全 文 ：　中兽医医药杂志　JTCVM
2006年第 3期
　
调查研究
[ 12] A le jand ra Luquita, A. M. G enna ro, M. Rasia. In fluence
o f adso rbed pla sm a pro te ins on ery th rocy te rheo log ica l
prope rties:in vitro and in vivo stud ie s[ J] . P flü gersA rch -
Eur J Phy sio l, 2001, 443:78～ 83.
E ffects ofA laria pinnatifida Harv. d ietary fiber on the intestinal peristalsis and hem orheo logy in m ice
XU Jian - p ing, X IAO H ong - bo, SUN Zhi - liang, ZHOU Ke - yan
(Co llege o f Anim a lM edic ine, Hunan Ag ricu ltura l Un ive rsity, Chang sha Hunan 410128, China)
Abstract:Ob jec tive:To study the regu la tive e ffects of Alaria pinnatifida H arv. die ta ry fiber on the inte stina l pe rista lsis and
hem o rheo logy in m ice, and to provide an expe rim en tal evidence fo r the applica tion o fAlaria pinna tifida H arv. dietary fiber. M e th-
ods:S ixty no rm alm ice w ere div ided in to no rm al group, Alaria pinna tifida Harv. die tary fibe r g roup at low dose (5%) and at high
dose (10%). The intestina l perista lsis in thirteen norm a1 m ice w asm easured 30 days a fter insolub le Alaria pinnatifida H arv. dieta-
ry fiber had been g iven. Blood sam ple was taken from the righ t ey e of another 30 m ice to de te rm ine the ir hem orheologica l indexes
such as hem atocrit level and appa rent viscoc ity of whole blood high and low shears. Re su lts:In in testinal pe rista lsis te st the carbon
pow de r push pe rcentage o fAlaria pinna tifida H arv. dietary fiber group a t h igh dose had significant difference(P <0. 01) compared
w ith norm al control, w hile the hem a tocr it leve l and appa rent v iscosity o f who le blood high and low shea rs we re significantly lowe r
than that o f the contro l(P <0. 01 orP <0. 05). Conclusion:Alaria pinna tifida Harv. d ie tary fiber can enhance intestinal pe ristal-
