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甘西鼠尾草与丹参主要成分含量的测定



全 文 :第35卷第6期          西 南 大 学 学 报 (自然科学版)           2013年6月
Vol.35 No.6 Journal of Southwest University(Natural Science Edition) Jun. 2013
文章编号:1673-9868(2013)06-0156-04
甘西鼠尾草与丹参主要成分含量的测定

吕露阳, 刘 圆, 张志锋, 曾 锐, 张吉仲
西南民族大学 民族医药研究院,成都610041
摘要:目的:建立高效液相色谱法测定甘西鼠尾草中的主要成分含量,并与丹参作对比.方法:采用Dikma Dia-
monsil-C18(4.6×250mm,5μm),0.026%磷酸水溶液-乙腈为流动相,梯度洗脱,流速为1mL/min,柱温30℃,
检测波长280nm.结果:本含量测定方法的线性、准确度、精密度和重复性均良好.结论:本法简便可行、重复性
好,可用于甘西鼠尾草中脂溶性与水溶性成分的同时测定.甘西鼠尾草中的主要水溶性成分是迷迭香酸而不是丹
酚酸B,甘西鼠尾草中的迷迭香酸和丹参酮ⅡA的含量高于丹参,丹酚酸B的含量低于丹参.
关 键 词:甘西鼠尾草;丹参;含量;高效液相色谱
中图分类号:R931.6 文献标志码:A
甘西鼠尾草(Salvia przewalskii Maxim)又名大紫丹参、紫丹参、甘肃丹参、红秦艽,是丹参的同科同
属植物.它的主要有效成分与丹参类似,被分为两类,一类是水溶性的酚酸类,如丹酚酸B;另一类是脂溶
性的丹参酮类,如丹参酮Ⅱ-A、隐丹参酮[1]等.甘西鼠尾草作为丹参代用品已有至少三百年的历史,在国
内多达11个省作为丹参使用,它的天然蕴藏量大,广泛分布于我国的西部高原地区,并且在全国大部分省
区均有栽培[2].早在20世纪70年代,国内学者就发现甘西鼠尾草的水溶性成分与丹参相近,丹参酮类成
分比正品丹参高数倍,甘西鼠尾草具有进一步推广应用的价值,已成为研究者共识[3],但是中国药典只收
载有丹参,甘西鼠尾草仅收录于《云南省药品标准》(1974年版)和《甘肃省中药材质量标准》(1995年版)中,
由于受早期测定仪器的限制,测定方法落后,含量测定指标也有限,所以急需对甘西鼠尾草进行成分、药
效等方面的深入研究,并建立其质量控制体系,以充分地开发和利用这一重要的药用资源.中国药典2010
版对丹参的含量测定以丹酚酸B和丹参酮ⅡA两种主要成分作对照,并且以两个不同流动相来分别测定这
两个指标成分的含量,但甘西鼠尾草中主要成分不止上述两种,并且两种流动相操作较繁琐.为了全面反
应甘西鼠尾草的质量,也为简化操作,本文参考数篇以梯度洗脱法同时测定丹参中脂溶性和水溶性成分含
量的方法报道[4-8],建立了以丹参素、迷迭香酸、丹酚酸B、二氢丹参酮Ⅰ、隐丹参酮、丹参酮Ⅰ、丹参酮
ⅡA共7个对照品为含量测定指标的高效液相色谱法,并与丹参的主要成分含量进行了比较,为甘西鼠尾
草的进一步开发提供参考.
1 材 料
Shimadzu L2010C高效液相色谱仪(四元泵,自动进样器,LC solution色谱工作站);色谱柱Dikma
Diamonsil-C18(4.6×250mm,5μm);Dikma C18保护柱.甲醇为分析纯(成都化学试剂有限公司),乙腈为
色谱纯(Honeywel,USA),纯化水(Aquapro,颐洋科技发展有限责任公司),磷酸(成都化学试剂有限公
司),对照品:丹参素(1),丹参酮I(6)均购自中国药品生物制品检定所.迷迭香酸(2),丹酚酸B(3),二氢
① 收稿日期:2012-12-01
基金项目:西南民族大学中央高校基本科研业务费专项资金资助项目(12NZYQN14);国家科技支撑计划项目(2012BAI27B07).
