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实验技术
表 4 青海高原不同绵羊群体血钾型特征比较
绵羊品种与资料来源 n 表型分布 /%
LK HK
基因频率
KL K h
基因
杂合度
基因纯合
度指数
欧拉型藏羊 179 5(2. 8) 174(97. 2) 0. 010 5 1. 989 5 0. 020 8 0. 958 4
藏羊 [ 6] 101 21(20. 8) 80(79. 2) 0. 110 0 0. 890 0 0. 195 8 0. 608 4
青海半细毛羊 [ 9] 90 70(77. 8) 20(22. 2) 0. 528 6 0. 471 4 0. 498 4 0. 003 3
青海细毛羊 [ 7] 183 169(92. 3) 14(7. 7) 0. 723 4 0. 276 6 0. 400 2 0. 199 6
新疆细毛羊 [ 8] 107 100(93. 5) 7(6. 5) 0. 744 2 0. 255 8 0. 380 7 0. 238 5
3. 2 血钾型与血钾指标
由表 1数据可见 , LK和 HK型欧拉型藏羊的 SK值十
分相近 , 分别为 5. 7 mm o l /l和 6. 1 mm o l /l(P >0. 05), 表
明欧拉型藏羊的 SK值是一个比较恒定的血钾指标 , 不受
血钾型的影响 。这与其它家畜中研究结果是一致的 。然
而 , HK型欧拉型藏羊的 BK和 EK值均显著地高于 LK型
欧拉型藏羊(P <0. 01)。在 SK值比较恒定的情况下 ,显然
欧拉型藏羊的 HK型和 LK型是由红细胞钾浓度引起的 。并
且欧拉型藏羊的 PCV值也较恒定 , HK型欧拉型藏羊与 LK
型欧拉型藏羊之间无显著差异(P >0. 05)。因此 , 欧拉型
藏羊的 BK值与 EK值也呈高度的正相关 ( r=0. 968 2,
P <0. 0 1)。 由此提示 , 以后对欧拉型藏羊血钾型的可以
只测定 BK值来判定 , 从而使操作步骤简化 ,节省人力和物
力。
3. 3 血钾型与 HB型
LK或 HK表型欧拉型藏羊的 HB型分布没有显著差异
(P >0. 05),该结果支持绵羊血钾型与 HB型之间没有显著
联系 ,它们受各自独立基因座支配的观点 [ 2] 。
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千里光提取物的小鼠精子畸形试验
于增杰 1 ,聂芳红2 ,陈进军 1 ,林红英1 ,徐晓彬 1 ,李 华1
(1. 广东海洋大学农业生物技术研究所 , 广东湛江 524088;2.广东海洋大学食品科技学院)
中图分类号:S853.74 文献标识码:A 文章编号:1000 - 6354(2007)02 - 0040 - 03
千里光(Senecio scandensBuch. -H am. )系多年生草本
收稿日期:2006 -12 - 26
基金项目:广东省科技攻关计划重点引导项目 (2004B20201007);广
东省湛江市科技攻关计划项目(湛科 [ 2006] 94号)
作者简介:于增杰(1976 -),男,在读硕士研究生,研究方向为高效无公
害饲料。通讯作者:陈进军, E -m ail:jjchen777@yahoo. com. cn
植物 ,为菊科(Com positae)千里光属植物 ,在我国广泛分布于
陕西 、江苏 、浙江 、安徽 、江西 、湖南 、四川 、贵州 、云南 、广东和
广西等地。千里光始载于唐代《本草拾遗》, 异名有千里及 、
九里光 、九里明和一扫光等数十个。 1977年版《中国药典》
(一部)和《贵州省中药材质量标准》(1988年版)记载了千里
光的功效:清热解毒 , 明目 ,止痒。用于风热感冒 ,目赤肿痛 ,
