全 文 ：不同提取方法对苦苣菜多糖提取率的影响
刘占文 ,赵小亮　(塔里木大学生命科学学院 ,新疆阿拉尔 843300)
摘要　[目的]筛选苦苣菜多糖提取方法。 [方法]设计超声波、微波 、超声微波提取法与常规水溶提取法进行比较;以粗多糖提取率为
指标 ,评价测定方法。 [结果 ] 4种提取方法对苦苣菜多糖提取率有显著影响(P<0.05),超声 -微波协同提取法提取率最高 , 为
23.16%, 其次是微波 、水浴和超声波 ,提取率分别为 22.33%、20.98%和 19.54%。 [结论]超声微波协同提取法效果最好 ,即准确称取苦
苣菜干粉 5.0g,加入 100ml蒸馏水混匀后 ,置于超声-微波仪中提取。超声功率 50W,频率 50kHz,微波频率 2 450MHz;80℃条件下
提取 30min,过滤收集滤液 ,残渣重复提取 1次 ,合并滤液 , 200ml定容 ,测定多糖含量。以葡萄糖为标准品 ,选用蒽酮-硫酸比色法 , 葡
萄糖浓度线性范围为 10～ 100μg/ml,比色波滤为 620nm,平均回收率为 100.29%, RSD值为 0.22%(n=5)。
关键词　苦苣菜多糖;超声-微波协同萃取;微波;超声波;提取方法考察
中图分类号　R284.2　　文献标识码　A　　文章编号　0517-6611(2010)17-08960-02
EfectsofDiferentExtractionMethodsonExtractionRateofPolysaccharidefromSonchusoleraceusL.
LIUZhan-wenetal　(ColegeofLifeScience, TarimUniversity, Alar, Xinjiang843300)
Abstract　[ Objective]TheaimwastoscreenmethodforextractingpolysaccharidefromSonchusoleraceusL.[Method] Ultrasonicwave, micro-
waveirradiationandUltrasonic-microwavesynergisticextractionmethodweredesignedtocomparewithwaterbathmethod.Withextractionrateof
crudepolysaccharideasanindicator, themethodswereevaluated.[ Result] Fourextractionmethodsalhavesignificantinfluencesonextraction
rateofS.oleraceuspolysaccharide(P<0.05), theextractionrateofultrasonic-microwavesynergisticmethodwashighestas23.16%, folowedby
microwave, waterbathandultrasonicwave, withextractionrateas22.33%, 20.98%and19.54%.[ Conclusion] Ultrasonic-microwavesynergistic
extractionmethodwasbest, accuratelyweigh5.0gS.oleraceusdrypowder, add100mldistiledwater, aftermixing, putonultrasound-microwave
instrumenttoextract.Ultrasonicpowerwas50W, frequencywas50 kHz;microwavefrequencywas2 450MHz.Under80℃, extractingfor30
min, andthroughfiltering, residuerepeatextractionfor1time, colectingfiltrate, with200mlasconstantvolume, thepolysaccharidecontentwas
determined.Withglucoseasstandards, choosinganthrone-sulphuricacidcolorimetry, thelinearrangeofglucoseconcentrationwas10 -100
mg/ml, colorimetricwavelengthwas620nm, theaveragerecoveryratewas100.29%, RSDvaluewas0.22% (n=5).
