全 文 ：一点红药材中异槲皮苷的分离鉴定及指纹图谱研究
史新1，王立升1* ，庞赛2，段曼1，殷勇1
(1．广西大学，南宁 530004;2．广西中医学院，南宁 530001)
摘要 目的:从一点红药材中分离黄酮类化合物异槲皮苷，同时建立一点红的 HPLC 指纹图谱分析方法。方法:采用半
制备高效液相色谱法分离异槲皮苷，并以氢谱(1 H － NMR)、碳谱(13 C － NMR)、质谱(MS)确定其结构。采用高效液相
色谱技术分析指纹图谱;色谱条件:苏州环球 C18(250 mm × 4. 6 mm，5 μm)色谱柱，乙腈 － 0. 4%醋酸为流动相，梯度洗
脱，流速 1 mL·min － 1，检测波长 273 nm。结果:分离得到异槲皮苷，其纯度 ＞ 98%;按照中国药典规定，11 批一点红指
纹图谱相似度均在 0. 9 以上，确定了 16 个共有峰。结论:半制备高效液相色谱法制备异槲皮素方法简单、高效，指纹图
谱分析方法准确性高、重复性较好，可作为一点红质量评价的依据。
关键词:中药;一点红;黄酮类化合物;异槲皮苷;半制备高效液相色谱法;高效液相色谱;氢谱;碳谱;质谱;指纹图谱;质量评价
中图分类号:R917 文献标识码:A 文章编号:0254 － 1793(2012)05 － 0809 － 04
* 通讯作者 Tel:13737071312;E － mail:w_lsheng@ 163． com
Isolation and identification of isoquercitrin and
HPLC fingerprint study of Herba Emiliae
SHI Xin1，WANG Li － sheng1* ，PANG Sai2，DUAN Man1，YIN Yong1
(1． Guangxi University，Nanning 530004，China;2． Guangxi Traditional Chinese Medical University，Nanning 530001，China)
Abstract Objective:To isolate the flavonoid compound isoquercitrin from Herba Emiliae and establish the HPLC
fingerprint of Herba Emiliae． Methods:Isoquercitrin was isolate from Herba Emiliae by semi － preparative HPLC，
and its chemical structures was elucidated by 13C － NMR，1H － NMR and MS． The fingerprint was analyzed by
HPLC;chromatographic conditions:Suzhou universal C18(250 mm ×4. 6 mm，5 μm)chromatographic column was a-
dopted，the mobile phase was acetonitrile －0. 4% acetic acid with elution gradient at the flow rate of 1 mL·min －1，
the detection wavelength was set at 273 nm． Result:The purity of isoquercitrin was above 98% ． In accordance with
the provisions of China pharmacopoeia，11 batches of Herba Emiliae fingerprint had good similarity． Sixteen common
peaks in chromatograms were determined． Conclusion:Semi － preparative HPLC is a simple and efficient method to
prepare isoquercitrin． Fingerprint analysis method，being with high accuracy and repeatability，can be used in the
quality control of Herba Emiliae．
Key words:traditional Chinese medicine;Emilia sonchifolia;flavonoids;isoquercitrin;semi － preparative HPLC;
HPLC;1H － NMR;13C － NMR;MS;fingerprint;quality evaluation
一点红是我国南方地区习用的传统中草药，
为菊 科 植 物 一 点 红［Emilia sonchifolia (L． )
DC．］的干燥全草，别名有:羊蹄草、叶下红、乳汁
草、野苦草、红花细辛、小蒲公英、七十二枝花、牛
尾膝、野芥兰、假芥兰。它分布于海拔 330 ～
2000 m 的山坡、田间、路旁。功能主治:清热解