sis, reduce hema tocrit level and the appa rent v iscosity of who le b lood h igh and low shea rs, and improve b lood flux ion of m ice.
K ey words:Alaria pinnatifida H arv. ;die ta ry fibe r;intestinal pe rista lsis;hem o rheo log ical indexes;m ice
千里光植物化学预试及抗菌有效部位化学成分检查
徐晓彬 ,林红英 ,冯羽裳 ,陈进军
(广东海洋大学农业生物技术研究所 ,广东湛江　524088)
　　摘　要:　采用试管分项提取预试法 、系统提取预试法和圆形纸层析预试法 ,对千里光进行了植物化学成分
预试;利用硅胶 G薄板层析法 , 喷雾 Eh rlich试剂 , 对千里光全草及其抗菌有效部位中双稠吡咯啶生物碱进行了检
查。结果发现 , 千里光全草含有黄酮及其甙类 、蒽醌及其甙类 、酚类 、强心苷 、氨基酸 、鞣质 、皂甙 、有机酸和生物
碱 , 不含氰甙 、多肽 、蛋白质 、内酯 、挥发油和油脂;千里光全草含有双稠吡咯啶生物碱 ,但千里光抗菌有效部位中
则未检出双稠吡咯啶生物碱。
　　关键词:　千里光;植物化学预试;化学成分;双稠吡咯啶生物碱
　　中图分类号:S853. 93　　　　 文献标识码:A　　文章编号:1000 - 6354(2006)03 -0010 - 04
　　千里光(Senecio scandens Buch. -Ham. , SC)为菊科千里
光属的一种多年生草本植物。千里光属约有 1 500种植物 ,
其中大多数因含有较多量有毒双稠吡咯啶生物碱(py rroliz-
id ine a lkaloids, PA s)而成为有毒植物 [ 1] 。 对千里光属植物的
化学成分研究多强调对 PA s的提取 、分离和鉴定 , 已有 200
多种 PAs被鉴定 [ 2] 。 SC对人和动物具有较广泛和明显的药
理作用 ,毒副作用小 [ 3～ 6] , 其 70%乙醇提取物的抑杀细菌功
效与市售双黄连注射液相当(另报 ), 是 SC抗菌有效部位。
SC抗菌有效部位是否含有 PA s尚未见报道。本研究对 SC
进行植物化学预试 ,并对 SC全草及其抗菌有效部位中 PA s
进行检测 ,为 SC的中药现代化研究提供资料。
收稿日期:2005 -12 - 20
项目来源:广东省科技攻关重点引导项目(2004B20201007)
作者简介:徐晓彬(1980 - ),男 ,在读硕士研究生 ,主要研究方向为高
效无公害饲料。 陈进军博士为通讯作者 , E - m ail:
jjchen777@ yahoo. com. cn
1　材料与方法
1. 1　千里光
于 2005年 8月采自广东省湛江市麻章区 , 经广东海洋
大学农业生物技术研究所鉴定为菊科千里光属的多年生草
本植物千里光(Senecio scandens Buch. -Ham. )。 将 SC全草
阴干 ,粉碎 , 储藏于阴凉干燥处备用。
1. 2　试剂与仪器
碘化钾 、次硝酸铋 、碘化汞钾 、硅钨酸 、苦味酸 、对硝基苯
胺 、亚硝基铁氰化钠 、 3, 5 -二硝基苯甲酸 、磷钼酸 、醋酸镁 、
三氯化铁 、白明胶 、茚三酮 、硝酸银 、镁粉 、层析用硅胶 G等均
为国产分析纯试剂。 Ehrlich试剂:对 -二甲氨基苯甲醛 0. 5 g
溶解在 25 m l含 0. 35 m l高氯酸的无水乙醇中(新鲜配制)。
KQ -100B 型超声波机 (昆山市超声仪器有限公司 )、 LG
WD700(MG - 5061T)型微波炉 (天津乐金电子电器有限公
司)、RE - 52C型旋转蒸发仪 (巩义市英峪予华仪器厂 )、
FD - 1B型冷冻干燥机 (北京博医康实验仪器有限公司 )、
10
DOI牶牨牥牣牨牫牳牪牫牤j牣cnki牣j tcvm牣牪牥牥牰牣牥牫牣牥牥牫
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2006年第 3期
