0.999 4，n=6）和 1.01~101.12 μg·mL-1（r=0.999 8，n=6）与峰面
积呈良好的线性关系，方法的平均回收率（n=6）分别为 99.2%（RSD=1.7%）、99.7%（RSD=1.4%）、101.0%
（RSD=2.0%）、99.7%（RSD=2.1%）、99.5%（RSD=1.9%）、101.2%（RSD=1.9%）、100.8%（RSD=1.7%）、100.7%（RSD=1.8%）、101.6%（RSD=1.5%）、100.7%（RSD=1.6%）、100.5%（RSD=1.4%） 和 100.0%
（RSD=1.7%）。结论：该分析方法简便、准确，灵敏度高，专属性好，经方法学验证可同时测定甘西鼠尾草
中的 12种化学成分的含量，可用于甘西鼠尾草及其制剂的质量控制。
关键词：甘西鼠尾草；丹参素钠；咖啡酸；异阿魏酸；丹酚酸 D；迷迭香酸；紫草酸；丹酚酸 B；丹酚酸 A；
二氢丹参酮Ⅰ；隐丹参酮；丹参酮Ⅰ；丹参酮ⅡA；高效液相色谱法；方法验证；水溶性成分；脂溶性成分；
质量控制；标准提升
中图分类号：R 917 文献标识码：A 文章编号：0254-1793（2016）03-0486-08
doi： 10.16155/j.0254-1793.2016.03.15
Simultaneous determination of contents of twelve constituents in Salvia przewalskii Maxim. by RP-HPLC*
HU Wei-hui1，HAN Dong-qi2，3，4，JIANG Kun2，3，4，JIN Yi-bao2，3，4， YIN Guo2，3，4，
WANG Jue2，3，4， GUO Xing-jie1，WANG Tie-jie1，2，3，4**
（1. School of Pharmacy， Shenyang Pharmaceutical University， Shenyang 110016， China； 2. Shenzhen Institute for Drug Control，
Shenzhen 518057， China； 3. Shenzhen Key Laboratory of Drug Quality Standard Research， Shenzhen 518057， China； 4.Shenzhen
Engineering Laboratory of Exploitation and Utilization of Medicinal Material Resources in Lingnan， Shenzhen 518057， China）
Abstract Objective： To establish a RP-HPLC method for the simultaneous determination of eight hydrophilic
and four lipophilic compounds including sodium danshensu， caffeic acid， isoferulic acid， salvianolic acid D，
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·487· 药 物 分 析 杂 志 Chin J Pharm Anal 2016,36(3)
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甘西鼠尾草为唇形科鼠尾草属弧隔鼠尾草亚属
植物，又名大紫丹参、紫丹参、甘肃丹参、秦红艽，主要
分布于我国甘肃西部、四川西部、云南西北部及西藏等
地［1］，具有抗炎、抑菌、抗氧化、抑制醛糖还原酶等药理
作用，作为区域性药材，药用历史悠久，品质优良且天
然蕴藏量大，在全国大部分省区内都有栽培并已在云
南、甘肃等 11个省区内作为丹参代用品流通使用［2-3］。
甘西鼠尾草与传统常用中药丹参是同科同属植
物，其含有的化学成分与丹参相似，主要分为两大类，
水溶性酚酸类和脂溶性二萜醌类［4］，然而，中国药典
仅收录丹参，对丹参中水溶性成分和脂溶性成分进行
测定，进而评价丹参及其制剂的质量的报道较多［5-11］，
而甘西鼠尾草仅收录于地方药品标准中，对甘西鼠尾
草及其制剂质量的评价研究也多集中在其所含有的
脂溶性成分中［12-16］，对不稳定的酚酸类化学成分的研
究较少［17］，且同时测定甘西鼠尾草中丹参素钠、咖啡
