全 文 ：2012 年第 10 期 XINJIANG NONGKEN KEJI
收稿日期：2012—08—20
不同方法提取刺山柑叶片多糖对比分析
黄佳丽
（农九师一七○团―新疆 额敏 834615）
摘要： 分别采用水浴提取超声 - 微波协同萃取法和蒽
酮 - 硫酸比色法测定刺山柑多糖含量，对比其提取效果。 结
果表明，超声 - 微波协同萃取法提取多糖含量是水浴提取多
糖的 1.8 倍；正交试验表明,超声 - 微波协同萃取法提取多糖
的适宜条件为 10 min、80℃、1 ∶ 40，提取率为 8.88%。
关键词：山柑叶片；多糖；水浴超声 - 微波协同萃取；蒽
酮 - 硫酸法
刺山柑又称野西瓜， 为白花菜科山柑属植物。
是一种生长在炎热干旱气候条件下的半灌木，高 1.0
~ 2.5 m，叶圆形、倒卵形或椭圆形，长 1 ~ 5 cm，宽
1.0 ~ 3.5 cm，有短柄，顶端近圆形，具锐尖的小刺，基
部圆形，全缘无毛，幼叶和枝的顶端通常密生茸毛；
托叶为直立或弯曲的刺,长 2 ~ 6 mm。 花大，直径 4
~ 6 cm；花梗长 2.5 ~ 4.0 cm，着生叶胶；花茎外面有短
毛，花瓣倒卵形，长 2 ~ 3 cm，白色，少数为粉红色，雄
蕊多数。果近圆形或长圆形，肉质，长 2 ~ 4 cm，成熟时
开裂，有多数种子，种子肾形，褐色，花期 6 月，果期
8月[1]。刺山柑在我国主要分布于新疆天山南北石质
低山丘陵和坡地、山麓冲沟或戈壁滩。
多糖是一类天然大分子物质,分布广泛，功能多
样，多糖参与细胞各种生命活动的调节。 大量的研究
表明，植物多糖类化合物具有活化巨噬细胞作用，促
进淋巴细胞有丝分裂， 诱生细胞因子， 调节离子通
道，参与细胞信号传导作用,也是一种免疫调节剂［2］，
具有激活免疫细胞、改善机体免疫功能等作用。
1 实验材料
1.1 提取材料
取刺山柑叶子将其阴干，再将其中的病叶、烂叶
及杂质去除待用。
1.2 试剂
95%乙醇、磷酸、正丁醇、三氯甲烷、蒽酮、硫酸、
工业酒精、 工业石油醚、 考马斯亮蓝试剂和蒽酮 -
硫酸试剂等。
1.3 仪器
T6 紫外可见分光光度计、CW - 2000 超声微波
协同萃取仪、DZF - 6050 型真空干燥箱、KDM 型调
温电热套、 R520B 旋转蒸发仪、JA1203 电子分析天
平、KQ - C 玻璃仪器气流烘干器、SHZ - D3 予华牌
循环水真空泵、DF - 101S 集热式磁力加热搅拌器、
电子万用炉、索式提取器、筛子、烧瓶若干、小烧杯若
干、量筒和容量瓶若干等。
2 实验方法
2.1 材料预处理
将制干材料用重物碾碎过筛（筛号 10，方孔 2.0
mm），滤纸包住，放入索式提取器中，用电热套加热回
流，先用酒精回流至无色，再用石油醚回流 3 h，除去
色素及脂类物质，然后将其烘干待用。
2.2 标准曲线的绘制
称取经 105 ℃干燥至恒重的葡萄糖对照品
0.101 1 g置于 100 mL容量瓶中，加蒸馏水溶解定容
成葡萄糖标准溶液。
分别移取 2 mL、4 mL、6 mL、8 mL、10 mL 标准溶
液置 100 mL容量瓶中用蒸馏水定容， 分别取 1 mL
系列标准溶液于具塞试管中，以 1 mL蒸馏水做空白
（分别加入 4 mL蒽酮硫酸溶液， 盖好塞立即摇匀置
冷水浴中冷却，冷却后一起置于沸水浴中，自再次沸
腾后加热 7 min， 之后再用流动的水冷却 10 min 至
室温，用分光光度计在 620 nm处测定吸光值）。
2.3 提取方法
超声 - 微波协同萃取提法： 时间分 5 个阶段
提取，每个阶段 300 s，合计 25 min，温度 80 ℃，频率
自动，料液比 1 ∶ 10，称取材料 10 g，加入 100 mL 蒸
