全 文 ：abetic mice． Methods: Diabetic mice were created by intraperitoneal injecting STZ and randomly divided into STZ group，metformin group，
low-，medium-，high-dose ( 2． 5g，5g，10g /kg) of EPS groups with 10 diabetic mice respectively． Normal group included 10 normal mice．
Mice were intragastric gavaged once a day for 14 days． Normal group and STZ group were given saline． The fasting blood glucose ( FBG) of
0，7，14 days were measured． One hour after last gavage，oral glucose tolerance test ( OGTT) and the measurement of serum insulin was
conducted，the insulin sensitivity index ( ISI) was calculated． Pathological changes of pancreas were observed through HE staining． Immuno-
histochemical analysis was used to perform insulin expression in the pancreatic tissues． Ｒesults: Compared to normal group，the FBG and the
area under curve of blood glucose ( AUC) were increased，serum insulin level were significantly decreased in STZ group． After the treatment
of metformin and EPS，the FBG and AUC of mice was showed a reduction in varying degrees． While the serum insulin level was risen ( P ＜
0． 01) ． And EPS also could up-regulate the expression of insulin in pancreatic tissue． ISI was promoted by EPS，though the ISI result did not
have statistically significant difference． Conclusion: The EPS can reduce FBG of diabetic mice through enhancing the glucose tolerance，pro-
moting the release of insulin and raising ISI in STZ-induced diabetic mice．
Key words Paederia scandens( 鸡矢藤) ; diabetes mellitus; glucose tolerance; insulin
南赤瓟对 Caski细胞的影响以及 Survivin与 Bcl-2 蛋白家族基因表达关系研究*
金家红1，王爱玲2，冯天艳3，贺海波2＊＊，覃慧林2，汪鋆植2，张永峰2
( 1 三峡大学医学院，宜昌 443002; 2神农架聚能药业有限公司，神农架 422400;
3三峡大学天然产物研究与利用湖北省重点实验室·湖北省土家药物研究所，宜昌 443002)
摘 要 目的: 研究南赤瓟醇提物对 Caski细胞抑制作用及可能的作用机制。方法:用不同浓度的南赤瓟醇提物( 0． 0625、0．
125、0． 25、0． 50、1． 00、2． 00mg /ml) 作用 Caski细胞 24h后，采用MTT 法检测不同浓度的南赤瓟醇提物对 Caski细胞增殖率的影响;用
0． 25、0． 50 和 1． 00mg /ml的南赤瓟醇提物和紫杉醇 4 × 10-5mg /ml作用 Caski细胞 24h后，MTT 法检测其对细胞活力的影响，流式细