酸、异阿魏酸、丹酚酸 D、迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸 B、
丹酚酸 A、二氢丹参酮Ⅰ、隐丹参酮、丹参酮Ⅰ、丹参酮
ⅡA 8种水溶性成分和 4种脂溶性成分的方法尚未见
报道，本文建立了可同时测定甘西鼠尾草中 12种化
学成分含量的 RP-HPLC法，为甘西鼠尾草质量标准
的完善和其质量控制体系的建立提供了依据。
1 仪器与试药
1.1 仪器
Waters e2695高效液相色谱仪（包括二元泵处
理器、样品处理器、柱温箱、PDA检测器及 Empower
色谱工作站）；XS105DU型电子分析天平（梅特勒 -
托利多仪器有限公司）；RT-04A型高速粉碎机（香
港泓荃制药机械公司），SB-25-12 DT超声波清洗仪
（宁波新芝公司）。
1.2 试药
对照品丹酚酸 A（批号 CQ13050708）、丹酚酸 D
rosmarinic acid， lithospermic acid， salvianolic acid B， salvianolic acid A， 1，2-dihydrotanshinquinone，
cryptotanshinone， tanshinoneⅠ， tanshinoneⅡA in Salvia przewalskii Maxim．Methods： The HPLC separation was performed on a Shim-pack XR-ODSⅡ（75 mm×2.0 mm， 2.2 μm） column at 30 ℃．The mobile phases consisted
of acetonitrile-0.12% formic acid solution with gradient elution at a flow rate of 0.2 mL·min-1．The UV detection
wavelength was 270 nm， the injection volume was 4 μL．Results： The complete separation was obtained within
50 minutes for the 12 compounds．The linear ranges of sodium danshensu， caffeic acid， isoferulic acid， salvianolic
acid D， rosmarinic acid， lithospermic acid， salvianolic acid B， salvianolic acid A， 1，2-dihydrotanshinquinone，
cryptotanshinone， tanshinoneⅠ， tanshinoneⅡA were 0.22-22.3 μg·mL-1（r=0.999 8，n=6）， 0.05-4.91 μg·mL-1
（r=0.999 8，n=6）， 0.18-18.25 μg·mL-1（r=1.000，n=6）， 0.28-28.40 μg·mL-1（r=0.999 9，n=6）， 13.50-1 349.89
μg·mL-1（r=0.999 9，n=6）， 0.23-23.22 μg·mL-1（r=0.999 7，n=6）， 9.93-993.16 μg·mL-1（r=0.999 8，n=6）， 0.04-
3.87 μg·mL-1（r=1.000，n=6）， 0.81-81.33 μg·mL-1（r=0.999 8，n=6）， 0.87-86.85 μg·mL-1（r=0.999 9，n=6），
0.67-67.47 μg·mL-1（r=0.999 4，n=6） and 1.01-101.12 μg·mL-1（r=0.999 8，n=6）， respectively．The average
recoveries （n=6） of sodium danshensu， caffeic acid， isoferulic acid， salvianolic acid D， rosmarinic acid， lithospermic
acid， salvianolic acid B， salvianolic acid A， 1，2-dihydrotanshinquinone， cryptotanshinone， tanshinoneⅠ，
tanshinoneⅡA were 99.2%（RSD=1.7%）， 99.7%（RSD=1.4%）， 101.0%（RSD=2.0%）， 99.7%（RSD=2.1%）， 99.5%（RSD=1.9%）， 101.2%（RSD=1.9%）， 100.8%（RSD=1.7%）， 100.7%（RSD=1.8%）， 101.6%（RSD=1.5%），
