全 文 ：第 28 卷 第 1 期
2 0 1 0 年 1 月
中 华 中 医 药 学 刊
CHINESE ARCHIVES OF TRADITIONAL CHINESE MEDICINE
Vol. 28 No. 1
Jan. 2 0 1 0
中
华
中
医
药
学
刊
一点红不同营养器官中鞣质和绿原酸含量测定
张 燕，张洪斌，陈光宙，王 燕
(琼州学院生命科学系，海南 五指山 572200)
摘 要:目的:建立一点红不同营养器官中鞣质和绿原酸含量测定方法。方法:以没食子酸为对照品，采用磷
钼钨酸 －干酪素比色法测定了鞣质含量;以绿原酸为对照品，采用高效液相色谱法测定了绿原酸含量。结果:没
食子酸浓度在 2 ～ 10mg·L －1范围内，与吸光度呈良好线性关系，平均加样回收率为 100. 32%，RSD = 1. 45%，一
点红叶、茎、根中鞣质含量分别为 0. 25%、0. 15%、0. 22%;绿原酸含量在 0. 0356 ～ 0. 5340μg范围内与峰面积积分
值呈良好线性关系，平均加样回收率为 99. 37%，RSD = 1. 52%，一点红叶、茎、根中绿原酸含量分别为 1. 28%、1.
14%、0. 91%。结论:这两种方法灵敏，准确性强，精密度高，重复性好，适用于一点红中鞣质和绿原酸含量的测
定。
关键词:一点红;鞣质;绿原酸;含量测定
中图分类号:R284. 1 文献标识码:A 文章编号:1673 － 7717(2010)01 － 0125 － 03
Determination of Tannins and Chlorogenic Acid of Different Vegetative
Organs in Emilia sonchifolia (Linn.)DC
ZHANG Yan，ZHANG Hong-bin，CHEN Guang-zhou，WANG Yan
(Department of Life and Science，Qiongzhou College，Wuzhishan 572200，Hainan，China)
Abstract:Objective:To establish the analytical methods for determinating the contents of tannins and chlorogenic
acid of different vegetative organs in Emilia sonchifolia (Linn.)DC. Methods:The content of tannins，expressed as gallic
acid equivalents，was measured by using the phospho molybdenum tungstic acid － casein colorimetry，and the content of
chlorogenic acid，expressed as chlorogenic acid equivalents，was measured by HPLC. Results:The good linearity between
concentrations and absorbances of gallic acid was found in the range of 2 ～ 10 mg L －1，the average recovery was
100. 32% and RSD was 1. 45%，the contents of tannins in leaves，stems and roots of Emilia sonchifolia (Linn.)DC were
0. 25%，0. 15% and 0. 22% respectively;The good linearity between content and peak area integral value of chlorogenic
acid was found in the range of 0. 0356 ～ 0. 5340μg，the average recovery was 99. 37% and RSD was 1. 52%，the con-
tents of chlorogenic acid in leaves，stems and roots of Emilia sonchifolia (Linn.)DC were 1. 28%，1. 14% and 0. 91%
respectively. Conclusion:Two proposed methods are sensitive，precise，accurate and reproducible，and they are suitable
for the determination of tannins and chlorogenic acid in Emilia sonchifolia (Linn.)DC.