胞术和 Hoechst 33258 染色检测其对细胞凋亡的影响，实时定量 PCＲ和 Western blot检测 Survivin、Bcl-2、Bax的 mＲNA和蛋白表达，
并计算 Bcl-2 与 Bax的比值。结果:南赤瓟醇提物对 Caski细胞的生长抑制作用呈明显的剂量依赖性;南赤瓟醇提物( 0． 25、0． 50 和
1． 00mg /ml) 和紫杉醇( 4 × 10-5mg /ml) 处理能显著抑制 Caski细胞增殖，促进其凋亡; 上调 Bax mＲNA和蛋白表达，下调 Survivin、Bcl-
2 mＲNA和蛋白表达及 Bcl-2 与 Bax的比值。结论: 南赤瓟醇提物可显著抑制 Caski细胞增殖，促进细胞凋亡，其作用机制可能与其
上调 Caski细胞 Bax mＲNA和蛋白表达，下调 Survivin、Bcl-2 mＲNA和蛋白表达及 Bcl-2 与 Bax 的比值有关。
关键词 南赤瓟醇提物;宫颈癌; Caski细胞;细胞凋亡
南赤瓟为葫芦科植物 Thldiantha nudiflora Hemsl．的根，具有
清热解毒、理气活血、泻热祛淤、消肿散结、止痢通乳之功效［1］，
主要用于痢疾、肠炎、虫蛇咬伤、痈肿、乳汁不通等疾病的防治。
在土家民间有将其根煮水饮用治疗宫颈癌的传统，在前期我们
相继证实其提取物可显著诱导 Hela细胞凋亡作用，并在裸鼠移
植瘤模型上发现其对 Caski细胞移植瘤的生长具有明显的抑制
作用［2 ～ 4］。本研究拟在此基础上，观察南赤瓟提提物对人宫颈
癌 Caski细胞抑制作用，并从 Survivin 基因表达与 Bcl-2 蛋白家
族关系探讨其可能的作用机制。
1 材料与方法
1． 1 试验药物 南赤瓟药材购自神农架聚能药业有限公司，产
自神龙架林区，批号: 20131008。经天然产物研究与利用湖北省
重点实验室( 三峡大学) 汪鋆植教授鉴定为葫芦科植物 Thldian-
tha nudiflora Hemsl的干燥根。南赤瓟醇提取物的制备详见我们
前期研究［2］，实验时用二甲基亚枫( DMSO) 溶解南赤瓟醇提取
物样品，配制成浓度为 10mg /ml 的储备液，经 0． 22 μm 滤膜过
滤除菌后，用培养基配成相应的浓度，4℃保存备用。
1． 2 细胞 人宫颈癌细胞 Caski由中国医学科学院基础医学
研究所细胞资源中心提供。
1． 3 试剂 ＲPMI1640 培养基: 美国 Gibco公司;胎牛血清:杭
州四季青生物材料有限公司; HEPES、胰蛋白酶、四甲基偶氮唑
盐 ( MTT ) 、二甲基亚砜 ( DMSO ) : 美国 Amresco 公司; Ho-
echst33258:碧云天生物技术研究所; Trizol、DEPC: 美国 Invitro-
gen公司;即用 PCＲ扩增试剂盒( Tap DNA Polymerase) : 生工生
物工程( 上海) 有限公司;反转录试剂盒( PrimeScript ＲT reagent
Kit) :日本 TaKaＲa 公司; Survivin、Bcl-2、Bax 以及 GAPDH 引物
( 上海生工生物工程有限公司合成) ; Survivin、Bcl-2、Bax 抗体，
美国 Santa Cruz公司; β-actin抗体，北京博奥森生物技术有限公
司;羊抗兔二抗，北京中杉金桥生物技术有限公司; 总蛋白抽提
试剂盒、ECL发光试剂盒、蛋白含量测定试剂盒，碧云天生物技
术研究所;其他试剂均为市售分析纯。
051 中药药理与临床 2015; 31( 4)
* 湖北省自然科学基金科研项目，项目号: 2013CFB224;宜昌市科学技术局项目，项目号: A13 － 302a － 14 ＊＊通讯作者
DOI:10.13412/j.cnki.zyyl.2015.04.047
表 1 荧光定量 PCＲ引物序列:
基因
名称
上游引物
序列
下游引物
序列
基因片段
长度 ( bp)
Bcl-2 5-TGTGGCCTTCTTTGAGTTCG-3 5-TCACTTGTGGCTCAGATAGG-3 280
Bax 5-GCGTCCACCAAGAAGCTGAG-3 5-ACCACCCTGGTCTTGGATCC-3 311
Survivin 5-TCTCAAGGACCACCGCATCT-3 5-AAGCGCAACCGGACGAAT-3 206
GAPDH 5-GGGAGCCAAAAGGGTCATCTC-3 5-CCATGCCAGTGAGCTTCCGTTC-3 353