馏水， 提取 3次合并提取液， 用旋转蒸发仪浓缩至
50 mL 左右，冷却后加 95%酒精 200 mL 搅拌，沉淀
至 4℃冰箱过夜，分层将酒精倒出，再用 95%酒精洗
沉淀 3次，每次都是分层后倒出上清液，再进行下一
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次的洗涤， 最后沉淀放入 45℃烘箱烘干称重待用。
一共重复 3次。
水浴提取法：称取材料 10 g，加蒸馏水 100 mL，
温度 80 ℃，每次提取 1 h，提取 3 次合并提取液，用
旋转蒸发仪浓缩至 50 mL 左右，冷却后加 95%酒精
200 mL 搅拌，沉淀至 4 ℃冰箱过夜，分层将酒精倒
出，再用 95%酒精洗沉淀 3 次，每次都是分层后倒
出上清液，再进行下一次的洗涤，将沉淀放入 45 ℃
烘箱烘干，称重待用。 重复 3次。
将脱过蛋白后的 150 mL 糖液移取 0.2 mL 加
0.8 mL 蒸馏水，以 1 mL 蒸馏水做空白，分别加 4 mL
蒽酮硫酸溶液， 以后的操作参照 2.2 括号中内容完
成，得到吸光值后根据标准曲线换算出相应糖含量，
比较水浴提取和超声微波协同萃取的优劣。
2.4 单因素试验
2.4.1 时间的确定
称取材料 10 g，料液比 1 ∶ 10，温度 30 ℃，微波
频率自动， 设定时间梯度为 10 min、20 min、30 min、
40 min， 各提取 3 次合并提取液得到 300 mL 糖液，
定容至 500 mL，吸取 0.05 mL 糖液至具塞试管中加
0.95 mL 蒸馏水，1 mL 蒸馏水做空白， 以后的操作
参照 2.2 括号中内容完成， 然后换算出相应糖含
量，比较多长时间提取率较高。 将剩余糖液浓缩、
烘干并称重。
2.4.2 温度的确定
称取材料 10 g，料液比为 1 ∶ 10，时间为 20 min，
微波频率自动，设定温度梯度为 50 ℃、60 ℃、70 ℃、
80℃、90℃恒温， 每个样处理 3 次合并提取液得到
300 mL 糖液，定容至 500 mL，吸取 0.05 mL 糖液至
具塞试管中加 0.95 mL蒸馏水，1 mL蒸馏水做空白，
以后的操作参照 2.2 括号中内容完成， 然后换算出
相应糖含量，比较什么温度条件下提取率较高。将剩
余糖液浓缩、烘干并称重。
2.4.3 料液比的确定
称取材料 5 g，时间为 20 min，温度为 80℃，微波
频率自动，料液比梯度设为 1 ∶ 10、1 ∶ 20、1 ∶ 30、1 ∶ 40,
每个样处理 3 次，合并提取液，浓缩定容至 500 mL，
吸取 1 mL 糖液至具塞试管中，1 mL 蒸馏水做空白，
以后的操作参照 2.2 括号中内容完成， 然后换算出
相应糖含量，比较什么温度条件下提取率较高。将剩
余糖液浓缩、烘干并称重。
2.5 正交试验
根据单因素试验结果设计正交试验，时间为 10
min、20 min、30 min，温度为 40 ℃、60 ℃、80 ℃，料液
比为 1 ∶ 20、1 ∶ 30、1 ∶ 40，提取次数均为 3 次，称取材
料 5 g，按正交表设计做试验，合并提取液，浓缩定容
至 500 mL，吸取 0.2 mL 糖液至具塞试管中加 0.8 mL
蒸馏水，1 mL蒸馏水做空白，以后的操作参照 2.2括
号中内容完成，然后换算出相应糖含量，比较哪组提
取率较高。将剩余糖液浓缩、烘干和称重。 最后将最
优组重复测定 3次。
3 结果与分析
3.1 葡萄糖标准曲线
图 1 标准曲线
由图 1 可知， 标准曲线回归方程为：A = 0.0096
C － 0.0312（R = 0.996 3，n = 6）。