　
调查研究
WFH - 203型三用紫外分析仪(温州市孚华分析仪器厂)等。
1. 3　SC植物化学预试
将 SC全草粉末过 20目筛 , 分别参照文献 [ 7 , 8]所述的方
法 ,制备预试液 , 采用试管分项提取预试法 、系统提取预试法
和圆形纸层析预试法 ,进行 SC全草植物化学成分预试。
1. 4　SC全草中 PA s的检测
1. 4. 1　总生物碱提取液的制备　取过 20目筛的 SC全草粉末
30 g,加甲醇 240 m l, 72℃热回流 5次 ,每次 4 h,回收浸泡液中的
溶剂 ,得浸膏,用 1%HCl酸化处理,酸水液用等量 CH
2
Cl
2
萃取 6
次除杂质 ,水层用氨水碱化至 pH 10 ～ 11,再加等量 CH2C l2萃取
6次,回收有机相溶剂,得总生物碱提取液 [2]。
1. 4. 2　总生物碱及 PA s分析　采用试管法 , 分别用生物碱
沉淀试剂碘化汞钾 、苦味酸和硅钨酸进行总生物碱检查。将
总生物碱提取液冷冻干燥 , 用适量甲醇溶解 , 利用薄板层析
法(TLC),对总生物碱提取液进行 PAs分析。 TLC展开剂为
氯仿∶甲醇∶氨水 =85∶14∶2, 用 PA s特异性 Ehrlich试剂喷雾
显色 ,观察。 如有淡紫色或紫褐色斑点 , 则为 PA s检查阳
性 [ 2] ,测定 R
f
值。每次 TLC检查进行 5个重复。
1. 5　SC抗菌有效部位中 PA s的检测
1. 5. 1　SC全草 70%乙醇提取液的制备　取过 20目筛的 SC
全草粉末 30 g,装入烧瓶 , 加入 70 %乙醇适量 ,浸泡后超声处
理 1 h[ 9] ,再微波处理 30 s,然后加入 70%乙醇至 300 m l, 浸渍
24 h,收集浸出液 ,过滤 , 加无水乙醇 50 m l,过滤, 向滤液中加
入 1 /3体积的乙醚 ,萃取 ,重复 2次 ,使脱色素 , 水层冷冻干燥 ,
即得 SC全草 70%乙醇提取物(亦即 SC抗菌有效部位)。
1. 5. 2　SC抗菌有效部位中 PAs的检测　将 SC抗菌有效部
位用适量甲醇溶解 ,采用 1. 4. 2中所述方法分别进行总生物
碱检查和 PAs薄板层析法分析。
2　结果
2. 1　SC植物化学成分预试
预试结果见表 1和表 2。综合表 1和表 2可知 , SC全草
中含有黄酮及其甙类 、蒽醌及其甙类 、酚类 、强心苷 、氨基酸
和鞣质 ,为千里光的主要成分。还含有皂甙 、有机酸和生物
碱等。不含氰甙 、多肽 、蛋白质 、内酯 、挥发油和油脂。
表 1　千里光预试液中植物成分的检测结果(分项提取预试法和系统预试法)
编号 预试液号 试剂名称或条件 反应现象 结果
1 A 挥发油检测 阴性 挥发油 -
2 B 改良碘化铋钾试验 红棕色 生物碱 ±
3 B 碘化汞钾试验 浅黄色 生物碱 ±
4 B 硅钨酸试验 浅黄色 生物碱 +
5 B 氯化钠白明胶试验 浑浊 酚类 ±
6 B 三氯化铁试验 绿色 酚类 ±
7 B 重氮化试验 红色 酚类 +
8 C 溶血实验 红色 皂苷 +
9 C 沉淀试验 浑浊 蛋白质 ±
10 C 双缩脲试验 红色 蛋白质或多肽 ±
11 C 茚三酮试验 阴性 蛋白质 ,多肽或氨基酸 -
12 D 泡沫试验 阴性 皂苷 -
13 D 氯化钠白明胶试验 阴性 酚类 -
14 D 三氯化铁试验 绿色 酚类 +
15 D 重氮化试验 红色 酚类 +
16 E 3, 5 -二硝基苯甲酸试验 红色 强心苷 ±
17 E 碱性苦味酸试验 橙红色 强心苷 ±
18 E 亚硝基铁氰化钠试验 阴性 强心苷 -
19 E 盐酸 -镁粉试验 红色 黄酮及其甙类 +
20 E 络合试验 黄绿色 黄酮及其甙类 +
21 E 碱性试验 阴性 蒽醌及其苷 -
22 E 醋酸镁试验 红色 蒽醌及其苷 ±
23 F 改良碘化铋钾 黄色沉淀 生物碱 +
24 F 碘化汞钾 阴性 生物碱 -
25 F 浓硫酸 黑色沉淀 可能含有皂甙 、生物碱 、其它 +
26 F 1%三氯化铁 黑绿色 可能含有酚 、黄酮 、鞣质 +
27 F 0. 2%茚三酮反应 黄绿色 可能含有蛋白质 、多肽 +