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泄泻痢疾 ,皮肤湿疹 , 疥疮。 《中药大辞典》也记载了千里光
具有 “清热 , 解毒 ,杀虫 , 明目的功效。治各种急性炎症性疾
病 ,风火赤眼 , 目翳 ,伤寒 , 菌痢等” [ 1] 。关于千里光的毒性 ,
从古时就有记载 , 《本草拾遗》称:“味苦 , 平 , 小毒”。而《本
草图经》云:“味苦甘 , 寒 , 无毒”。由此可见 , 历史上对其毒
性的认识并不统一。现代研究发现 , 千里光全草含有大量毛
莨黄( flavxznthin)、菊黄素 (chry san - themaxanthin)及少量 β
-胡萝卜素;还含生物碱 、挥发油 、黄酮苷 、鞣质 、酚类 [ 2] 。据
英国 MHRA称 , 千里光属的各类植物均含有不饱和吡咯里
西啶类生物碱(PAs), 会对肝脏造成严重损害 , 引起人类肝
小静脉闭塞症。不饱和吡咯里西啶类生物碱对动物也显现
致癌性 ,诱导有机体突变和生殖毒性 [ 3] 。陈进军等(2006)利
用 TLC法 , 用 PAs特异性强的 Ehrlich试剂对千里光全草及
其抗菌有效部位 (即 70%乙醇提取物 )中 PA s进行检测发
现 ,千里光全草含有生物碱和 PA s。进一步对千里光抗菌有
效部位中总生物碱和 PAs进行研究 , 结果未检出 PAs。可见
进行千里光抗菌有效部位筛选和精制 , 可以排除其中的
PA s,提高千里光抗菌有效部位的安全性 [ 4] 。但是千里光
70%提取物是否具有致突变性 , 尚未见报道。本试验利用小
鼠精子畸形试验 [ 5] , 研究了千里光 70%乙醇提取物的致突
变作用 ,以丰富千里光抗菌有效部位的毒理学资料。
1 材料与方法
1. 1 千里光及其 70%乙醇提取物的制备
千里光于 8月份采于广东省湛江市麻章区 , 由广东海洋
大学农业生物技术研究所鉴定。将千里光阴干 、粉碎后 , 过
20目筛 ,称取 50 g, 用 70%乙醇 500 m l浸泡过夜 ,超声波萃
取 1 h, 85℃水浴回流 2 h,过滤 , 将滤液热浓缩至 50 m l, 用乙
醚萃取 3次脱色素等杂质 , 分装于干净的青霉素瓶中 , 冷冻
干燥成粉末 ,用石腊封口后 4 ℃保存备用。
1. 2 试验动物
一级昆明种小白鼠 30只 , 雄性 , 体重 (28±2)g, 购于广
西医科大学实验动物中心 , 合格证号:桂 SCX -2003, 饲养观
察 1周后用于试验。
试验动物的饲养环境温度控制在 25 ～ 28 ℃, 湿度为
60% ～ 80%, 室内无对流风 , 饲料为广东医学院实验动物中
心提供的小鼠全价颗粒料 , 自由采食 、饮水 , 每日更换饮水 1
次 ,隔天更换 1次垫料。
1. 3 试验器材
冷冻干燥机(德国 Virtis公司 , 型号:BENCHTOP), 旋转
蒸发器(上海沪西仪器厂 , 型号:RE -52), 超声波振荡仪(宁
波新芝仪器研究所 , 型号:SB - 5200), PHS - 3C型数字酸度
计(杭州梵隆重仪器有限公司 , 型号:PHS -3C), 高压蒸汽灭
菌器(上海博讯实业有限公司医疗设备厂 , 型号:YXQ - SG46
-280S),带有高倍镜头的光学显微镜 ,细胞计数器。
1. 4 试剂
乙醇(分析醇), 甲醇(分析纯 ), 环磷酰胺(江苏恒瑞医
药股份有限公司产品), 生理盐水 , 1%伊红(水溶)。
1. 5 试验方法
将体重(28±2)g的雄性小鼠 30只 ,随机分为 5组 , 每组
6只。 Ⅰ组为阴性对照组 、Ⅱ 、Ⅲ 、Ⅳ组分别给予不同剂量的
千里光 70%乙醇提取物 , Ⅴ组为阳性对照组。其中阴性对照