作者简介:吕露阳(1974-),女,成都人,博士,主要从事民族药物开发方面的研究.
丹参酮I(4),隐丹参酮(5),丹参酮IIA(7)由作者分离得到,经1 H-NMR、13C-NMR、MS鉴定,HPLC检
查含量大于98%.甘西鼠尾草采自四川康定地区,丹参采自四川中江丹参基地.
2 色谱条件
流动相:(A)0.026%磷酸水溶液,(B)乙腈,梯度为0~30min 5%~36%B,30~40min 36%~60%
B,40~60min 60%~73%B,60~75min 73%~5%B.流速为1mL/min,柱温30℃,进样10μL,检测
波长为280nm.
3 方法与结果
3.1对照品溶液制备
分别精密称取丹参素、迷迭香酸、丹酚酸B、二氢丹参酮Ⅰ、隐丹参酮、丹参酮Ⅰ、丹参酮ⅡA对照品,
用75%甲醇溶解定容,制成丹参素22.11μg/mL、迷迭香酸77.09μg/mL、丹酚酸B 227.11μg/mL、二氢
丹参酮Ⅰ14.61μg/mL、隐丹参酮10.61μg/mL、丹参酮Ⅰ10.22μg/mL、丹参酮IIA 21.00μg/mL的对
照品溶液.
3.2样品溶液制备
取甘西鼠尾草粉末(过60目筛),精密称取约0.25克,装入具塞锥形瓶,加75%甲醇20mL,称定重
量,超声提取60min,加75%甲醇补足重量.0.45μm微孔滤膜滤过,取续滤液即为样品溶液
[7-8].
3.3线性范围
精密吸取对照品溶液1,2,5,10,25,50μL进样,按上述色谱条件测定峰面积,以进样量(C)对峰面积
(A)作图,得到各自的标准曲线,其回归方程及相关系数如表1所示.
表1 线性方程
对照品 回归方程 相关系数 线性范围/μg
丹参素 A=799 594C+834  0.999 5  0.02~1.11
迷迭香酸 A=1 657 586C-3 770  0.999 8  0.07~3.86
丹酚酸B  A=1 162 367C+11 991  0.999 5  0.22~11.36
二氢丹参酮Ⅰ A=4 197 381C+3 642  0.999 8  0.01~0.73
隐丹参酮 A=3 205 619C-973  0.999 5  0.01~0.50
丹参酮Ⅰ A=3 650 202C+2 496  0.999 6  0.01~0.50
丹参酮IIA  A=3 138 930C+2 470  0.999 7  0.02~1.05
3.4 精密度试验
精密吸取样品溶液连续进样5次,测定各峰面积,结果丹参素、迷迭香酸、丹酚酸B、二氢丹参酮
Ⅰ、隐丹参酮、丹参酮Ⅰ、丹参酮IIA 的 RSD分别为0.33%、0.45%、0.82%、0.73%、0.53%、
0.82%、0.77%.
3.5 重复性试验
取甘西鼠尾草粉末6份,按3.2项下方法平行操作得6份样品溶液,并进样测定,结果丹参素、迷迭香
酸、丹酚酸B、二氢丹参酮Ⅰ、隐丹参酮、丹参酮Ⅰ、丹参酮IIA的RSD分别为1.43%、1.56%、1.69%、
1.93%、1.66%、1.48%、1.87%.
3.6 加样回收试验
取甘西鼠尾草粉末,精密称取约0.12克,分别加入适量丹参素、迷迭香酸、丹酚酸B、二氢丹参酮I、
隐丹参酮、丹参酮I、丹参酮IIA对照品,按3.2项下方法操作并进样测定,计算回收率,结果丹参素、迷
迭香酸、丹酚酸B、二氢丹参酮I、隐丹参酮、丹参酮I、丹参酮IIA平均回收率分别为98.4%、100.9%、
99.5%、103.5%、99.7%、100.9%、99.5%、103.5%.RSD均在1.74%~2.88%之间,符合实验要求.
