全 文 ：药学学报 ^e ta p ha r m a e e u ti e a si n i e a 29 9 5 ; 30 ( 9 ) : 7 1 1~ 7 1 4
药用鼠尾草属植物中 7 种脂溶性成分的 H P C L法分析
孙 圣 何丽一
(中国医学科学院 、 中国协和 医科大学药物研究所 , 北京 1 0 0 0 5 0)
提要 采用 Y v v G 一 c l 。H 3 7柱 , 以甲醉一水 ( 7 ` 2 3) 为流动相 , 在 25 4 n m 检测波长下用 内标法测定
了 9 种药用鼠尾草属植物中丹参酮 n 一 B 、 紫丹参甲素 、 二氢丹参酮 l 、 隐丹参酮 、 丹参酮 I 、 丹参酮 1 一 A
及红根草邻酿的含量 。
关镇词 药用鼠尾草属植物 ;丹参酮类 ;高效液相色谱法
药用 鼠尾草属植物有活血化痰 、 凉血消肿的功效 。 药理 实验表明 : 隐丹参酮 、 二氢丹参酮
I
、 丹参酮 n 一 B 有抗菌作用 , 总丹参酮有抗炎作用 〔 , , 。 紫丹参甲素还有抗肿瘤活性 〔幻 。
有关鼠尾草属植物中脂溶性成分的高效液相色谱法除简洋辉等 〔 3 ,用正相高效液相色谱法
以两种流动相分离测定了 8种丹参酮外 ,其余方法均只测定其中 l ~ 3 种成分的含量 。 本实验
用一种流动相采用反相高效液相色谱法分析了 7 种脂溶性成分 (丹参酮 n 一 B 、 紫丹参甲素 、 二
氢丹参酮 1、 隐丹参酮 、丹参酮 I 、 丹参酮 n 一 A 、 红根草邻酿 ) 。 7种成分及内标均达基线分离 , 并
用建立的方法分析了 9 种鼠尾草属植物中 7 种成分的含量 。 方法简便 、 灵敏 、 准确 。 为寻找高
含量活性成分提供了一个实用的分析方法 。
实 验 部 分
仪器 、试剂和药品
高效液相色谱仪 s p 一 8 8 1 0 泵 , s ep e t r a 1 0 0 u v 检测器 , 4 4 0 0 积分仪 , Y w e 一 e l o H 3 7 ( 1 0 卿 )
In 4
.
0 m m x 2 5 0 m m
,预柱 R P 一 1 8 ( 10 林m ) In 4 . 0 m m x 5 0 m m ( s pe e t r a P h y s i e s ) , i 0 9 0M 二极管
阵列检测器 ( H e w l e t t P a e kar d ) ;离心机 ( L D S一 ZA ) 北京离心机厂 。 标准品 : 丹参酮 11一 B ( at n s h i -
n
on
e 11
一
B , l )
、 紫丹参甲素 ( p r z e w a q u i n o n e A , 2 ) 、 二氢丹参酮 I ( d ih y dr o at n s h in o n e l , 3 ) 、 隐丹参酮
(
e r y p toat
n s
hin
o n e , 4 )
、 丹参酮 I ( at n s h i n o n e l , 6 ) 、 丹参酮 11一 A ( at n s h in o n e 11一 ^ , 7 )及红根草邻酿
( sa p r o r t h oq u i n o n e
,
8 ) 上海药物所杨保津提供 , 二节基 (d i比 n z y l , 5 ) 化学纯 , hT e B r一t招h rD u g
H o
use
L
。 植物样品 本所植物室宋万志研究员提供并鉴定 。 甲醇为优级纯 ,水为重蒸馏水 ,其
余试剂均为分析纯 。
分离条件
比较了各种流动相 , 当甲醇一水 比例为 7 : 23 时 ,分离效果最佳 。 本实验 比较了流动相中
甲醇 比例对容量因子的影响 ,结果表明甲醇 比例变化对丹参酮 I 、 丹参酮 n 一 A 及红根草邻醒的
保留时间影响较大 。
本文于 19 9 5 年 3 月 1 3 日收到 。
DOI : 10. 16438 /j . 0513 -4870. 1995. 09. 015
药学学报 ^ et a P h a rm a eu et一 a esi n i a e 19 9 5. 3 0(9 ) : 7 1 1 ~7 14
色谱条件
色谱柱 二 Yv v G 一C , 。 H 3 7柱 ;流动相 : 甲醉一水 ( 7 7 : 2 3 ) ; 流速 : 1 . 0 m l · m in 一 ` ;检测波长 : 2 5 4
n m ;纸速 : 2 · 5 m m · m in 一 ` ;柱温 : 室温 ; 量程 : 0 . 0 0 5 A U FS ;内标 :二节基 ( 2 0 m s · m l一 ` ) 。 分离结
果见图 1 。
l
.t ( m组 )
F ig 1 H P L C e址o m a t o即 a lr ` o f s at n血 r ds ( A ) a n d s a r n P les ( B , C ) . A . S at n d a r ds ; B .