Key words:Emilia sonchifolia (Linn.)DC;tannins;chlorogenic acid;determination
收稿日期:2009 － 09 － 16
基金项目:海南省教育厅高等学校科研资助项目(Hjkj2009 － 59)
作者简介:张燕(1968 －) ，女，甘肃西和人，副教授，硕士，研究方
向:资源植物化学。
一点红［Emilia sonchifolia (Linn.)DC］［1］，为菊科一点
红属植物，一年生或多年生草本，又名叶下红、羊蹄草、红背
叶、山羊草、野芥兰、牛尾膝等，在我国南方各省均有分布。
一点红全草入药［2］，清热凉血，活血化瘀，利尿消肿，消炎
解毒。主治上呼吸道感染、咽喉肿痛、口腔溃疡、肺炎、急性
肠炎、细菌性痢疾、泌尿系统感染、睾丸炎、乳腺炎、疖肿疮
疡、皮肤湿疹、跌打扭伤。它还是目前市场上畅销的妇科良
药———花红冲剂的主要原料。近些年来，一点红又成为人
们喜爱的一种野菜［3］，食味柔滑，口感清爽。
目前对一点红的研究主要集中在部分化学成分、栽培
技术等方面［4 － 7］，对其次生代谢产物含量的研究较少。本
文对一点红不同营养器官中鞣质和绿原酸含量进行了测定
分析，为一点红的药用质量控制及其次生代谢产物的进一
步研究和开发提供参考依据。
1 材料与试剂
1. 1 材料
一点红采自海南五指山市郊(由本系林教授鉴定为一
点红全草) ，将其洗净，分成根、茎、叶三部分，在 40℃条件
下烘干至恒重，粉碎，过 40 目筛，放在干燥器中备用。
1. 2 主要仪器
LC － 2010c型高效液相色谱仪(LCSOLUTION 工作站，
日本岛津公司) ;BP211D 电子天平(德国 Sartorius 公司) ;
521
DOI：10.13193/j.archtcm.2010.01.127.zhangy.056
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UV －2100 双光束紫外可见分光光度计(北京瑞利分析仪
器公司) ;CO250 型超声波清洗器(上海超声仪器厂)。
1. 3 试剂
没食子酸对照品(中国药品生物制品检定所，批号
110831 － 200302) ;绿原酸对照品(中国药品生物制品检定
所，批号 110753 － 200413) ;磷钼钨酸试液(按《中华人民共
和国药典》2005 年版一部附录ⅩⅤB配制)［8］;乙腈为色谱
纯;水为二次蒸馏水;其他试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2. 1 鞣质含量测定
2. 1. 1 对照品溶液的制备 精密称取没食子酸对照品
50mg，置 100mL棕色量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，精密
量取 5mL，置 50mL棕色量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，即
得 0. 05 mg·mL －1的对照品溶液。
2. 1. 2 供试品溶液的制备 精确称取一点红的根、茎、叶
粉末各 2g，分别置 250mL棕色量瓶中，加水 150mL，放置过
夜，超声处理 10min，放冷，用水稀释至刻度，静置，滤过，弃
去初滤液 50mL，精密量取续滤液 20mL，置 100mL棕色量瓶
中，用水稀释至刻度，摇匀，即得。
2. 1. 3 标准曲线的制备 精密量取没食子酸对照品溶液
1. 0、2. 0、3. 0、4. 0、5. 0mL分别置 25mL棕色量瓶中，各加入
磷钼钨酸试液 1mL，再分别加水 11、10、9、8、7mL用 29%碳
酸钠溶液稀释至刻度，摇匀。以随行试剂为空白。将对照
品溶液在 400 ～ 900nm 波长范围内进行光谱扫描，确定最
大吸收波长为 760nm。30min 后，于 760nm 波长处测定吸
光度。以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。
计算得回归方程为:Y = 0. 0909X + 0. 0519，r = 0. 9999，
结果表明，没食子酸浓度在 2 ～ 10mg·L －1的范围内，与吸
光度有良好的线性关系。
2. 1. 4 含量测定方法 总酚:精密量取供试品溶液 2mL，
置 25mL棕色量瓶中，照 2. 1. 3 项下的方法，自“加入磷钼
钨酸试液 1mL”起，加水 10mL，依法测定吸光度，从标准曲
线中读出供试品溶液中没食子酸的量(mg) ，计算即得。
不被吸附的多酚:精密量取供试品溶液 25mL，加至已
盛有干酪素 0. 6g的 100mL具塞锥形瓶中，密塞，置 30℃水