100.7%（RSD=1.6%）， 100.5%（RSD=1.4%） and 100.0%（RSD=1.7%）， respectively．Conclusion： The method was
validated to be simple， accurate， selective， and sensitive， which can be used for simultaneous determination of eight
hydrophilic and four lipophilic components in Salvia przewalskii Maxim．and the quality control of Salvia przewalskii
Maxim．and as the reference of the quality control of Salvia przewalskii Maxim．preparations．
Keywords： Salvia przewalskii Maxim；sodium danshensu；caffeic acid；isoferulic acid；salvianolic acid D；
rosmarinic acid；lithospermic acid；salvianolic acid B；salvianolic acid A；1，2-dihydrotanshinquinone；
cryptotanshinone；tanshinoneⅠ；tanshinoneⅡA；HPLC；method validation；hydrophilic components；lipophilic components；quality control；standard improvement
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·488· 药 物 分 析 杂 志 Chin J Pharm Anal 2016,36(3)
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（批号 CQ13102515）均购自南京春秋生物工程有
限公司；丹参素钠（批号 20120911）、紫草酸（批号
20120210）、二氢丹参酮Ⅰ（批号 20130113）、丹参
酮Ⅰ（批号 20120503）均购自上海源叶生物科技
有限公司（纯度＞ 98%），咖啡酸（批号 1108805-
200102）、迷迭香酸（批号 11871-201404）、异阿魏
酸（批号 111698-201103）、丹酚酸 B（批号 111562-
201313）、隐丹参酮（批号 110852-200806）、丹参酮ⅡA
（批号 110766-200619）均购自中国食品药品检定研
究院。甘西鼠尾草药材及饮片均购置于各药材市场，
所有样品经深圳市药品检验所王淑红主任中药师鉴
定为唇形科植物甘西鼠尾草 Salvia przewalskii Maxim.
的干燥根及根茎。
甲醇为分析纯（广州化学试剂厂）；乙腈为色谱
纯（德国 Merck公司）；水为 Millipore超纯水。
2 溶液的制备
2.1 混合对照品溶液
精密称取丹参素钠、咖啡酸、异阿魏酸、丹酚酸
D、迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸 B、丹酚酸 A、二氢丹参
酮Ⅰ、隐丹参酮、丹参酮Ⅰ、丹参酮ⅡA的对照品适量，
加 75%甲醇溶液溶解并定容，摇匀，制成质量浓度分
别 为 22.3、4.91、18.25、28.4、1 349.89、23.22、993.16、
3.87、81.33、86.85、67.47和 101.12 μg·mL-1的混合对
照品，置于 4 ℃冰箱避光保存。
2.2 供试品溶液
取甘西鼠尾草粉末（过 3号筛）约 1.0 g，精密称
定，置具塞锥形瓶中，精密加入 75%甲醇 45 mL，摇
匀，称量，超声提取 2次（功率 250 W， 频率 40 kHz），
每次 40 min，放冷，加 75%甲醇补足减失的量，合并
过滤液，50 ℃旋转至干，残渣用 75%甲醇复溶稀释
至 10 mL棕色量瓶中，摇匀，过 0.22 μm微孔滤膜，
弃去初滤液，取续滤液，作为供试品溶液，置于 4 ℃冰
箱避光保存［18-19］。