Keywords　PolysaccharideofSonchusoleraceusL.;Ultrasonic-microwavesynergisticextraction;Microwave;Ultrasonicwave;Extractionmethod
exploration
基金项目　塔里木大学校长基金(TDZKQN09001)资助项目。
作者简介　刘占文(1980-), 男 ,山西朔州人 ,助教 , 从事细胞生物学
研究。
收稿日期　2010-02-26
　　苦苣菜 (SonchusoleraceusL.)系菊科(Compotae)1 ～ 2
年生草本植物 ,生于荒地 ,在我国南北方均有分布 ,其味苦 、
性寒 ,具有清热解毒 、凉血止血等作用 ,主治肠炎 、痢疾 、黄
疸 、咽喉肿痛 、吐血 、尿血等症 [ 1-3] 。苦苣菜含有丰富的蛋白
质 、脂肪 、维生素及多种对人体有益的矿物元素 [ 4-5] ,具有重
要的食用价值。近年来有关苦苣菜的研究越来越受到人们
的重视 ,胡佩卓等分别就苦苣菜的化学成分和脂溶性化学成
分作了研究 [ 2-3] ;董琳等测定了苦苣菜的总黄酮含量 [ 5] ;孙
国祥等建立了苦苣菜 HPLC数字化指纹图谱 [ 6] ;林敏等对苦
苣菜提取液清除亚硝基及·OH的活性作了研究 [ 7] 。但是到
目前为止 ,关于苦苣菜多糖的测定及提取方法未见相关报
道。多种植物的多糖具有抗癌 、消炎 、抗氧化 、免疫等生物学
活性 [ 8-9] ,苦苣菜多糖可能具有重要的药用价值。为此 ,笔
者对 4种苦苣菜多糖的提取方法进行了探讨 ,旨在为苦苣菜
多糖的后续研究提供理论基础 。
1　材料与方法
1.1　材料与设备
1.1.1　供试材料与预处理。苦苣菜(SonchusoleraceusL.)采
于塔里木盆地 ,阴干后粉碎 ,过 40目筛 ,无水乙醇预处理(60
℃、3 h)后自然风干备用 [ 10] 。
1.1.2　主要试剂。葡萄糖 、蒽酮 、硫酸 、无水乙醇等均为市
售 ,分析纯。
1.1.3　主要仪器。SartoriusBS210S型电子天平 ,由北京赛多
利斯天平有限公司生产;超声波清洗器 ,由上海精密仪器仪
表有限公司生产;CW22000型超声 -微波协同萃取仪 ,由上
海新拓微波溶样测试有限公司生产;GL-20B冷冻离心机 ,由
湘仪离心机仪器有限公司生产;RE52299型旋转蒸发仪 ,由
上海亚荣生化仪器厂生产;721型可见分光光度计 ,由无锡汉
唐仪器厂生产;HH2S型恒温水浴锅 ,由江苏省金坛市医疗仪
器厂生产。
1.2　方法
1.2.1　苦苣菜多糖的提取。
1.2.1.1　常规提取 。准确称取苦苣菜 5.0 g(精确至 0.001
g)置于 150 ml三角瓶中 ,加入 100 ml蒸馏水 ,于 80 ℃水浴
30min,过滤收集滤液 ,残渣在相同条件下重复提取 1次 ,过
滤合并 2次滤液 ,定容于 200 ml容量瓶中 , 3次重复。水浴
提取法相同 。
1.2.1.2　超声波提取法。准确称取 “1.1.1”中的苦苣菜 5.0
g置于 150 ml三角瓶中 ,加入 100 ml蒸馏水 ,摇匀后置于超
声清洗器中 ,超声功率 120W,频率 59kHz,置于 25℃条件下
提取 30 min,过滤收集滤液 ,残渣重复提取 1次 ,过滤合并 2
次滤液 ,定容至 200 ml容量瓶中待用 ,试验设 3次重复。
1.2.1.3　微波提取法。准确称取 “1.1.1”中的苦苣菜 5.0
g,加入 100 ml蒸馏水混匀后置于微波提取仪中 ,微波功率
500 W, 80 ℃条件下提取 30 min,过滤收集滤液 ,残渣重复提
取 1次 ,过滤合并 2次滤液 ,定容至 200 ml容量瓶中待用 ,设
3次重复。
1.2.1.4　超声 -微波法。准确称取 “1.1.1”中的苦苣菜 5.0
g,加入 100 ml蒸馏水混匀 ,置于超声 -微波协同提取仪中 ,
超声功率 50W,频率 50 kHz;微波功率 2 450 MHz;80 ℃条件
责任编辑　夏静　责任校对　卢瑶安徽农业科学 , JournalofAnhuiAgri.Sci.2010, 38(17):8960-8961
下提取 30 min,过滤收集滤液 ,残渣重复提取 1次 ,过滤合并
2次滤液 ,定容至 200 ml容量瓶中待用 ,设 3次重复。
1.2.2　最大吸收波长的选取。精密吸取一定浓度的样品溶
液 1 ml置于具塞试管中 ,加入 4 ml蒽酮 -硫酸溶液 ,盖上