组给予生理盐水 , 阳性对照组给予环磷酰胺 (cyclopho spha-
m ide, CP)30 m g /kg,千里光 70%乙醇提取物的 3个剂量分别
为 1 /3 LD50、1 /10 LD50和 1 /30 LD50(已测得千里光 70%乙醇
提取物的 LD50为 392 7 mg /kg), 腹腔注射 , 于第 1次给药后
第 35天脱臼处死各组小鼠 , 分别取出两侧副睾 , 置于 1 m l
0.9%的生理盐水细胞培养液中 , 用镊子轻轻撕开附睾包膜 ,
徐徐摇动附睾组织 , 静置 8 m in, 然后用镊子将碎片尽量取
出 ,轻轻吹打盛有精子的悬液 , 用加样器吸取 40 μl精子悬
液 ,滴在波片上 , 用侧头轻轻将悬液推开 , 自然晾干 , 甲醇固
定 10 m in后再自然晾干 , 1%的伊红染色 1 h后取出 , 蒸馏水
冲洗 ,晾干 , 每只小鼠制两张片 , 每张片计数完整的精子 200
个 ,精子畸形率按下式计算:精子畸形率 (%)=精子畸形总
数 /检查精子总数 ×100, 卡方分析检验各组小鼠微核率的差
异 [ 6 , 7] 。
2 结果
各剂量组药物对小鼠微核率的影响结果见表 1。
表 1 千里光 70%提取物对小鼠精子畸形率的影响
组别 剂量
/m g kg - 1
受检的精子
数 /个
畸形精子
数 /个
精子畸形率
/%
Ⅰ SW 1 200 363 30. 25C ±3. 844 37
Ⅱ 1 309 1 200 531 44. 25 cA ±3. 831 34
Ⅲ 392. 8 1 200 518 43. 17bA ±4. 331 78
Ⅳ 130. 9 1 200 448 37. 33aB ±1. 180 87
Ⅴ 30(CP) 1 200 573 47. 75c ±3. 532 59
注:a、 b和 c分别表示供试提取物不同剂量组与阴性对照组比
较 ,差异不显著(P >0. 05)、差异显著 (0. 01
著(P <0. 01);A、B和 C分别表示供试提取物不同剂量组与阴性对
照组比较 ,差异不显著(P >0. 05)、差异显著(0. 01
异极显著(P <0. 01)。
由表 1可知 , 阳性对照组 (第 Ⅴ组 )小鼠精子畸形率
最高 , 阴性对照组(第Ⅰ 组)最低。 在试验各组小鼠组中 ,
第Ⅴ组与阴性对照组 (第 Ⅰ 组 )相比较 , 小鼠精子畸形率
差异极显著(P <0. 01);第Ⅲ组和第Ⅱ组小鼠精子畸形率分
别和第Ⅰ组比较 ,差异显著(0. 01
(P <0. 01);第Ⅳ组精子畸形率与第 Ⅰ组相比 , 差异不显著 综上所述 ,中、高剂量的千里光 70%乙醇提取物能够引起昆
(P >0. 05);第Ⅲ组和第Ⅱ组小鼠精子畸形率分别和第Ⅴ组
比较 ,差异不显著(0. 05
明种雄性小鼠精子畸形发生率升高, 而低剂量(130. 9 mg /kg)千
里光 70%乙醇提取物对小鼠精子畸形发生率影响较小。
3 讨论
生殖系统对化学毒物的作用十分敏感。化学物质作用
于动物 ,在其它系统还未出现毒性反应前 , 生殖系统可能已
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出现了损害作用。在正常情况下 ,哺乳动物的精液中也存在
少量的畸形精子 ,但在某些化学毒物作用下 , 睾丸产生的畸
形精子数量可大量增加。小鼠精子畸形受基因控制 , 许多常
染色体及 X、Y性染色体直接或间接地决定精子的形态 , 所
以精子的畸形是决定精子基因发生突变的结果。因此 ,精子
形态的改变提示有关基因及其蛋白质产物发生改变。小鼠
精子畸形试验可检测外源化合物对精子生成 、发育的影响。
研究发现生殖细胞对致突变物(如环磷酰胺)具有高度敏感
性 ,可以用来检查雄性动物接触化学毒物后精子畸形率的高
低来反映该化学毒物的生殖毒性和对生殖细胞潜在的致突