3 色谱条件与系统适用性试验
色谱柱：Shim-pack XR-ODSⅡ（75 mm×2.0 mm，2.2
μm）；流动相：以乙腈为流动相 A，0.12%甲酸水溶
液为流动相 B，梯度洗脱（0~18 min，10%A→ 30%A；
1 8 ~ 3 0 m i n，3 0%A → 4 0%A；3 0 ~ 5 0 m i n，
40%A→ 68%A；50~60 min，68%A→ 75%A；）， 流
速：0.2 mL·min-1；检测波长：270 nm；柱温：30 ℃；进
样量：4 μL。在上述色谱条件下，理论塔板数均大于
4 000，样品中 12个被测成分色谱峰与相邻峰的分离
度 R＞ 1.5，拖尾因子符合要求，混合对照品及甘西鼠
尾草样品色谱图见图 1。
1. 丹 参 素 钠（sodium danshensu） 2. 咖 啡 酸（caffeic acid） 3. 异
阿 魏 酸（isoferulic acid） 4. 丹 酚 酸 D（salvianolic acid D） 5. 迷 迭
香酸（rosmarinic acid） 6. 紫草酸（lithospermic acid） 7. 丹酚酸 B
（salvianolic acid B） 8. 丹酚酸 A（salvianolic acid A） 9. 二氢丹参酮Ⅰ
（1，2-dihydrotanshinquinone） 10. 隐丹参酮（cryptotanshinone） 11. 丹
参酮Ⅰ（tanshinone Ⅰ）12. 丹参酮ⅡA（tanshinone ⅡA）
图 1 混合对照品（A）和 1号甘西鼠尾草样品（B）的高效液相色谱图
Fig. 1 HPLC chromatograms of reference substances（A） and Salvia
przewalskii Maxim. sample No. 1（B）
4 方法学考察
4.1 线性范围、检测限和定量限
取“2.1”项下混合对照品溶液，使用 75%甲醇水
溶液，逐级稀释成一系列不同质量浓度的混合对照品
溶液，注入高效液相色谱仪进行分析，记录峰面积。以
对照品质量浓度 X（μg·mL-1）为横坐标，峰面积 Y为
纵坐标，绘制标准曲线，并进行回归计算。以信噪比
10∶1求得定量限（LOQ），以信噪比 3∶1求出检测限
（LOD）。在“3”项下的色谱条件测定，结果见表 1。结
果表明，各化合物在各自质量浓度范围内线性关系良
好。检测限（S/N=3）在 0.02~0.65 μg·mL-1；定量限
（S/N=10）在 0.05~1.98 μg·mL-1。
4.2 精密度试验
精密吸取同一供试品溶液，按“3”项色谱条件，
连续进样 6次，结果丹参素钠、咖啡酸、异阿魏酸、
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表 1 12个化合物的回归方程、相关系数、线性范围、和检出限、定量限（n=3）
Tab. 1 Linear regression data，LODs and LOQs for twelve active compounds analyzed by HPLC
对照品
（reference substance）
回归方程
（regression equation）
r 线性范围
（linear range）/
（μg·mL-1）
检测限
（LOD）/
（μg·mL-1）
定量限
（LOQ）/
（μg·mL-1）
丹参素钠（sodium danshensu） Y=1.837×104X-1.721×102 0.999 8 0.22~22.30 0.10 0.30
咖啡酸（caffeic acid） Y=8.618×105X+1.147×104 0.999 8 0.05~4.91 0.02 0.05
异阿魏酸（isoferulic acid） Y=1.312×105X-6.106×102 1.000 0 0.18~18.25 0.05 0.17
丹酚酸 D（salvianolic acid D） Y=3.170×104X+8.259×103 0.999 9 0.28~28.40 0.15 0.44
迷迭香酸（rosmarinic acid） Y=1.546×104X+2.403×104 0.999 9 13.50~1 349.8 0.65 1.98
紫草酸（lithospermic acid） Y=2.508×104X+9.341×102 0.999 7 0.23~23.22 0.10 0.35