3.7 样品含量测定
取甘西鼠尾草及丹参药材,分别按3.2项下操作并测定,结果见图1表2.
751第6期         吕露阳,等:甘西鼠尾草与丹参主要成分含量的测定
1.丹参素;2.迷迭香酸;3.丹酚酸B;4.二氢丹参酮I;5.隐丹参酮;6.丹参酮I;7.丹参酮IIA.
图1 HPLC色谱图
表2 甘西鼠尾草与丹参药材有效成分含量比较
药材 样品 1  2  3  4  5  6  7 总丹参酮
甘西鼠尾草 1 * 1.05  0.42  0.11  0.12  0.12  0.68  1.03
2 * 2.60  0.44  0.10  0.09  0.12  0.55  0.86
3 * 1.50  1.08  0.05  0.06  0.10  0.31  0.52
丹参 1 * 0.15  5.48 * 0.01  0.01  0.18  0.20
2 * 0.24  4.88  0.01  0.01  0.01  0.20  0.23
3 * 0.22  4.80 * 0.01  0.01  0.22  0.24
  * 仅能检出.
4 讨 论
甘西鼠尾草的水溶性成分与丹参类似,但是甘西鼠尾草中的主要成分是迷迭香酸,不是丹酚酸B,其
迷迭香酸的含量高达2.60%,迷迭香酸也具有抗血栓和抗血小板聚集作用和抗氧化、清除自由基作用、抗
炎与免疫抑制等多种活性且作用确切,可用作治疗自由基引起的多种疾患[9].甘西鼠尾草中的丹参酮含量
高于丹参,其中以丹参酮ⅡA为最多,高达0.68%.甘西鼠尾草中既有高含量迷迭香酸,又有高含量的丹
参酮类成分,具有极大的进一步开发利用价值,甘西鼠尾草叶经试验也具有极强的抗氧化活性,有待于进
一步的研究利用[10].
丹参中的丹参酮类成分主要分布在红色的根皮部分,所以细的3号样品中丹参酮的含量较高,而粗的
1号样品中丹参酮的含量较低.本课题组在药材市场上还发现用红土染红植物根,冒充丹参药材的伪品,
多加工成饮片出售,所以购买时要注意鉴别.甘西鼠尾草1号样品根茎粗壮、扭曲,为多年生老根,丹参酮
含量最高;而3号样品根茎最细,丹参酮含量最低,其丹参酮含量可能与生长年限有关.
参考文献:
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Main Component Content Determination of
Salvia przewalski Maxim and Danshen(S.miltiorrhiza Bunge)
LLu-yang, LIU Yuan, ZHANG Zhi-feng,
ZENG Rui, ZHANG Ji-zhong
Ethnic Medicine Institute,Southwest University for Nationalities,Chengdu Sichuan 610041,China
Abstract:Objective:To establish an HPLC(high performance liquid chromatography)procedure for the
determination of the main components of Salvia przewalskii Maxim,with the result compared with Dan-
shen(S.miltiorrhiza Bunge).Methods:The column consisted of a Dikma Diamonsil reverse-phase C18
column(5μm,4.6×250mm).The mobile phase consisted of 0.026%phosphoric acid in water and aceto-
nitrile,using agradient program.The flow rate was kept at 1mL/min and the column temperature at 30
℃,and the UV detector was set at 280nm.Results:This method was shown to have good linearity,accu-
racy,precision and repeatability.Conclusion:The method is simple,feasible and reproducible,and can be
used for quality control of S.przewalskii.The main water-soluble component of S.przewalskiiis rosma-
rinic acid instead of salvianolic acid B.S.przewalskii has higher rosmarinic acid and tanshinone II and
lower salvianolic acid B than S.miltiorrhiza.S.przewalskii is valuable and worth further exploitation.
Key words:Salvia przewalskii Maxim;Danshen(Salvia miltiorrhiza Bunge);content;HPLC
责任编辑 汤振金    
951第6期         吕露阳,等:甘西鼠尾草与丹参主要成分含量的测定