1． 4 仪器 CO2 培养箱，美国 Thermo; Olympus KX41 型倒置
显微镜，美国 Thermo; Stat Fax-2100 型酶联酶联免疫检测仪，美
国 Awareness; NIKON TE2000 型荧光倒置显微镜，上海横桥仪器
有限公司; EcoTM 实时荧光定量 PCＲ 仪: 美国 illumina 公司; 电
泳仪，北京市六一仪器厂; 凝胶电泳成像分析系统，美国 Bio-
ＲAD。
1． 5 方法 Caski细胞培养于含 10%新生小牛血清、100U /ml
青霉素、100μg /ml 链霉素的 ＲPMI 1640 培养基中，置于孵箱中
37 ℃、5 % CO2饱和湿度下培养，待 Caski 细胞贴壁生长，取对
数生长期细胞用于实验。
1． 5． 1 MTT 法检测细胞生长抑制率 取对数期生长的 Caski
细胞配制成细胞密度为 1 × 105 个 /ml的细胞悬浮液，接种于 96
孔板中，每孔 100μl，四周用 PBS液封，于孵箱中 37 ℃、5 % CO2
饱和湿度下培养 12h待细胞贴壁后，更换培养液，将南赤瓟醇提
取物配制成 5 个浓度梯度( 终浓度 0． 0625、0． 125、0． 25、0． 50、1．
00、2． 00mg /ml) 100μl，每孔加入浓度梯度药物 100μl，每个浓度
梯度设 5 个复孔，并设置空白孔( 含细胞的培养液 + MTT + DM-
SO) 及调零孔( 培养液 + MTT + DMSO) 。37℃、5% CO2 饱和湿
度下培养 24h后加入 20μl MTT，继续培养 4h后终止培养，取出
96 孔板小心移走孔内液体，每孔加入 DMSO150ml，置摇床上低
速振荡 10min后，用酶标仪于 490 nm 处测量各孔的吸光度值
( OD490nm) 根据公式:细胞抑制率 = ( 1-给药组 OD 值 /空白对
照组 OD值) × 100%。
1． 5． 2 流式细胞仪检测细胞凋亡 空白对照组、南赤瓟醇提
物组( 0． 25、0． 50 和 1． 00mg /ml) 和紫杉醇组 ( 4 × 10-5 mg /ml)
Caski细胞分别用相应浓度的药物处理，37℃、5% CO2 饱和湿
度下培养 24h后，收集细胞，制备细胞悬液，1000rpm离心 7min，
弃上清液，PBS洗涤，收集细胞，在冰水浴中进行下述操作: 用
Annexin V-FITC 试剂盒中 binding buffer 悬浮细胞，调节细胞浓
度为 1 × 106 /ml，取 100μl上述细胞，分别按试剂盒说明加入 PI
和 AnnexinⅤ-FITC，混匀后室温避光 15min 后，用流式细胞仪检
测细胞凋亡。
1． 5． 3 Hoechst 33258 检测凋亡细胞形态 将 Caski 细胞分
别用南赤瓟醇提物组 ( 0． 25、0． 50、1． 00mg /ml) 和紫杉醇 ( 4 ×
10-5mg /ml) 处理，37℃、5% CO2 饱和湿度下培养 24h 后处理过
的细胞用 0． 125%胰蛋白酶消化后收集细胞，用 37℃的 PBS 冲
洗 24 孔板 2 次，加入 1ml 的 4%的多聚甲醛于 4℃固定 10min，
自然晾干，每孔加入终浓度为 10mg / l 的 Hoechst33258 染液
100μl，室温避光染色 10min，水冲净晾干，激发光波长 450nm，发
射光波长 490nm。荧光显微镜下观察凋亡细胞形态学变化。
1． 5． 4 实时定量 PCＲ 检测 Survivin、Bcl-2、Bax mＲNA 表达
将 Caski细胞分别用南赤瓟醇提物组( 0． 25、0． 50、1． 00mg /ml)
和紫杉醇( 4 × 10-5 mg /ml) ，37℃、5% CO2 饱和湿度下培养 24h
后处理过的细胞用 0． 125%胰蛋白酶消化后收集细胞，用 Trizol
试剂提取 Caski总 ＲNA，按说明书操作。总 ＲNA经紫外分光光
度计测定 260nm与 280nm处光密度比值( D260 /D280) 为 1． 8 ～
2． 0。将提取的 ＲNA 反转录为 cDNA( 按照反转录试剂盒严格
操作) ;在 ＲNase Free处理过的反应管中加入 SYBＲ Premix Ex
TaqTM II ( 2X) 12． 5μ ( 灭菌蒸馏水) 8． 5μl，最终反应体系为
25μl。将样品放入实时定量 PCＲ 扩增仪中按 95℃预变性 30s、
95℃变性 5s、退火 30s、72℃延伸 20s 条件扩增 30 次，利用 PCＲ