毒、散瘀消肿。临床上用于上呼吸道感染、口腔
溃疡、肺炎、乳腺炎、肠炎、外伤感染、急性结膜
炎、急性扁桃体炎、肺炎、胆囊炎、传染性肝炎、钩
端螺旋体病、菌痢、尿路感染、疮疔痈肿、湿疹、跌
打损伤［1，2］。一点红药材中主要含有黄酮类、生
物碱、三萜类、酚类等化学成分［3］，异槲皮苷为一
点红药材中含量最高的黄酮类成分，结构稳定，
不易降解，并具有抗炎、抗氧化、降压、抗病毒、镇
痛、抗诱变等多种药理作用［4］。
为了进一步开发利用一点红药材，本实验采用
—908—药物分析杂志 Chin J Pharm Anal 2012，32(5)
DOI:10.16155/j.0254-1793.2012.05.019
高效半制备液相色谱法从一点红药材中分离制备异
槲皮苷，采用高效液相色谱法对 11 个不同产地的一
点红药材指纹图谱进行了研究，为其鉴别、质量评价
以及质量标准的制定提供依据。
1 仪器与药品
1. 1 仪器 UC －3282 型半制备高效液相色谱仪、
UC －3280 型高效液相色谱仪(北京优联电工) ，威
玛龙色谱工作站，UV － 2550 型紫外分光光度计(日
本岛津公司) ，KQ －50B型超声波清洗器(昆山市超
声仪器有限公司) ，X － 4 显微熔点仪(上海精密科
学仪器有限公司) ，EL 电子天平(常州市天之平仪
器设备有限公司)。
1. 2 试剂与药品 乙腈(美国 Fisher 公司)、甲醇
(天津四友生物医学技术有限公司)为色谱纯，冰醋
酸(成都科龙化工制剂厂)为分析纯，液相用水为娃
哈哈纯净水(杭州娃哈哈公司)。11 批一点红药材
分别来自广西、安徽、湖南、云南、贵州、江西，经过广
西中药研究院的刘布鸣教授鉴定后，确定 11 批药材
为菊科植物一点红［Emilia sonchifolia (L．)DC］的
干燥全草。
2 方法
2. 1 异槲皮苷提取分离 取一点红粉末(过 40 目
筛)30 g，加入 50%甲醇 500 mL，超声(40 kHz，50
W)提取 120 min，过滤，滤液分别用石油醚、乙酸乙
酯萃取。将萃取液减压浓缩，取乙酸乙酯萃取层浸
膏，用甲醇溶解，然后用 0. 45 μm 微孔滤膜过滤，进
半制备高效液相色谱仪。半制备高效液相色谱条
件:苏州环球 － C18半制备色谱柱(250 mm × 10 mm，
10 μm) ，流动相为甲醇 － 0. 4%醋酸(30 ∶ 70) ，流速
5. 0 mL·min －1，检测波长 273 nm，进样量 2 mL，收
集相同保留时间的组分，减压浓缩至干。
2. 2 异槲皮苷的结构鉴定
将“2. 1”项下所得产物通过1 H 谱法(1 H －
NMR)、13C谱法(13 C － NMR)、质谱法(MS)等确定
其结构，得到的波谱数据如下:
黄色无定形粉末，熔点 250 ～ 252 ℃。UV
λmax:273 nm;ESI － MS m / z:463［M － H］
－;1 H －
NMR(600 MHz，DMSO) :谱中 δ:12. 64(1H，s) ;
芳香区 7. 57(2H，d，J = 9 Hz，H － 2’，6’) ，6. 83
(1 H，d，J = 8. 7 Hz，H － 5’) ;6. 38(1 H，s，H －
8) ，6. 19(1 H，s，H － 6) ，5. 46(1 H，d，J = 6. 9 Hz，
H － 1”) ，其偶合常数(J = 6. 9 Hz)表明苷键为 β
构型;13C － NMR(150 MHz，DMSO)δ:156. 34(C －2) ，
133. 29(C －3) ，177. 43(C －4) ，161. 25(C － 5) ，98. 72
(C －6) ，164. 70(C － 7) ，93. 53(C － 8) ，156. 14(C －
9) ，103. 93(C － 10) ，121. 15(C － 1’) ，115. 22(C －
2’) ，144. 84(C － 3’) ，148. 50(C － 4’) ，116. 21(C －
5’) ，121. 62(C － 6’)100. 83(C － 1’’) ，74. 10(C －
2’’) ，76. 50(C － 3’’) ，69. 93(C － 4’’) ，77. 62(C －
5’’) ，60. 98(C － 6’’)。以上数据与文献报道［5，6］基
本一致，鉴定化合物为异槲皮苷。所得异槲皮苷通过
面积归一化法测定其含量 ＞98%。
2. 3 一点红药材指纹图谱的建立 一点红药材指
纹图谱的建立主要是通过高效液相色谱来实现。分
析色谱条件:苏州环球 C18分析色谱柱(250 mm ×
4. 6 mm，5 μm) ，流动相为乙腈 － 0. 4%醋酸，梯度洗
脱(梯度条件见表 1) ，流速 1 mL·min －1，检测波长
273 nm，进样量 20 μL，记录色谱图 80 min。
表 1 梯度洗脱条件
Tab 1 Gradient elution conditions
t /min 乙腈(acetonitrile)/% 0. 4%醋酸(acetic acid)/%
0 5 95
15 15 85
35 25 75
65 50 50
70 85 15
75 95 5
80 5 95