变性。
该研究利用小鼠精子畸形试验 , 对千里光 70%乙醇提取
物的致突变作用进行了评价。研究结果表明 , 1309. 0 m g /kg
和 392. 7 m g /kg的千里光 70%乙醇提取物能够引起雄性小
鼠精子畸形率明显升高 , 130. 9 m g /kg及其以下剂量的千里
光 70%乙醇提取物不能引起小鼠精子畸形率升高 , 不具有明
显致突变作用。
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临 床 集 锦
双氯灭痛片合复合骨粉
治疗耕牛跛行
近年 ,宁夏西吉周边地区兽医门诊耕牛跛行病例颇多 ,
笔者在临床诊治中探索出用双氯灭痛片配合复合骨粉治疗
该病 21例 ,均治愈。
1 临床症状
耕牛四肢(前肢跛行多见)跛行 , 初期患牛行走呈点跛 ,
似闪伤 ,外观无明显症状;后期跛行严重 , 患肢不能着地 , 呻
吟 ,触诊患肢热 、肿 、痛明显。
2 治疗
双氯灭痛片 20 -30 g,灌服 , 每天 2次;复合骨粉 200 -
300 g,灌服 , 症状轻者 , 可混饲 , 每天 2次。 3天症状减轻 , 7
天症状消失。症状消失后 , 停止灌服双氯灭痛片 , 继续灌服
或混饲复合骨粉约 10天 , 以巩固疗效。
3 典型病例
西吉县王民乡王民村王某一耕牛患病。主诉:耕牛跛行
已十余天 ,前几天因症状较轻 , 没有及时治疗 ,今天早上耕地
时跛行严重 ,卧地不起 ,前来就诊。问诊无闪伤 、跌打病史。
以前曾注射水杨酸钠注射液 、跛行痛注射液等 , 疼痛症状缓
解 ,后又复发。笔者遂用双氯灭痛片 25 g, 复合骨粉 250 g,分
别灌服 ,每天 2次 , 3天后症状减轻 , 7天跛行症状消失 , 继续
服用复合骨粉 15天 , 追访痊愈。
4 小结
4. 1 笔者曾按风湿痹症 、腐蹄病 、闪伤等用布洛芬注射液 、
跛行痛注射液 、青霉素等配合治疗该类疾病 , 均效果不佳。
后用复合骨粉补钙 、双氯灭痛片治疗 , 标本兼治 ,取得满意效
果。
4. 2 笔者认为 , 引起此类跛行的主要原因是饲草单一 , 饲料
品质差 , 造成耕牛营养缺乏 ,钙 、磷缺乏或比例失调 , 因此 , 在
对症治疗的同时 , 应进行补钙 ,方可收效显著 。
(宁夏西吉县王民乡畜牧兽医工作站 , 756200 王富贵;
西吉县红耀乡畜牧兽医工作站 刘汉军)
幼畜多汗症的治疗
幼畜多汗症多见于 10 - 60日龄幼畜 , 以奶牛多见 ,主要
由于幼阴不足而导致病理性出汗。近年来笔者以六味地黄
汤为基础方剂辨证施治 , 与玉屏风散灵活加减 , 共治疗该病
80余例 , 其中奶牛 56例 ,改良牛犊 24例 , 本地黄牛犊 2例 ,
驴驹 2例 , 取得满意的效果。
1 病因
多因孕畜营养不良 、精血亏损或久病失治造成幼畜先天
不足 、体质虚弱 ,营阴不能内守而致出汗。
2 临床症状
幼畜食欲不振 , 多在夜间或早晨出汗 , 白天在室外出汗
不明显 , 牵入室内则见汗多 ,出汗部位多在耳根 、颈部 、肘后 、
股内 、尾根等部 ,被毛湿润或汗液淋漓 , 舌红 、脉象细数 。
3 治疗
滋阴补肾 , 固表止汗。用六味地黄汤合玉屏风散加减:
熟地 20 g, 山茱萸 15 g,茯苓 10 g, 山药 15 g,丹皮 10 g,泽泻
10 g, 黄芪 30 g, 党参 20 g,龙骨 30 g,牡蛎 30 g,麻黄根 15 g,
防风 12 g, 白术 12 g。煎服 , 1剂 /天 , 连服 3剂 ,即可痊愈。
另外 , 也可用六味地黄丸 ,研末灌服 , 一般 2次 /天 ,每次
60 - 90粒 ,连用 3天 , 重症者 5天痊愈。
(河北省沧县畜牧水产局 061000 夏俊凯;
沧县黄递铺乡兽医站 高广安)