仪汇出扩增曲线，进行结果分析。
1． 5． 5 Western blot 检测 Survivin、Bcl-2、Bax 蛋白表达 将
Caski细胞分别用南赤瓟醇提物组 ( 0． 25、0． 50、1． 00mg /ml) 和
紫杉醇( 4 × 10-5mg /ml) ，37℃、5% CO2 饱和湿度下培养 24h 后
处理过的细胞用 0． 125%胰蛋白酶消化后收集细胞，用蛋白提
取试剂盒提取 Caski细胞蛋白，进行蛋白定量后，加样品缓冲液
煮沸 5min，各取 20μl 加样; 10% 聚丙烯酰胺凝胶，在 120V、
28mA条件下电泳 1． 5h; 100mA 条件下 PVDF 膜转膜 2h; 5%脱
脂牛奶封闭，滴加 Survivin ( 1: 400) 、Bcl-2( 1: 500) 、Bax( 1: 500)
一抗，4℃过夜;用含 0． 1% Tween 20 的 TBS冲洗 5min × 3 次，再
加二抗( 1: 1000) 室温下孵育 2h，用 0． 1% TBST 冲洗 10min × 3
次，ECL发光检测，X 光片显影，扫描图像，测得各条带的灰度
值，以 β-actin为内对照标准化后，比较其表达量的变化。
1． 5． 7 统计分析 每项试验至少重复 3 次，所有实验结果的
数据以均数 ±标准差( x ± s) 表示，数据分析在 SPSS13． 0 统计软
件包上进行。
2 结果
2． 1 南赤瓟醇提物对 Caski细胞生长的影响 如表 2 所示，南
赤瓟醇提物在 0． 0625 ～ 2． 00mg /ml浓度范围内对 Caski细胞的
生长有显著抑制作用，而且随着南赤瓟醇提物浓度升高，其凋亡
率提高，与空白对照组比较，具有显著性差异，由表可以看出当
药物浓度为 50mg /ml时细胞抑制率达到最大为 47． 3%，经 IC50
分析软件进行计算其 IC50值为 56． 2mg /ml，在后续实验中，分别
用 25． 0、50． 0、1． 00mg /ml，南赤瓟醇提物进行实验。
表 2 南赤瓟醇提物对 Caski细胞生长的影响( 珋x ± s，n = 5)
组别 剂量( mg /ml) 吸光度 抑制率( % )
空白对照 1． 213 ± 0． 03 0． 00 ± 0． 00
南赤瓟醇提物 0． 0625 0． 994 ± 0． 05 18． 1 ± 0． 04＊＊
0． 125 0． 827 ± 0． 02 31． 8 ± 0． 03＊＊
0． 25 0． 751 ± 0． 03 38． 1 ± 0． 06＊＊
0． 50 0． 639 ± 0． 04 47． 3 ± 0． 03＊＊
1． 00 0． 475 ± 0． 05 60． 8 ± 0． 04＊＊
2． 00 0． 401 ± 0． 04 66． 9 ± 0． 02＊＊
与空白对照组相比 * P ＜0． 05，＊＊P ＜0． 01( 下同)
2． 2 南赤瓟醇提物对 Caski 细胞凋亡的影响 由表 2 可见，
Caski细胞经南赤瓟醇提物 ( 0． 25、0． 50 和 1． 00mg /ml) 处理后
出现了明显的凋亡，而且随着南赤瓟醇提物浓度增加凋亡率提
高，与空白对照组比较，具有显著性差异，其中南赤瓟醇提物 1．
00mg /ml组作用效果与紫杉醇 4 × 10-5mg /ml剂量组较为接近。
表 3 南赤瓟醇提物对 Caski细胞凋亡率的影响( 珋x ± s，n = 5)
组别 剂量( mg /ml) 凋亡率( % )
空白对照 2． 13 ± 0． 34
南赤瓟醇提物 0． 25 23． 07 ± 3． 27 ＊＊
0． 50 35． 68 ± 2． 66 ＊＊
1． 00 48． 35 ± 5． 64＊＊
紫杉醇 4 × 10-5 60． 92 ± 3． 15＊＊
151中药药理与临床 2015; 31( 4)
2． 3 南赤瓟醇提物对 Caski细胞凋亡形态学特征观察 如图
1 所示，Caski 细胞经 Hoechst 33258 荧光染色后，荧光显微镜下
可见空白组细胞膜完整、胞质饱满，呈低荧光强度，细胞胞核圆
形或椭圆形，核形态饱满，染色质分布均匀，折光性好;用南赤瓟
醇提物( 0． 25、0． 50 和 1． 00mg /ml) 处理后，可见细胞皱缩，核呈
致密浓染，呈亮蓝色荧光，同时也可见凋亡小体的形成，其中以
1． 00 mg /ml南赤瓟醇提物剂量组作用效果更为显著，其作用效
果与紫杉醇 4 × 10-5mg /ml剂量组较为相似。
图 1 南赤瓟醇提物对 Caski细胞凋亡形态影响