2. 4 对照试验
异槲皮苷为一点红中主要化学成分，且含量较
高，在色谱图中分离良好，所以选择异槲皮苷为参
照物。
2. 4. 1 对照品溶液的制备 精密称取异槲皮苷对
照品 4. 0 mg，加 50%甲醇定容于 10 mL 量瓶中，摇
匀，用 0. 45 μm微孔滤膜过滤，即得。
2. 4. 2 供试品溶液的制备 精密称取一点红药材
粉末(过 40 目筛)6. 0 g，加 50%甲醇 100 mL，超声
(40 kHz，50 W)提取 120 min，过滤，滤液定容至 100
mL，用 0. 45 μm微孔滤膜过滤，即得。
2. 4. 3 测定 精密量取对照品溶液和供试品溶液
各 20 μL，进样，记录色谱图，见图 1。
2. 5 方法学考察
2. 5. 1 精密度试验 取其中 1 份供试品溶液(广
西样品)20 μL，在同样的色谱条件下连续进样 5 次，
并对色谱峰的相对保留时间进行统计，结果显示其
共有峰相对保留时间的 RSD(n = 5)小于 3. 0%，表
明仪器精密性良好。
—018— 药物分析杂志 Chin J Pharm Anal 2012，32(5)
图 1 对照品(A)及一点红药材(B)HPLC图
Fig 1 HPLC chromatograms of reference substance(A)and Herba Emiliae(B)
1．异槲皮苷(isoquercitrin)
2. 5. 2 重复性试验 精密称取 5 份同一样品(广西
样品) ，按照“2. 4. 2”项下方法平行得到 5份供试品溶
液，进样，对色谱峰的相对保留时间进行统计，结果
RSD(n =5)均小于 3. 0%，表明方法重复性良好。
2. 5. 3 稳定性试验 取广西样品，按“2. 4. 2”项
方法制备供试品溶液，室温放置，按“2. 3”项下色
谱条件，分别在 0，2，4，6，8，12，24 h进样分析并对
共有峰的相对保留时间和相对峰面积进行统计，
结果相对保留时间的 RSD(n = 7)均小于 1. 7%，
相对峰面积的 RSD 均小于 2. 6%，表明供试品溶
液在 24 h内稳定。
3 结果
3. 1 一点红药材指纹图谱的测定 按“2. 4. 2”项
下的制备方法及“2. 3”项下色谱条件，对 11 批不同
产地一点红药材进行测定，记录色谱图，并用“中药
色谱指纹图谱相似度评价系统 2004A 版”建立了一
点红药材的共有模式色谱图，共标定了 18 个共有
峰，各峰的相对保留时间分别为 0. 125，0. 138，
0. 180，0. 359，0. 634，0. 753，0. 808，0. 905，0. 939，
1. 000，1. 039，1. 052，1. 101，1. 145，1. 375，1. 425，
1. 489，1. 582，各峰的相对保留时间的 RSD ＜ 2. 0%。
11 批不同产地一点红药材指纹图谱叠加图见图 2。
图 2 11 批一点红药材指纹图谱
Fig 2 Fingerprints of 11 batches of Herba Emiliae
3. 2 不同产地一点红药材相似度分析 将 11 批
药材图谱数据导入“中药色谱指纹图谱相似度评价
系统 2004A版”，自动匹配后生成对照图谱，以此作
为一点红药材的对照指纹图谱(图 3) ，进行相似度
评价，不同产地一点红药材相似度均在 0. 90 以上，
说明各产地各批次的药材有较好的一致性，表明相
似度良好。
—118—药物分析杂志 Chin J Pharm Anal 2012，32(5)
图 3 一点红药材的对照指纹图谱
Fig 3 Reference fingerprint of Herba Emiliae
4 讨论
4. 1 测定波长的选择 供试品溶液在紫外分光光
度计下进行全波长扫描，经比较在 273 nm的波长下
色谱峰出峰情况较好。
4. 2 提取方式选择 分别考察了回流、超声、冷浸
3 种提取方法。超声提取法处理一点红药材所得的
指纹图谱的峰数较其他的 2 种方法较多，所以选择
超声法对药材进行处理。
4. 3 提取溶剂和时间的考察 选择了不同提取溶
剂(甲醇、20% 甲醇、50% 甲醇、80% 甲醇、50% 乙
醇)和不同提取时间(0. 5 h、1 h、2 h)进行考察，最
终确定在 50%甲醇超声 1 h的条件下所得到的的色
谱图的峰分离较好，并且基线较平稳
4. 4 流动相的选择 分别考察了甲醇 －水、甲醇
－0. 4%醋酸、乙腈 －水、乙腈 － 0. 4%醋酸 4 个流动
相系统，确定在乙腈 － 0. 4%醋酸流动相系统下色谱
分离效果最好，出现的色谱峰信息较多。
4. 5 指纹图谱评价 通过对不同产地的 11 批药
材进行指纹图谱分析，不同产地指纹图谱之间相似
度良好，相对保留时间的 RSD ＜ 2. 0%，所含成分基
本相同，但各成分的含量存在差异，相对峰面积差别
较大，考虑药材受环境因素的影响较大，有必要对一
点红药材的生长环境进行考察。
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(本文于 2011 年 12 月 5 日收到)
—218— 药物分析杂志 Chin J Pharm Anal 2012，32(5)