塞 ,摇匀后迅速浸于冰水浴中冷却 ,后浸于沸水浴中 ,自水浴
重新煮沸起 ,煮沸 8 min后立即取出 ,用自来水冷却 10 min
后 ,于波长 400 ～ 700 nm测定吸光度 ,寻找最大吸收峰 。
1.2.3　标准曲线的制作。准确称取干燥至恒重葡萄糖 1.0
g于 1 000ml容量瓶中 ,得 1mg/ml葡萄糖母液 ,然后分别吸
取葡萄糖母液一定量稀释得 10、20、40、60、80和 100 μg/ml
葡萄糖系列标准溶液 ,分别吸取标准溶液 1 ml于具塞试管
中 ,然后加入 4ml蒽酮 -硫酸溶液(准确称取 0.15 g蒽酮用
浓硫酸定溶于 50 ml棕色容量瓶中),摇匀后立刻放入冰水
中后 ,于沸水中煮沸 8 min,迅速取出冷却至室温 ,以蒸馏水
为空白对照 ,测定吸光度。以葡萄糖浓度(C)对其吸光度
(A)作图。
1.2.4　稳定性试验。取 1mg/ml葡萄糖标准溶液及样品溶
液按标准曲线制备项下的方法测定其吸光度 ,每隔 20min测
定 1次。
1.2.5　回收率试验。准确称取处理后苦苣菜 5.0 g置于 150
ml三角瓶中 ,分别加入 2 mg/ml葡萄糖 0、1.2、1.4、1.6、1.8、
2.0 ml,蒸馏水补足 100ml,按 “1.2.1”方法提取 。
1.2.6　苦苣菜多糖含量的测定。精确吸取 “1.2.1”中各溶
液 1 ml定容于 100ml容量瓶中 ,然后按标准曲线的方法测
定吸光度 ,计算含量。
2　结果与分析
2.1　方法学考察
2.1.1　标准曲线的绘制 。按 “1.2.2”和 “1.2.3”方法操作 ,
结果选择比色波长为 620 nm;以葡萄糖浓度为横坐标 ,吸光
度值为纵坐标 ,作图并计算出其回归方程。得回归方程为
A=0.007 6C+0.002 4, R=0.999 2(n=6)。葡萄糖浓度在
10 ～ 100 μg/ml范围内与吸光度呈良好的线性关系 。
2.1.2　稳定性和回收率试验。按 “1.2.4”和 “1.2.5”方法操
作。结果表明 ,该方法稳定性良好 ,标准溶液及样品溶液显
色时间一致 ,且在 2h内稳定。回收率试验结果表明 ,该提取
方法可靠 ,平均回收率为 100.29%, RSD值为 0.22%。
2.2　4种不同提取方法的苦苣菜多糖测定结果　按 “1.2.1”
方法进行操作 ,得 4种不同提取法的苦苣菜多糖测定结果
(表 1)。由表 1可知 ,方法①与②之间存在显著差异(P<
0.05);①与③、④之间存在极显著差异(P<0.01)。 4种提
取方法中以超声 -微波协同法效果最好 ,与其他 3种提取方
法均存在显著差异(P<0.05)。
3　讨论
(1)笔者选用无水乙醇对样品进行了预处理 ,避免了色
表 1　4种提取方法苦苣菜多糖的平均含量及方差分析结果(n=3)
Table1　MeancontentofS.oleraceuspolysaccharidewithfourkinds
ofextractionmethodsandtheresultsofvarianceanalysis
提取方法
Extractionmethod
平均含量∥%
Averagecontent
RSD值∥%
RSDvalue
①超声 -微波协同 23.16aA 0.91
Ultrasonic-microwavesynergistic
②微波 Microwaveirradiation 22.33bA 0.37
③水浴 waterbath 20.98cB 1.00
④超声波Ultrasonicwave 19.54dC 1.39
　注:表中同列不同大、小写字母分别表示在 0.01、0.05水平上差异显著。
　Note:Diferentcapitalletersandlowercasesstandforsignificantdifer-
encesat0.01and0.05level.
氨酸在蒽酮 -硫酸比色法中对多糖显色造成的干扰 [ 10] ,同
时采用葡萄糖制作标准曲线 ,线性相关良好 ,保证了多糖含
量测定方法的可靠性。
(2)水浴 、超声波 、微波以及超声 -微波协同法 4种方法
对苦苣菜多糖提取率的影响差异显著(P<0.05)。结果表明
超声 -微波协同法提取效果最好 ,加之超声 -微波协同法具
有操作简便 、省时 、安全等优点 ,故认为此法是苦苣菜多糖提
取的适宜方法。
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