A:空白对照; B:南赤瓟醇提物 0． 25mg /ml; C: 南赤瓟醇提物 0． 50mg /ml; D:南赤瓟醇提物 1． 00mg /ml; E:紫杉醇 4 × 10-5mg /ml
2． 4 南赤瓟醇提物对 Caski 细胞 Survivin 和 Bcl-2、Bax mＲNA
表达的影响 如表 4 和图 2 所示，空白对照组中 Survivin 和
Bcl-2 mＲNA 表达水平明显升高，Bax 表达水平显著降低; 用南
赤瓟醇提物( 0． 25、0． 50 和 1． 00mg /ml) 处理后可使 Survivin 和
Bcl-2 表达水平降低，Bax表达水平升高，Bcl-2 /Bax的比值降低，
且随着南赤瓟醇提物浓度增加其作用效果更为明显，与空白对
照组比较具有显著性差异，其中南赤瓟醇提物 1． 00mg /ml 组作
用效果与紫杉醇 4 × 10-5mg /ml剂量组较为接近。
表 4 南赤瓟醇提物对 Caski细胞 Survivin和 Bcl-2、Bax mＲNA表达
的影响( 珋x ± s，n = 4)
组别
剂量
( mg/ml)
Survivin /GAPDH Bcl-2 /GAPDH Bax /GAPDH Bcl-2 /Bax
空白对照 0． 291 ± 0． 020 0． 262 ± 0． 029 0． 168 ± 0． 029 1． 592 ± 0． 278
南赤瓟醇提物 0． 25 0． 235 ± 0． 034＊＊ 0． 218 ± 0． 019* 0． 190 ± 0． 042 1． 193 ± 0． 282*
0． 50 0． 188 ± 0． 051＊＊ 0． 184 ± 0． 044＊＊ 0． 276 ± 0． 026＊＊ 0． 664 ± 0． 135＊＊
1． 00 0． 162 ± 0． 044＊＊ 0． 152 ± 0． 035＊＊ 0． 318 ± 0． 036＊＊ 0． 492 ± 0． 164＊＊
紫杉醇 4 × 10-5 0． 125 ± 0． 027＊＊ 0． 131 ± 0． 021＊＊ 0． 401 ± 0． 028＊＊ 0． 345 ± 0． 127＊＊
图 2 南赤瓟醇提物对 Caski细胞 Survivin和 Bcl-2、BaxmＲNA表达的影响
1:空白对照; 2:南赤瓟醇提物 0． 25mg /ml; 3:南赤瓟醇提物 0． 50g /ml; 4:南赤瓟醇
提物 1． 00mg /ml; 5:紫杉醇 4 × 10-5mg /ml
2． 5 南赤瓟醇提物对 Caski细胞 Survivin和 Bcl-2、Bax蛋白表
达影响 如表 5 和图 3 所示，空白对照组中 Survivin 和 Bcl-2
蛋白表达水平明显升高，Bax表达水平显著降低;用南赤瓟醇提
物( 0． 25、0． 50 和 1． 00mg /ml) 处理后可使 Survivin和 Bcl-2 表达
水平降低，Bax表达水平升高，Bcl-2 /Bax 的比值降低，且随着南
赤瓟醇提物浓度增加其作用效果更为明显，与空白对照组比较
具有显著性差异，其中南赤瓟醇提物 1． 00mg /ml 组作用效果与
紫杉醇 4 × 10-5mg /ml剂量组较为接近。
表 5 南赤瓟醇提物对 Caski细胞 Survivin和 Bcl-2、Bax 蛋白表达的
影响( 珋x ± s，n = 4)
组别
剂量
( mg/ml)
Survivin /β-actin Bcl-2 /β-actin Bax /β-actin Bcl-2 /Bax
空白对照 0． 718 ± 0． 078 0． 392 ± 0． 033 0． 204 ± 0． 048 2． 031 ± 0． 385
南赤瓟醇提物 0． 25 0． 586 ± 0． 096* 0． 308 ± 0． 053* 0． 312 ± 0． 067* 1． 060 ± 0． 264＊＊
0． 50 0． 341 ± 0． 074＊＊ 0． 221 ± 0． 043＊＊ 0． 641 ± 0． 069＊＊ 0． 348 ± 0． 065＊＊
1． 00 0． 304 ± 0． 071＊＊ 0． 164 ± 0． 033＊＊ 0． 707 ± 0． 021＊＊ 0． 233 ± 0． 053＊＊
紫杉醇 4 × 10-5 0． 237 ± 0． 039＊＊ 0． 128 ± 0． 041＊＊ 0． 814 ± 0． 045＊＊ 0． 201 ± 0． 071＊＊
图 3 南赤瓟醇提物对 Caski细胞 Survivin和 Bcl-2、Bax蛋白表达的影响