E x t r a e t o f 5
. 即 ; C . E次t r a e t Of 5 . 笋门护陇 , 翻沼 . 1 . T a n s h i n o n e 11一 B ; 2 . P r z e w a q u i n o n e A ; 3 .
D ih y d r o at n s h in on
e l ; 4
.
C r y tP o st nL s ih n on
e ; 5
.
I n et r n a l s t a n血 r d ; 6 . T an s h in o n e l ; 7 .
T a sn hj 的on e n 一 A ; 8
.
aS rP or t h oq
u in o ne
·
提取条件
曾用 H p T cL 方法对不同提取溶剂氯仿 、二氯 甲烷和二氯甲烷一甲醇的不 同比例 ( 3 : 1 ,
4 : 1 , 5
: 1及 6 : 1 ) ,不同提取方法 (超声提取 、 不同时间冷浸 )和对不同生药量与溶剂的比例
等进行了系统的比较 ,结果以 50 m g 生药中加入 10 ml 二氯甲烷一甲醉 (5 : 1) 冷浸 Z h 的提取
条件最佳 。
测定方法
精密称取粉碎并过 40 目筛的样品 50 m g ,精密加入 10 ml 二氯甲烷一甲醇 ( 5 : 1 ) , 冷浸 2
h 并不断振摇 , 离心 , 吸取上清液 s ml ,浓缩至干 , 加入少量氯仿溶解 , 加入相应量内标溶液 ( 20
m g
·
un
一 ` )
, 并用 甲醇定容至一定体积 ,混匀进样 , 按色谱条件进行分离测定 , 以内标法计算含
量 。
线性关系
精密称取 7 种脂溶性成分标准 品 1 , 2 , 3 , 4 , 6 , 7 及 8 , 用氯仿溶解 , 然后 用 甲醇定容 l(
m g
·
m l
一 `
)
。 分别吸取上 述标准贮备液及内标液一定量 , 用甲醇分别稀释 至 0 . 01 ~ 0 . 27
mg
·
m l一 ’ 的标准品及 5 m g · m l 一 `的内标物的系列标准溶液 ,混匀 , 各进样 5 以。 结果见表 l 。
T口 b 1 D a扭 of C . 】l b比 it o n C U vr e
R e g r已 5. 1叭 eq ua it on
Y = a 十 b X ( X = 昭 )
C o r t e 认 t i o n
CO e f f i C ie n t
、 ,声、声.了、产ó`,几几乙吸d通品匕.QU矛.、子`、了矛厅、.T肚班bj n 0 0 侣 11一 B Y二 1 . 2 2 X 一 1 . 4 1火 1 0一
Y二 0 . 9 2 X十 2 . 47 X 1 0一 `
Y二 1 . 5 9 X + 2 . 00 X 10 一 2
Y二 1 . 0 5 X + 9 . 2 4 X 10一
Y = 1
.
0 0 X + 5
.
60 X 10 一 ,
Y二 1 . 35 X + 3。 2 6 X 10 一 ,
Y = 1
.
2 4 X一 1 . 0 0 X 10 一 :
0
。
9 9 99
0
.
9 99 7
0
。
99 9 8
0
。
99 9 8
0
.
9 9 9 5
0
。
9 9 9 7
0
。
9 9 9 7
Lin e a l r川堪 e
(昭 )
0
。
0 5 4~ 1
.
3 5
0
。
05 3~ 1
.
3 3
0
。
0 5 4~ 1
.
3 5
0
。
0 5 1~ l
。
2 8
0
.
0 5 2~ 1
.
2 9
0
。
0 5 0~ l
。
2 4
0
.
05 2 ~ 1
.