28 G 改良碘化铋钾 阴性 生物碱 -
29 G 碘化汞钾 浅黄色 生物碱 +
30 G 醇性苦味酸 阴性 可能含有生物碱 、挥发油 -
31 G 浓硫酸 黑绿色 可能含有皂甙 、生物碱 、其它 +
32 G 1%钼酸钠浓硫酸溶液 黑绿色 生物碱 +
33 H 5%硝酸银乙醇溶液 白色沉淀 有机酸 +
34 H 1%三氯化铁 阴性 可能含有酚 、黄酮 、鞣质 -
35 I 10%氢氧化钠 棕黄色 可能有酚类 、黄酮类 、羟基醌类 +
36 I 10%氢氧化钠(加热) 灰黄色 内酯(溶解)油脂(溶解发泡)+
37 I 醇性苦味酸 阴性 可能含有生物碱 、挥发油 -
38 I 浓硫酸 黑绿色 可能含有皂甙 、生物碱 、其它 +
39 I 盐酸 +镁粉 阴性 黄酮 -
40 I 1%三氯化铁 黄色 可能含有酚 、黄酮 、鞣质 +
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调查研究
表 2　千里光预试液中植物成分的检测结果(圆形纸层析法)
编号 检测项目 试剂 现象 结果
1 生物碱 喷改良碘化铋钾试剂 阴性 -
2 皂甙 喷 5%磷钼酸乙醇溶液后于 120℃烘 5m in 蓝色 +
3 强心甙 喷 2%3, 5 -二硝基苯甲酸乙醇溶液 ,再喷 4%氢氧化钠乙醇溶液 紫红色 +
4 黄酮及其甙类 喷 1%三氯化铝后紫外灯光观察 黄色 +
5 蒽醌及其甙类 喷 1%醋酸镁甲醇溶液 橙黄色 +
6 氨基酸 喷 1%醋酸镁甲醇溶液后于 90℃烘 5m in 紫色 +
7 酚性成分 喷 2%三氯化铁乙醇溶液与 2%铁氰化钾水溶液等量混合液 蓝色 +
8 鞣质 喷 1%三氯化铁乙醇溶液 绿黑色 +
2. 2　SC全草中 PA s的检测
总生物碱进行试管法检查结果 , 碘化汞钾反应阳性 、苦
味酸反应阴性 、硅钨酸反应阳性 ,结论为总生物碱阳性。 TLC
检查 , Eh rlich试剂喷雾后 , 分别在 R
f
值为 0. 74 ±0. 03、0. 84
±0. 01和 0. 91±0. 02处出现淡紫色斑点 , 说明 SC全草中含
有 PAs。
2. 3　SC抗菌有效部位中 PA s的检测
总生物碱试管法检查结果 , 碘化汞钾反应阳性 、苦味酸
反应阴性 、硅钨酸反应阳性 , 结论为总生物碱阳性。 经 TLC
检查 ,进行 Ehrlich试剂喷雾后 , 未出现淡紫色斑点 , 即在 SC
抗菌有效部位中未检出 PAs。
3　讨论
3. 1　英国 2004年初拟推出对含千里光属植物的内服药 , 包
括千柏鼻炎片(Q ian Ba i Biyan P ian)实施禁令的法规草案 , 其
主要根据是 ,千里光属的所有植物都含有 PAs, 而 SC是千里
光属的一种植物。实际上 ,千里光属植物有 1 500种以上 ,广
布于世界各地 ,我国约 434种 , 该属许多(并非所有的 )植物
含有 PAs, 至今已分离出 PAs近 200种 , 其中 30余种具有毒
性 [ 1 , 2] 。 SC原名千里及 ,始载于《本草拾遗》。谚语云:“有人
识得千里光 ,全家一世不生疮”。 许振(1947)及浙江省千里
光协作组(1973)研究发现 , SC是一种抗菌谱广 、临床疗效
显著 、毒副作用小的植物抗菌药 , SC水煎剂对小白鼠腹腔注
射的 LD50为 23±2. 7 g /kg[ 3 , 6, 10] 。可见 ,虽然 SC是千里光属
的一种 ,但是其化学成分特别是 PA s的检查及毒性研究尚有
很多疑问。
3. 2　在中药现代化和国际化的进程中 , 和许多中草药一样,
对 SC的化学成分研究越来越深入。据报道, SC含有色素类
物质如菊黄质 (chry san them axanthin)和毛茛黄素 ( flavoxan-
thin)、氢醌(hydroquinone),有机酸类如对 -羟基苯乙酸 (p -
hydroxypheny l ace tic acid) 、香荚兰酸(van illic acid)、水杨酸焦
粘酸(pyromucis ac id)等 [ 10] 。另外 , SC含有少量的 β -胡萝卜
素和类胡萝卜素(caro teno id),以及胆碱、生物碱 、黄酮甙 、鞣