1:空白对照; 2:南赤瓟醇提物 0． 25mg /ml; 3:南赤瓟醇提物 0． 50g /ml; 4:
南赤瓟醇提物 1． 00mg /ml; 5:紫杉醇 4 × 10-5mg /ml
3 讨论
宫颈癌是危害妇女健康的主要恶性肿瘤之一，由于其恶变
程度高，易复发，且死亡率高，当前已成为全球性的公共卫生问
题［5］。在我国每年仅新发病例就达 13． 5 万人，占 28． 7%，在男
女两性癌症中居第 5 位，占全部癌症的 7． 3%，其病死人数占全
部恶性肿瘤病死人数的 18． 4%［6］，尤其值得关注的是，当前我
国宫颈癌的发病率不仅出现明显的上升趋势，而且呈现底年龄
化。因而，在我国宫颈癌的防治任务显得尤为艰巨［3，7］。近年
来，来源于传统民族民间的天然药物，由于其抗癌疗效确切、毒
副作用小、民间临床用药历史悠久等多方面综合优势，而再次成
为治疗癌症的活性先导化合物的宝库［8］。在前期研究中，我们
发现南赤瓟提取物可显著诱导人宫颈癌 Hela细胞凋亡作用，并
251 中药药理与临床 2015; 31( 4)
在裸鼠移植瘤模型上发现其对人宫颈癌 Caski细胞移植瘤的生
长具有明显的抑制作用［2 ～ 4］。本研究拟在此基础上，观察南赤
瓟提物对人宫颈癌 Caski细胞抑制作用，并从 Survivin基因表达
与 Bcl-2 蛋白家族关系探讨其可能的作用机制，为此我们进行
了本实验。实验结果显示南赤瓟提物在不同浓度 ( 3． 125、4．
6875、6． 25、9． 375、12． 5、18． 75、25． 0、50． 0μg /mL) 作用 24h后对
Caski 细胞生长均有抑制作用，而且随着浓度的增加和作用时间
的延长，其抑制作用更加明显。实验表明南赤瓟醇提物对 Caski
细胞生长的抑制作用与药物作用的浓度有密切关系。
Survivin是凋亡抑制蛋白家族成员之一，其作为抗肿瘤特异
性靶标的独特之处在于:首先，它在成人正常组织中不表达，而
在几乎所有的人类肿瘤中高表达［9，10］，如肺癌、宫颈癌、乳腺癌、
结肠癌、胃癌、食管癌、胰腺癌、肝癌、卵巢癌等中高表达，因而具
有高度的肿瘤特异性［11，12］。其次，强大的抗凋亡能力。Survivin
是迄今为止发现的功能最强大的凋亡抑制因子，在介导肿瘤细
胞的无限增殖中发挥了重要作用。肿瘤组织过表达 Survivin 可
以避开凋亡检查点，对抗多种广泛的凋亡诱导，使细胞进行异
常的有丝分裂，造成细胞增殖与凋亡的平衡被打破，最后导致
癌症的发生［13］。其次，Survivin 不仅与肿瘤细胞的生成、生长、
增殖、凋亡、血管生成、演变成及预后明显相关，而且与肿瘤耐药
机制的形成有关，能增加肿瘤细胞对放化疗的耐受性［14，15］。在
实验中，我们发现 Caski 细胞经南赤瓟醇提物处理后 Survivin
mＲNA和蛋白表达水平显著降低，其作用效果与紫杉醇较为相
似。实验结果表明南赤瓟醇提物对 Caski细胞凋亡促进作用可
能与其抑制 Survivin表达有关。
细胞凋亡是生物体细胞在正常生理或病理状态下所发生
的一种自发的、程序化的死亡过程，是一切生物正常胚胎发生
过程和人类发育过程中细胞清除的一种方式。这一过程出现
调节异常，将会导致许多疾病的发生。比如肿瘤，它的发生与细
胞凋亡的调节异常有密切关系，它不但参与肿瘤的起始过程，
而且与肿瘤的发生、发展密切相关［16］。因此，围绕肿瘤细胞凋
亡及其增殖抑制作用开展的分析成了筛选和评价先导化合物
抗肿瘤活性的重要指标。通常情况下，细胞凋亡可通过死亡受
体途径，线粒体途径，及近年发现的内质网途径来实践，其中前
两者为最常见凋亡途径。近年来研究表明线粒体途径在细胞
凋亡过程中扮演着重要极为重要的角色，被形象地称为细胞凋
亡的燃烧室。在这个调控过程中，Bcl-2 家族蛋白备受关注，
是细胞凋亡进程中的重要主要调节因子，它由抗凋亡蛋白( 如
Bcl-2，Bag-1，Bcl-x，Mcl-1 等) 和促凋亡蛋白 ( 如 Bax，Bak，Bad，
Bid等) 组成，其中 Bcl-2 基因与 Bax基因结合形成异二聚体，当
Bax表达增强时，Bax 同源二聚体形成增多，细胞凋亡加速; 当
Bcl-2 表达增多时，Bax同源二聚体解离，形成 Bcl-2 /Bax异源二
聚体，发挥着抑制细胞凋亡作用，因此，Bcl-2 /Bax的比率决定着
细胞的命运［17，18］。在实验中，我们分别用实时定量 PCＲ 和
Western blot检测了 Caski细胞在用南赤瓟醇取物处理后的 Bcl-