丹酚酸 B（salvianolic acid B） Y=7.773×103X+9.946×103 0.999 8 9.93~993.16 0.5 1.62
丹酚酸 A（salvianolic acid A） Y=3.334×105X+1.423×103 1.000 0 0.04~3.87 0.02 0.07
二氢丹参酮Ⅰ（1，2-dihydrotanshinquinone） Y=5.484×104X+1.323×104 0.999 8 0.81~81.33 0.31 0.98
隐丹参酮（cryptotanshinone） Y=8.443×104X+2.850×104 0.999 9 0.87~86.85 0.31 1.01
丹参酮Ⅰ（tanshinone Ⅰ） Y=5.848×104X+1.698×104 0.999 4 0.67~67.47 0.29 0.96
丹参酮ⅡA（tanshinone ⅡA） Y=3.572×105X+2.700×104 0.999 8 1.01~101.12 0.35 1.16
丹酚酸 D、迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸 B、丹酚酸 A、二
氢丹参酮Ⅰ、隐丹参酮、丹参酮Ⅰ和丹参酮ⅡA峰面
积的 RSD（n=6）分别为 1.9%、1.8%、1.0%、1.3%、
0.4%、1.6%、1.1%、0.9%、0.3%、0.8%、0.8%和 0.1%，
表明方法的精密度良好。
4.3 稳定性试验
取同一供试品溶液，按“3”项色谱条件，分别
于 0、1、2、4、8、12、24 h进样测定各成分峰面积值，
结果丹参素钠、咖啡酸、异阿魏酸、丹酚酸 D、迷迭香
酸、紫草酸、丹酚酸 B、丹酚酸 A、二氢丹参酮Ⅰ、隐丹
参酮、丹参酮Ⅰ、丹参酮ⅡA峰面积的 RSD（n=6）分
别 为 1.9%、1.5%、0.9%、1.7%、0.8%、1.3%、2.1%、
1.4%、0.1%、0.3%、0.4%和 0.2%，表明供试品溶液在
24 h内基本稳定。
4.4 重复性试验
取同一批号样品 6 份，按“2.2”项下方法，
制得供试品溶液，按“3”项色谱条件进样分析，
结果丹参素钠、咖啡酸、异阿魏酸、丹酚酸 D、
迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸 B、丹酚酸 A、二氢丹
参酮Ⅰ、隐丹参酮、丹参酮Ⅰ和丹参酮ⅡA平均含
量（n=6）分 别 为 0.452、0.013、0.605、0.945、17.194、
0.335、12.684、0.018、1.497、0.917、0.954和 0.770 mg·g-1，
RSD分 别 为 1.6%、1.7%、0.9%、2.1%、1.7%、2.3%、
2.2%、1.6%、1.5%、0.4%、0.1%和 0.7%，表明方法重
复性好。
4.5 加样回收率试验
取已知含量的甘西鼠尾草粉末（过 3号筛）6
份，每份约 0.5 g，精密称定。分别精密加入混合对照
品溶液，按“2.2”项下方法，制备供试品溶液，进样
分析，计算丹参素钠、咖啡酸、异阿魏酸、丹酚酸 D、
迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸B、丹酚酸A、二氢丹参酮Ⅰ、
隐丹参酮、丹参酮Ⅰ和丹参酮ⅡA的平均回收率
分 别 为 99.2%（RSD=1.7%）、99.7%（RSD=1.4%）、
101.0%（RSD=2.0%）、99.7%（RSD=2.1%）、99.5%
（RSD=1.9%）、101.2%（RSD=1.9%）、100.8%
（RSD=1.7%）、100.7%（RSD=1.8%）、101.6%
（RSD=1.5%）、100.7%（RSD=1.6%）、100.5%
（RSD=1.4%）和 100.0%（RSD=1.7%），结果见表 2。
4.6 耐用性试验
取“2.2”项下的供试品溶液，分别考察流动
相（0.10%甲酸水溶液 -乙腈、0.12%甲酸水溶液 -
乙 腈、0.15%甲 酸 水 溶 液 -乙 腈）、柱 温（28、30、
32 ℃）等条件微小变化（梯度洗脱程序保持不变）对
色谱分离和含量测定结果的影响。结果表明，色谱条
件的微小变化对色谱峰分离效果无明显影响，不同色
谱条件下测得丹参素钠、咖啡酸、异阿魏酸、丹酚酸 D、
迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸 B、丹酚酸 A、二氢丹参酮Ⅰ、
隐丹参酮、丹参酮Ⅰ、丹参酮ⅡA峰面积的 RSD分别为2.6%、2.8%、3.0%、2.6%、1.9%、2.7%、2.2%、3.3%、3.6%、