3 1
药学学报 ^ eta , h a r m a e e u t i e a S i n i e a 1 9 9 5 ; 3 0 ( 9 ) : 7 1 1~ 7 1 4
精密度试验
吸取 7种标准品与内标的混合液一定量 ,重复进样 10 次 , 测得 SR D 为 0 . 61 % ~ 2 . 7% 。
最小检测限
7 种成分的最小检出量为 5一 3 2 n s ( s / N ) 3 ) 。
回收率试验
取等量样品 6 份 , 其中 3 份加入混合标准溶液 ,按测定方法操作 ,结果见表 2 。
介 b 2 R es u l st of r ec o v e r y ( n = 3 )
M e 日 s U redA d d曰
(昭 )
R e c o v e r y
(% )
R S D
( % )
T a n s h i n o n e 11一 B
P r z e w a q u i n o n e A
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T a n s ih n o n e 11
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.、、
峰纯度检验
用 H P 1 0 9 0M 二极管阵列检测器检测所分离的色谱峰 , 实验结果表明 : 标准品与生药样品
中相应各成分的色谱峰的始端 、 顶端与末端三处的紫外吸收图谱均一致 ,说明用本法分离的色
谱峰纯度好 。
样品分析
用本法对 9 种药用鼠尾草属植物进行测定 ,结果见表 3 。
T a b 3 R es u 】st o f a n al y s is o f s a用n P les
e o n t e n r (% )
S p沈 les H a b i at t —1 2 3 4 6 7 8 T o at 】吕映初 如乒叨 L i梦即 g , Y un n an 0 . 0 16 0 . 0 0 9 0 . 0 4 0 0 . 0 6 6 0 . 13 3 0 . 5 2 4 一 0 . 78 85 . 公政铆湘 T a ihZ ou , Z h e梦a n g 0 . 0 0 1 t r a沈 t r a ce tr a “ 0 . 0 5 7 0 . 0 0 5 一 0 . 0 6 38 . 尹恤月 L i刀a n g , Y u n na n 一 t r a eC t r a沈 t r a C t r a沈 t r a eC 一 t ar eC5 . 护嘴 . . . 翻日 Y u n n a n t咫ce t r a ce 0 . 0 0 7 0 . 0 0 1 0 . 0 1 6 0 . 0 0 4 一 0 . 0 2 88 . 翅匆俐 aD l巨, Y u n n an 0 . 0 0 1 tr a ce 0 . 0 0 2 t r a c e t r a ce 一 一 0 . 0 0 3S · 尸洲州脚翻 G ans u 0 . 0 3 4 0 . 0 2 4 0 . 0 0 2 0 . 0 9 0 0 . 2 4 6 1 . 0 9 1 一 1 . 48 75 . 翻 . 眼” A n h u i 0 . 0 0 1 * r a ce r r a e e 0 . 0 0 1 0 . 0 1 1 0 . 0 1 3 一 0 . 02 68 . 脚翻口目抽 L i j an g , Y u n na n 0 . 0 3 2 0 . 0 10 0 . 0 0 1 0 . 1 1 0 0 . 0 4 8 0 . 9 5 4 一 1 . 15 55 . 印 U 梦an g , Y un n a n 0 . 0 0 1 0 . 0 0 1 t r a ce 0 . 0 0 9 0 . 0 0 2 0 . 0 4 2 一 0 . 0 5 51 . aT n 曲 jn o n e 11一 B ; 2 . rP ze w a q u i n o n e A , 3 . D ih y d r韶 at n s址 n o n e l , 4 . C r ly) ot at n s h in o n e ;6 . T an s h in o n e l , 7 . T a n s h in o n e 11一 A , 8 . 助 P r o rht o q u i n o n e .讨 论
样品提取液离心后的上清液浓缩至干后 , 必需加入少量氯仿溶解 ,否则会因脂溶性成分在
甲醇中溶解不完全而导致结果偏低 。
7 4 1药学学报 A eta h Pa rm a eu eti ea S i n i ea 19 9 5 ; 3 0( 9 ) : 7 1 1一 7 14
从测定结果看 ,不同种鼠尾草属植物中各成分含量有较大差异 , 其中以甘西 鼠尾草总丹
参酮含量最高 。
参 考 文 献
高玉桂 ,宋玉梅 ,杨友义等 . 丹参酮的药理 . 药学学报 , 197 9 , “ , “
杨保津 , 钱名塑 ,秦国伟等 . 丹参有效成分的研究 . 药学学报 , 1 9 81 , 1 6 : 83 7
简洋辉 ,徐国钧 ,金蓉莺等 . 中药丹参的质量研究 . 中国药科大学学报 , 19 89 , 20 : 5
H P L C A N A LY S I S O F T A N S H IN O N E S IN
M E D I C IN A L P L A N T S O F G E N U S S A L V I A
P S l n a n d L Y H e
(才沁戍“ 胡触 of M i侧冶r如 月诚友扛 , hC
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A〔渤如刀; of M翻反汉 召瓦曰哈努
亡期己凡七姚g U介姗 卫毓七创 〔h 处卯 , 撇乒砚 9 1 0 0 0 5 0 )
A B S T R C T A n e w H P LC m e t h ed u s i n g d ibe n z y l a s in te r n a l s at n血 r d f o r t h e d e t e rm i n a t i o n o f
at n s h i n o n es i n m e d ica l Pl a n t s o f G e n u s S of Z初 w a s de v e lo ep d . Ex ep r im e n at l r es u lst i n d ica t e t h a t th e
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Phase ca
n se 琳 r a t e a n d de t e r m i n e t h e se v e n 谊 n s hi n o n e s , n a m e l y at n s h i n o n e 11一 B , Pr z e w a qu in o n e A ,
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, e r y P t o at n s h i n o n e
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一
A a n d sa Pr o r t h oq u in o n e v e r y w e l l
u n d e r t h e w a v e l e n g t h 25 4 n m
.
T hi s m e t h od 15 s i m P le
,
se n s it i v e a n d a e e u r a te
.
T he e o n et n st o f se v e n
at n sh i n o n es in se v a r a l m ed i e i n a l Pl a n st o f G e n u s 及劝初 w e r e d e t e r m i n ed .
K e y w o r ds M ed i e i n a l Pl a n st o f G e n u s 吕欢初 ; T a n s ih n o n es ; H P LC