2 和 Bax表达水平，研究发现 Bax表达水平明显增加，Bcl-2 表达
和 Bcl-2 与 Bax的比值显著降低，实验结果与紫杉醇结果一致，
结果显示出较好的促进细胞凋亡作用，该实验结果与与 MTT分
析、流式细胞仪检测和细胞形态学观察到的细胞凋亡结果一
致。
综上所述，本研究证实南赤瓟醇提物对 Caski 细胞有显著
的抑制作用，其作用机制可能与上调 Bax mＲNA和蛋白表达，下
调 Survivin和 Bcl-2 mＲNA和蛋白表达及 Bcl-2 与 Bax 的比值有
关。
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351中药药理与临床 2015; 31( 4)
Studys of the inhibition effects from Thldiantha nudiflora Hemsl on Caski cells and
survivin gene expression and Bcl-2 protein family relationships
Jin Jiahong1，Wang Ailing2，Feng Tianyan3，He Haibo2＊＊，Qin Huilin2，Wang Junzhi2，Zhang Yongfeng2
( 1 Medical College of China Three Gorges University，Yichang 443002; 2 Hubei Key Laboratory of Natural Products Ｒesearch
and Development＆ Hubei Province Tujia Medicine Ｒesearch Institute，China Three Gorges University，Yichang 443002;
3 Shennongjia Juneng Pharmaceutical Co．，Ltd，Shennongjia 442400)
Objective: To investigate the inhibition effects of alcohol extraction from Thldiantha nudiflora Hemsl on Caski cells，and based on it，to
we explored its possible mechanism． Methods: Caski cells were treated with different concentration of alcohol extraction from Thldiantha
nudiflora Hemsl ( 0． 0625，0． 125，0． 25，0． 50，1． 00，2． 00mg /ml) for 24h; After Caski cells were treated with alcohol extraction from Thl-
diantha nudiflora Hemsl ( 0． 25，0． 50 and 1． 00mg /ml) and paclitaxel ( 4 × 10-5mg /ml) at 24h，the cell viability was determined by MTT as-
say，the apoptosis and apoptotic morphology were detected by flow cytometry and hoechst 33258 analysis; the expressions of survivin，Bcl-2
and Bax mＲNA and protein were detected by ＲT-PCＲ and western blot，and Bcl-2 /Bax ratio was analyzed． Ｒesults: The inhibitory effect of
alcohol extraction from Thldiantha nudiflora Hemsl on Caski cells displayed a significant dose response; alcohol extraction from Thldiantha
nudiflora Hemsl ( 0． 25，0． 50 and 1． 00mg /ml) and paclitaxel ( 4 × 10-5mg /ml) might significantly promote apoptosis ( P ＜ 0． 05，P ＜ 0． 01，