2.1%、3.0%、2.6%、3.5%和 2.9%，表明耐用性结果较好
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表 2 12种成分回收率实验结果（n=6）
Tab. 2 The results of recovery test of twelve components
成分
（component）
原含量（original）
/mg
加入量（added）
/mg
测得量（measured）
/mg
回收率（recovery）
/%
平均回收率
（average recovery）/%
RSD
/%
丹参素钠（sodium danshensu） 0.231 1 0.184 9 0.419 0 101.6 99.2 1.70.229 8 0.184 9 0.411 4 98.20.228 0 0.227 1 0.457 0 100.90.227 1 0.227 1 0.452 1 99.10.229 3 0.2741 0.498 9 98.40.228 4 0.274 1 0.494 8 97.2
咖啡酸（caffeic acid） 0.140 1 0.005 3 0.145 4 100.5 99.7 1.40.139 2 0.005 3 0.144 5 99.60.138 1 0.006 5 0.144 5 97.70.137 6 0.006 5 0.144 1 100.90.139 0 0.007 8 0.146 9 101.20.138 4 0.007 8 0.146 1 98.4
异阿魏酸（isoferulic acid） 0.309 3 0.247 4 0.562 2 102.2 101.0 2.00.307 5 0.247 4 0.551 5 98.60.305 0 0.303 8 0.608 3 99.80.303 8 0.303 8 0.614 5 102.30.306 8 0.366 8 0.671 4 99.40.305 6 0.366 8 0.685 6 103.6
丹酚酸 D（salvianolic acid D） 0.482 7 0.386 2 0.873 5 101.2 99.7 2.10.479 9 0.386 2 0.862 1 99.00.476 1 0.474 2 0.937 9 97.40.474 2 0.474 2 0.947 9 99.90.479 0 0.572 5 1.068 2 102.90.477 1 0.572 5 1.037 9 98.0
迷迭香酸（rosmarinic acid） 16.451 3 13.161 1 29.681 2 100.5 99.5 1.916.354 7 13.161 1 29.055 6 96.516.226 0 16.161 6 32.116 6 98.316.161 6 16.161 6 32.578 6 101.616.322 5 19.509 8 36.006 5 100.916.258 2 19.509 8 35.598 7 99.1
紫草酸（lithospermic acid） 0.324 7 0.259 7 0.591 8 102.9 101.2 1.90.322 8 0.259 7 0.583 4 100.30.320 2 0.318 9 0.638 2 99.70.318 9 0.318 9 0.644 6 102.10.322 1 0.385 0 0.701 4 98.50.320 8 0.385 0 0.719 2 103.5
丹酚酸 B（salvianolic acid B） 19.256 6 15.405 3 34.950 2 101.9 100.8 1.719.143 6 15.405 3 34.231 2 97.918.992 8 18.917 5 38.093 6 101.018.917 5 18.917 5 38.146 1 101.619.105 9 22.836 6 41.941 5 100.019.030 5 22.836 6 42.454 5 102.6
丹酚酸 A（salvianolic acid A） 0.009 1 0.007 3 0.016 4 100.5 100.7 1.80.009 0 0.007 3 0.016 2 99.20.009 0 0.008 9 0.018 2 103.80.008 9 0.008 9 0.018 0 101.20.009 0 0.010 8 0.019 9 100.80.009 0 0.010 8 0.019 6 98.8