质 、酚类、挥发油等 [ 1 , 5 , 11] 。本研究发现 , SC全草含有大量的黄
酮及其甙类 、酚性物质和蒽醌及其甙类 ,还含有一定量的强心
苷 、皂甙 、鞣质、氨基酸 、有机酸和生物碱 ,不含氰甙 、多肽 、蛋
白质 、内酯 、油脂和挥发油。本研究检出 SC全草含有强心苷,
未检出挥发油 ,这些结果与文献 [ 1, 5, 10 , 11]报道有一定差异。
3. 3　有些 PA s会引起肝静脉闭塞症 , 对实验动物具有致癌、
有机诱变和基因毒性。在医药市场上 ,含有千里光(不一定是
SC)的药物有千里光片 、千里光注射液、千里光卫生液、千里光
眼药水和千柏鼻炎片等 ,其中千里光片和千柏鼻炎片是内服
的 ,其中是否含有 PAs以及含量多少 ,都有待于深入研究。另
外 ,即使植物药中含有毒物质并不一定等同于药品中就一定
含有该有毒成分 ,因为中草药通过炮制 、精制及配成复方 , 可
以达到减少甚至是去除原植物中有毒成分对机体的损伤。本
研究采用对 PAs特异性强的 Ehrlich试剂 , 利用 TLC法对 SC
全草及 SC抗菌有效部位中 PAs进行了检测(该法对 PAs检测
的灵敏度为 0. 5 μg[ 12] ), 结果发现 , SC 全草含有生物碱和
PA s,这和文献报道 [ 10]一致。有关 SC抗菌有效部位(有效成
分)中总生物碱和 PAs的研究尚未见报道。本研究进一步对
SC抗菌有效部位中总生物碱和 PAs进行了研究 , 结果发现 ,
SC抗菌有效部位中含有生物碱 ,但未检出 PA s。可见进行 SC
抗菌有效部位筛选和精制 , 可以排除 SC中的 PAs, 大大提升
SC抗菌有效部位的安全性。
参考文献:
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Pre lmi inary phytochem icaltest ofSenec io Scandens Buch. -Ham. and
exam ination on chem ical composition of its antmi icrob ial part
XU X iao -b in, L IN H ong - y ing, FENG Yu - shang, CHEN Jin - jun
( Institu te o f Agricultura l B iotechno logy, Guangdong Ocean University, Zhan jiangGuangdong 524088, China)
Abstract:The pre lim ina ry phy tochem ical com position o fSenecio scandens Buch. -H am. (SC) w as te sted by suben try ex trac-
ting trial in cuve tte, sy stem ic ex trac ting tria l and round pape r chrom atog raph ic tria .l And py rro lizidine a lka lo ids(PAs) in SC and
an tim icrobia l part ex trac ted from SC w ere exam ined by test of silica ge l thin layer chroma tog raphy sp rayed w ith Eh rlich reagen.t It
w as found that SC m ainly con ta ins flavone s, anthraqu inones, pheno lic substances, cardiac g lycosides, am ino acids, tannic ma teri-
als, saponins, o rganic acids and a lkaloids, but dose no t contain cyanogenic glycosides, po lypeptides, pro te ins, lac tone s, vola tile