浴中保温 1h，时时振摇，取出，放冷，摇匀，过滤，弃去初滤
液，精密量取续滤液 2mL，置 25mL棕色量瓶中，照 2. 1. 3 项
下的方法，自上述“加入磷钼钨酸试液 1mL”起，加水
10mL，依法测定吸光度，从标准曲线中读出供试品溶液中
没食子酸的量(mg) ，计算即得。
按下式计算鞣质的含量:鞣质含量 =总酚量 －不被吸
附的多酚量
2. 1. 5 精密度试验 精确吸取对照品溶液 2mL 置 25mL
棕色量瓶中，照 2. 1. 3 项下的方法，自“加入磷钼钨酸试液
1mL”起，加水 10mL，依法测定吸光度，重复测定 5 次，吸光
度的 RSD = 0. 36%，表明精密度良好。
2. 1. 6 重复性试验 精确称取同一供试品粉末 5 份，各
2g，按照 2. 1. 2 项下方法制成供试品溶液，再按照 2. 1. 4 项
下方法测定吸光度，测得总酚吸光度的 RSD = 2. 13%，不被
吸附的多酚吸光度的 RSD = 1. 86%，表明重现性良好。
2. 1. 7 稳定性试验 取显色后的同一供试品溶液，分别于
0、0. 5、1、1. 5、2、2. 5、3、3. 5h 测定吸光度，结果供试品溶液
在显色 0. 5h 后至 3h 内吸光度稳定，吸光度的 RSD =
1. 74%。表明供试品溶液应在显色 0. 5h后开始测定，并在
3h内测定完毕。
2. 1. 8 回收率试验 取已知鞣质含量的同一样品 5 份，分
别精密添加一定量的没食子酸对照品，按供试液的制备及
2. 1. 4 项下操作，依法测定，并计算回收率。结果见表 1。
表 1 加样回收率试验结果
样品含
量(mg)
加入量
(mg)
测得量
(mg)
回收率
(%)
平均值
(%)
RSD
(%)
4. 92 1. 25 6. 16 99. 20
4. 96 1. 25 6. 19 98. 40
4. 98 1. 25 6. 25 101. 60 100. 32 1. 45
5. 02 1. 25 6. 28 100. 80
5. 06 1. 25 6. 33 101. 60
2. 1. 9 样品含量测定 精确称取一点红的根、茎、叶粉末
各 2g，按照 2. 1. 2 下制成供试品溶液，再按照 2. 1. 4 下测定
吸光度，根据回归方程求出样液中鞣质的含量，再计算出样
品中鞣质的含量。结果见表 2。
表 2 一点红不同营养器官中鞣质的含量(%)
样品号 叶 茎 根
1 0. 246 0. 147 0. 215
2 0. 251 0. 151 0. 222
3 0. 253 0. 152 0. 223
平均值 0. 25 0. 15 0. 22
RSD 1. 44 1. 77 1. 98
2. 2 绿原酸含量测定
2. 2. 1 色谱条件 色谱柱:Agilent Zorbax － C18(250mm ×
4. 6mm，5μm) ;流动相:乙腈 － 0. 4%磷酸(11 ∶ 89) ;流速
1. 0mL·min －1，理论塔板数以绿原酸计算大于 3000。外标
法定量，进样量 20μL，检测波长:327nm，柱温 25℃。
2. 2. 2 对照品溶液的制备 精密称取绿原酸对照品
3. 56mg，置 10mL量瓶中，加 50%甲醇溶解并稀释至刻度，
即得浓度为 0. 356mg·mL －1的对照品贮备液;准确吸取
1. 0mL此贮备液，置 10mL棕色量瓶中，用 50%甲醇稀释至
刻度，摇匀即得浓度为 0. 0356mg·mL －1的对照品溶液。
2. 2. 3 供试品溶液的制备 精确称取一点红的根、茎、叶
粉末各 1. 0g，分别加 50%甲醇 50mL，称定重量，超声处理
30min，放冷。用 50%甲醇补充减失的重量，取续滤液 5mL
置 10mL棕色量瓶中，加 50%甲醇至刻度，摇匀，即得。
2. 2. 4 系统适应性试验 按上述色谱条件，分别吸取对照
品溶液及叶供试品溶液各 10μL注入液相色谱仪，记录色谱
图。结果，绿原酸峰与其它组分峰能够达到基线分离，对照
品及供试品溶液中绿原酸峰的保留时间一致。色谱见图 1。
A.对照品;B.供试品;1.绿原酸
图 1 高效液相色谱
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2. 2. 5 标准曲线的绘制 精密吸取对照品溶液 1、3、5、7、
9、11、13、15μL，进样，按上述色谱条件进行分析，测定峰面
积。以进样量(X，μg)对峰面积积分值(Y)进行线性回归，
得回归方程为 Y =2. 1952 × 106X － 25679，r = 0. 9999。结果
表明，绿原酸进样量在 0. 0356 ～ 0. 534 0μg 范围内与峰面
积积分值呈良好线性关系。