二氢丹参酮Ⅰ（1，2-dihydrotanshinquinone） 1.275 9 1.020 7 2.323 4 102.6 101.6 1.51.268 4 1.020 7 2.287 4 99.81.258 4 1.253 5 2.552 8 103.31.253 5 1.253 5 2.524 5 101.41.265 9 1.513 1 2.818 4 102.61.260 9 1.513 1 2.769 3 99.7
隐丹参酮（cryptotanshinone） 0.468 8 0.375 0 0.840 8 99.2 100.7 1.60.466 0 0.375 0 0.847 9 101.80.462 3 0.460 5 0.914 7 98.20.460 5 0.460 5 0.929 4 101.80.465 1 0.555 9 1.025 4 100.80.463 3 0.555 9 1.030 9 102.1
丹参酮Ⅰ（tanshinone Ⅰ） 0.641 0 0.512 8 1.145 3 98.3 100.5 1.40.637 3 0.512 8 1.158 2 101.60.632 3 0.629 8 1.273 9 101.90.629 8 0.629 8 1.254 1 99.10.636 0 0.760 2 1.406 5 101.30.633 5 0.760 2 1.397 8 100.5
丹参酮ⅡA（tanshinone ⅡA） 0.546 8 0.437 4 0.980 9 99.2 100.0 1.70.543 5 0.437 4 0.970 5 97.60.539 3 0.537 1 1.075 4 99.80.537 1 0.537 1 1.081 0 101.30.542 5 0.648 4 1.187 0 99.40.540 3 0.648 4 1.205 6 102.6
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5 样品测定
取甘西鼠尾草药材与饮片各 3批样品，按
“2.2”项下方法制备供试品溶液，在“3”项色谱
条件下进样分析，记录色谱峰面积，采用外标法计
算丹参素钠、咖啡酸、异阿魏酸、丹酚酸 D、迷迭香
酸、紫草酸、丹酚酸 B、丹酚酸 A、二氢丹参酮Ⅰ、
隐丹参酮、丹参酮Ⅰ和丹参酮ⅡA的含量，结果见
表 3。
表 3 样品含量测定结果（mg·g-1， n=3）
Tab. 3 Results of content determination of samples
编号
（No.）
产地
（habitat）
形态（shape） 丹参
素钠
（sodium
dansh
ensu）
咖啡酸
（caffeic
acid）
异阿
魏酸
（isofer
ulic
acid）
丹酚
酸 D
（salvi
anolic
acid D）
迷迭
香酸
（rosm
arinic
acid）
紫草酸
（litho
sper
mic
acid）
丹酚
酸 B
（salvi
anolic
acid B）
丹酚
酸 A
（salvia
nolic
acid A
二氢丹
参酮Ⅰ
（1，2-
dihydro
tanshinq
uinone）
隐丹
参酮
（cryptota
nshinone）
丹参
酮Ⅰ
（tanshin
one Ⅰ）
丹参酮
ⅡA
（tanshi
none
ⅡA）
1 甘肃（Gansu）饮片（piece） 0.142 0.003 0.177 0.100 3.790 0.150 2.022 0.004 0.171 0.039 0.077 0.080
2 甘肃（Gansu）饮片（piece） 0.351 0.011 0.545 0.351 11.714 0.048 7.132 0.001 0.545 0.127 0.236 0.208
3 甘肃（Gansu）饮片（piece） 0.085 0.003 0.178 0.089 4.942 0.040 1.821 0.001 0.061 0.013 0.017 0.027
4 甘肃（Gansu）干药材（raw material） 0.231 0.006 0.317 0.167 6.225 0.041 3.822 0.003 1.186 0.263 0.477 0.302
5 甘肃（Gansu）干药材（raw material） 0.082 0.002 0.107 0.037 2.051 0.063 0.804 0.007 0.062 0.010 0.024 0.031