o ils and lip ins, and tha t SC con ta ins PA s but there was no any PA s de tec ted in the antim icrobia l extrac.t
K ey words:Senecio scandens Buch. -H am. ;prelim inary phy tochem ica l test;chem ica l composition;pyrro lizidine a lka lo id
金丝桃素蛋白络合物体外抗 H5N1亚型禽流感病毒的活性研究
赵晓虹1 ,梁剑平 2 ,祝艳华1 ,尚若锋 2 ,王雯慧1 ,崔　颖 2 ,罗永江 2 ,王学江2
(1.甘肃农业大学动物医学院 , 甘肃兰州　730070;2.中国农业科学院
兰州畜牧与兽药研究所 农业部新兽药工程重点开放实验室)
　　摘　要:　用鸡胚法进行了金丝桃素蛋白络合物抗 H5N1亚型禽流感病毒活性研究。分别采用了感染病毒
同时给药 、给药后接种病毒 、先感染病毒后给药三种方式 ,通过测定鸡胚尿囊液的血凝效价和计算药物对感染鸡
胚的保护率 , 观察金丝桃素蛋白络合物的抗 H5N1亚型禽流感病毒活性。实验结果表明 , ①药物在体外与病毒作
用一段时间后再将其混悬液接种鸡胚 , 药物浓度在 0. 5m g /m l以上时 ,对感染鸡胚的保护率达 100%,同时给药组
的血凝效价显著降低 , 与对照组相比差异极显著;②在感染病毒前给药 , 药物浓度在 2mg /m l以上时 ,对感染鸡胚
的保护率达 100%,药物组的血凝效价显著降低 , 与对照组相比差异极显著;③先感染病毒后给药 , 药物浓度在
2m g /m l以上时 ,对感染鸡胚的保护率达 88. 9%, 血凝效价明显降低 ,与对照组相比差异显著。同时 , 在此种方式
下 , 药物对病毒的抑制作用与药物浓度有一定依赖性 , 适当提高药物浓度 ,可以增强其抗病毒活性。
　　关键词:　金丝桃素蛋白络合物;H 5N1亚型禽流感病毒;血凝效价;保护率
　　中图分类号:S853. 74　　　　 文献标识码:A　　文章编号:1000 - 6354(2006)03 - 0013 -03
　　禽流感是由正黏病毒科 、流感病毒属 、A型流感病毒引起
的禽类感染和 /或疾病综合征 [ 1] ,各国政府采取多种措施预防
禽流感 , 并加强了抗流感病毒药物的开发研制。中国农业科
学院兰州畜牧与兽药研究所农业部新兽药工程重点开放实验
室在对抗病毒中草药的筛选中 , 发现贯叶连翘中有效成分金
丝桃素具有显著的抗病毒作用 [ 2] , 从而研制出金丝桃素蛋白
络合物 , 并研究其体外抗禽流感病毒 H 5N1亚型的活性。
1　材料与方法
1. 1　材料
收稿日期:2006 -01 - 09
项目来源:国家十五科技攻关计划(2004BA519A26)
作者简介:赵晓虹(1977 - ),女 , 在读硕士研究生。梁剑平为通讯作
者 , Tel:0931 - 3810885, E -m ail:liang jp100@ sin a. com
1. 1. 1　病毒　病料采自禽流感病死鸭只 , 经哈尔滨兽医研
究所进行病毒分离与鉴定为 H5N1亚型。
1. 1. 2　药物　金丝桃素蛋白络合物 , 由中国农业科学院兰州
畜牧与兽药研究所农业部新兽药工程重点开放实验室研制。
1. 1. 3　鸡胚　9日龄 SPF鸡胚 , 购自兰州生物制品研究所。
1. 1. 4　鸡红细胞悬液　参照《动物病毒学》红细胞悬液的制
备方法 ,配成体积分数为 1%的红血球 , 现配现用。
1. 2　方法
1. 2. 1　药液的制备　将金丝桃素蛋白络合物用助溶剂及双
蒸水配制成浓度为 64 mg /m l的药液。药液经 0. 45 μm 微孔
滤膜过滤 ,流通蒸气灭菌 30 m in,备用。
1. 2. 2　禽流感病毒的复苏　取保存的病毒液 , 经双抗处理
后 ,用 0. 9%生理盐水梯度稀释 , 选 10- 3 ～ 10- 5 3个浓度 , 尿
囊腔接种 9日龄 SPF鸡胚 5枚 , 每胚 0. 2 m l,石蜡封孔后 , 置
13