2. 2. 6 精密度试验 精密吸取对照品溶液 20μL，按上述
色谱条件重复进样 5 次，测定峰面积。结果，RSD =
0. 27%，表明仪器精密度良好。
2. 2. 7 重现性试验 精确称取同一供试品粉末 5 份，各
1g，按 2. 2. 3 制备供试品溶液，进样量 20μL，测定峰面积的
RSD = 1. 94%。说明本方法重现性良好。
2. 2. 8 稳定性试验 对同一供试品溶液分别于制备后 0、
1、2、4、6、8、10h 测定绿原酸峰面积。结果，峰面积 RSD =
2. 06%，表明供试溶液在 10h内具有良好的稳定性。
2. 2. 9 回收率试验 精确称取已知含量的同一样品 5 份，
分别准确加入近等量的绿原酸对照品，按 2. 2. 3 下制备供
试品溶液，按上述色谱条件测定含量，计算加样回收率，结
果见表 3。
表 3 加样回收率试验结果
样品含
量(mg)
加入量
(mg)
测得量
(mg)
回收率
(%)
平均值
(%)
RSD
(%)
11. 54 11. 40 22. 98 100. 35
11. 38 11. 40 22. 95 101. 49
11. 42 11. 40 22. 67 98. 68 99. 37 1. 52
11. 28 11. 40 22. 43 97. 81
11. 44 11. 40 22. 67 98. 51
2. 2. 10 样品含量测定 精确称取一点红的根、茎、叶粉末
各 1. 0g，按照 2. 2. 3 制成供试品溶液，根据上述色谱条件进
行测定，根据回归方程求出样液中绿原酸的含量，再计算出
样品中绿原酸的含量。结果见表 4。
表 4 一点红不同营养器官中绿原酸的含量(%)
样品号 叶 茎 根
1 1. 262 1. 128 0. 883
2 1. 286 1. 154 0. 912
3 1. 292 1. 138 0. 935
平均值 1. 28 1. 14 0. 91
RSD 1. 24 1. 15 2. 86
3 讨 论
以没食子酸为对照品，通过磷钼钨酸 －干酪素比色法，
采用紫外可见分光光度计在 760 nm 波长处测定了一点红
不同营养器官中鞣质的含量，由表 2 可知，鞣质含量在一点
红叶中最高为 0. 25%，其次是根为 0. 22%，茎中最低为
0. 15%。通过实验发现该方法在测定鞣质时，为了保证测
定结果的准确，应采用现用现配的方式且应在避光的方式
下进行测定。
以绿原酸为对照品，采用高效液相色谱法测定了一点
红不同营养器官中绿原酸的含量，由表 4 可知，绿原酸含量
在一点红叶中最高为 1. 28%，其次是茎为 1. 14%，根中最
低为 0. 91%。本实验对流动相进行了比较，用不同比例的
甲醇 － 3%醋酸水溶液、甲醇 －乙腈、乙腈 － 0. 4%磷酸溶液
进行试验。结果，以乙腈 － 0. 4%磷酸溶液(11 ∶ 89)分离效
果最佳，保留时间适宜，故选用其作为流动相。取绿原酸对
照品溶液，以 50%甲醇为空白，在 200 ～ 400nm 波长范围内
扫描。结果，绿原酸在 327nm 波长处有最大吸收，故选择
327nm为检测波长。
上述可知，在一点红不同营养器官中鞣质、绿原酸含量
具有显著的差异性。
实验结果表明，这两种方法都具有操作简便，效率高，
精密度高，稳定性和重现性好，测定结果可靠的优点，适用
于一点红中鞣质、绿原酸的定量分析。可为一点红药用质
量评价提供可靠的检测标准。
参考文献
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57.
一种肠道细菌可增加
“好胆固醇”含量
巴西与阿根廷的科学家联合进行一项研究发现，一种
屎肠球菌可用来增加人体血液中的“好胆固醇”(又称高密
度胆固醇)含量。
据巴西媒体日前报道，屎肠球菌是一种肠道细菌，有很
多种类。巴西圣保罗州立大学和阿根廷乳酸杆菌研究中心
的科学家在试管实验和动物实验中发现，有一种屎肠球菌
可有效增加“好胆固醇”含量。他们用这种屎肠球菌进行
人体试验，44 名志愿者每天服用 200 毫升加入屎肠球菌发
酵的大豆酸奶，6 周后他们血液中的好胆固醇含量水平提
高了 10%。
据科学家介绍，“好胆固醇”含量水平提高 1% ～ 2%就
能大大减少罹患心血管病的风险，因此这种屎肠球菌的作
用相当可观，不过有关作用机制尚待继续研究。这项研究
成果已发表在最新一期《拉美营养档案》杂志上。
胆固醇分为高密度脂蛋白胆固醇和低密度脂蛋白胆固
醇两种。前者对心血管有保护作用，通常被称为“好胆固
醇”;后者通常被称为“坏胆固醇”，因为它的增多会使人患
心血管病的风险增加。
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