6 云南（Yunnan）干药材（raw material） 0.452 0.013 0.605 0.945 17.194 0.335 12.684 0.018 1.497 0.917 0.954 0.770
6 讨论
6.1 检测波长的确定
取 12种混合对照品溶液进样分析，在 190~
800 nm波长范围内进行波谱全扫描。比较 12种目标
化学成分分别在 254、270和 288 nm波长下的吸收情
况；结果显示，所测定脂溶性化学成分在 270 nm波长下
吸收较强，水溶性成分在 270 nm和 288 nm波长下吸收
强度相差不大，故选择 270 nm为检测波长。
6.2 色谱条件的选择
在选择流动相过程中，分别对甲醇 -水、甲
醇 -甲酸水溶液、甲醇 -乙酸水溶液、乙腈 -水、乙
腈 -甲酸水溶液、乙腈 -乙酸水溶液作为流动相系
统进行考察，结果发现，使用乙腈作为有机相时，色
谱峰之间的分离度更好，且加酸可改善丹酚酸 B的
拖尾现象，峰型更美观，甲酸较乙酸效果好，故选择
乙腈 -甲酸水系统作为流动相。考察乙腈与不同体
积分数的甲酸水溶液组成流动相，结果表明乙腈与
0.12%甲酸水溶液梯度洗脱时，各色谱峰与相邻峰之
间的分离度均符合要求，因此确定上述流动相体系，
且满足定量分析要求。
6.3 流动相流速的选择
在流动相为乙腈 -0.12%甲酸水溶液，柱温为 30
℃，检测波长为 270 nm的条件下，考察了 0.15、0.2、
0.25 mL·min-1不同流速对色谱峰分离效果的影响。
结果表明流速为 0.15 mL·min-1 时，分析时间较长，脂溶
性化学成分出峰较慢；流速为 0.25 mL·min-1 时，在梯
度洗脱过程中，柱压较高，超出了仪器所设定的上限，
不符合要求；流速为 0.2 mL·min-1时，所测定各成分
出峰时间合适，柱压也满足仪器要求，故确定该试验
方法的流速为 0.2 mL·min-1。
6.4 供试品溶液制备方法的优化（采用单因素法考
察样品提取条件）
6.4.1 提取溶剂的考察 本文考察了水、乙醇、甲醇、
不同比例的乙醇 -水溶液、甲醇 -水溶液作为提取
溶剂对样品提取率的影响，结果表明，纯水提取效率
最低，75%甲醇提取效率最高，故选用 75%甲醇作为
提取溶剂。
6.4.2 提取方法的考察 比较了冷浸法、加热回流提
取法和超声提取法，结果显示回流法和超声提取方法
对样品的提取率较高，冷浸法提取样品成分不完全，
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考虑到酚酸类化合物的不稳定性且为操作简便，最终
选择超声提取法。
6.4.3 超声提取时间及次数的考察 比较超声时间
20、40、60 min和提取次数分别为 1次、2次、3次条
件下样品的提取率，结果表明在提取时间为 40 min
及提取 2次条件下，样品提取率最高，所以本文超声
提取时间为 40 min，提取次数为 2次。
6.4.4 溶剂用量的考察 比较溶剂用量为 30、45、
60 mL对样品提取率的影响，溶剂用量为 45 mL时，
目标成分的提取效率最高。综上，本实验最终样品提
取方法为 45倍的 75%甲醇水溶液超声提取 2次，每
次 45 min。
6.5 小结
分析样品含量测定结果显示，甘西鼠尾草主要水
溶性成分为迷迭香酸和丹酚酸 B，脂溶性成分主要为
二氢丹参酮Ⅰ和丹参酮Ⅰ，在所收集的样品中，同一
产地不同形态的药材，其有效成分含量有所不同，干
药材所含总脂溶性化学成分含量高于饮片，总水溶性
成分含量相差不大，说明原药材加工方式可影响药材
内化学成分的含量。产地不同，所测定化学成分质量
分数也有较大差异，所收集的云南产甘西鼠尾草化学
成分含量较高，对以后优选甘西鼠尾草 GAP种植基
地具有一定指南作用。样品含量分析见图 2。
图 2 6批甘西鼠尾草中 12种化学成分的含量
Fig . 2 Comparison of twelve constituents in Radix Salviae
Miltiorrhizae
7 结论
本实验建立了同时测定甘西鼠尾草中 12种化
学成分含量的反相高效液相色谱法，经方法学验证，
该分析方法测定结果准确，操作简便，精密度和回收
率均符合要求，可用于有效控制、评价甘西鼠尾草及
其制剂的质量，也为其质量标准的制定和完善奠定了
基础。
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