respectively) ; upregulate the mＲNA and protein expression levels of Bax，downregulate expression levels of survivin，Bcl-2 and Bcl-2 /Bax
ratio compared with the negative control group ( P ＜ 0． 05，P ＜ 0． 01，respectively) ． Conclusion: Alcohol extraction from Thldiantha nudiflora
Hemsl could effectively inhibit proliferation and induce apoptosis in Caski cells． The mechanism may be related to upregulating the Bax mＲ-
NA and protein expressions，downregulating the survivin，Bcl-2 mＲNA and protein expressions，decreasing Bcl-2 /Bax ratio．
Key words Thldiantha nudiflora Hemsl ( 南赤瓟) ; cervix cancer; Caski cells; apoptosis
六种中药四气药性对小鼠细胞因子受体的影响*
王晓东，李 莉，王 洲，杨 薇，刘亚欧，夏建英
(四川省中医药科学院，成都 610041)
摘 要 目的:通过 6 种中药对小鼠的细胞因子受体影响探索四气药性的免疫分子机理。方法: SD小鼠随机分正常对照组、
附子组、干姜组、肉桂组、黄连组、栀子组、知母组。6 种中药的水浓缩煎剂每天分别对各自的给药组小鼠灌胃 1 次，连续 10d，按照制
定的实验动物中医证候体征级别计分评定观察小鼠情况，10d小鼠眼球取血，用 Luminex xMAP technology液相悬浮芯片技术对小鼠
血浆进行可溶性 CD30( sCD30) 、可溶性白介素-1 受体Ⅰ( sIL-1ＲⅠ) 、可溶性白介素-2 受体 α( sIL-2Ｒα) 、可溶性白介素-4 受体( sIL-
4Ｒ) 、可溶性白介素-6 受体( sIL-6Ｒ) 等可溶性细胞因子受体指标的定量测定。结果:附子组的小鼠总进食量显著减少;肉桂组的小
鼠总饮水量显著增加;各给药组小鼠胃粘膜出血溃疡显著增加;附子组的小鼠 sCD30 显著增加;肉桂组的小鼠 sIL-1Ｒ1 显著增加;附
子组肉桂组的小鼠 sIL-2Ｒα显著增加;黄连组的小鼠 sIＲ-4Ｒ显著增加;附子组干姜组肉桂组黄连组的小鼠 sIL-6Ｒ显著增加。结论:
为受试中药药性的细胞因子受体信号转导表征免疫分子机理探索提供中医理论的实验基础。
关键词 四气药性;细胞因子受体
中药药性理论是在中医理论指导下形成的对中药独特认
知的理论，融合了中国古代哲学思想，是中药本质属性的经验
概括和理论升华。四气药性理论是中药药性理论的基础和核
心。近年来，学者们利用多种现代科技手段和多学科知识，多角
度、多层次对中药四性理论进行深入的研究，探寻中药四性理
论的物质基础，取得了一定的成果，但由于认识与方法水平的
限制，未能从根本上阐明中药四气药性理论的科学内涵。四气
从本质而言只有寒热二性，凡寒凉性药物，即表示具有清热、泻
火、凉血、解热毒等作用，凡温热性药物，即表示具有温里散寒、
补火助阳，温经通络、回阳救逆作用。温热属阳，寒凉属阴，在同
性质中又有程度上的差异，温次于热，凉次于寒。我们在前期运
用温里药制造动物热证模型的研究中发现，热性中药除了产生
造模组动物舌象舌色红透、舌苔斑驳、舌质干腻，烦躁尿黄、牙龈
粘膜红肿出血、舌色质红等胃热阴虚血热证候症状，以及血液、
病理微观的相应证候变化外，用 ELISA 酶联免疫法定量测定大
鼠绒毛膜促性腺激素( CG) 、雌三醇( E3 ) 、胎盘催乳素 ( ＲPL) ，
小鼠促肾上腺皮质激素( EGF) 、小鼠血栓素 B2 ( TXB2 ) 、小鼠 6-
酮前列腺素 F1α( 6KPGF1α) ，还可引起动物机体在这些生殖激
451 中药药理与临床 2015; 31( 4)
* 基金项目: 四川省中医药管理局应用基础研究基金项目( 2014-F-085)
DOI:10.13412/j.cnki.zyyl.2015.04.048