3.2 提取方法对比
从表 1 中可以看出, 超声 - 微波协同萃取平均
提取率 0.66%，高于水浴平均提取率，超声 - 微波协
同萃取平均提取率是传统水浴提取法的 1.8 倍，说
明超声微波协同萃取提糖方法比较好。
3.3 时间确定数据及处理
图 2 不同时间提取率对比
从图 2中可以看出，从 10 min到 20 min 提取率
直线上升，20 min 以后提取率降低， 其中 20 min 时
提取率最高，所以在其它条件相同时，20 min是微波
超声波协同提糖的最佳时间。
3.4 温度确定数据及处理
图 3 不同温度提取率对比
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从图 3中可以看出， 随着温度的上升提取率呈
线性关系，80 ℃以后，微波超声波提取时，提取液开
始往上冲堵塞冷凝管，试验无法进行，由于机器问题
我们只能认为在其它条件相同时，80 ℃为微波超声
波协同萃取提糖最佳温度。
3.5 料液比确定数据及处理
图 4 不同料液比获得提取率
从图 4 可以看出料液比由 1 ∶ 10 到 1 ∶ 30 提取
糖含量呈上升趋势，其中 1 ∶ 30 处理提取糖最多，所
以， 在其它条件相同的情况下，1 ∶ 30为超声微波协
同萃取的最佳料液比。
3.6 正交试验数据及处理
正交试验表 2 结果表明，以 10 min、80 ℃、1 ∶ 40
料液比为最佳提取条件。
3.6.1 重复试验结果分析
表 5 重复试验数据结果
重复 ABS 提取糖量（g） 干物质重（g） 提取率（%）
1 1.678 0.89 4.163 2 8.90
2 1.698 0.901 4.383 0 9.01
3 1.675 0.889 3.947 5 8.89
由表 5 可以看出，正交试验中 10 min、80 ℃、1 ∶
40 提取率最高 ， 重复 3 次 ， 相对标准偏差为
0.7467%，说明重复性较好，10 min、80 ℃、1 ∶ 40 可以
认为是超声微波协同萃取最佳提取条件。
4 结论
（1）本实验条件下，超声 - 微波协同萃取提取刺
山柑叶片多糖是水浴提取法的 1.8 倍；（2）在其它条
件相同的前提下， 单因素实验结果表明， 时间 20
min、温度 80 ℃、料液比 1 ∶ 30 的提取率最高；（3）正
交实验结果表明，10 min、80 ℃、1 ∶ 40 是超声 - 微波
协同萃取最佳提取条件。
参考文献
[1]季宇彬 ,郭守东 ,汲晨锋 .野西瓜的化学和药理研究 [J].哈尔
滨商业大学学报(自然科学版)，2006，6（1）：5-10.
[2]白红进，赵小亮，蒋卉.新疆刺山柑多糖的提取及含量测定
[J].食品开发与研究，2007，28（3）：120-122.
新疆农垦科学院作物研究所
所 长 ： 魏建军 书 记 ： 穆培源
电 话： 0993-6683009 6683127
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协
办
表 1 水浴法和超声 - 微波法提取多糖数据分析
提取方法 重复 ABS 提取糖重（g） 提取率（%） 干物质总重（g） 平均提取率（%）
水浴提取 1 0.340 0.029 0.29 2.048
2 0.484 0.040 0.40 2.212
3 0.506 0.042 0.42 2.288 0.37
超声微波协同萃取 1 0.810 0.066 0.66 2.557
2 0.605 0.051 0.51 2.228
3 0.987 0.080 0.80 2.023 0.66
表 2 正交试验数据
处理 时间（min） 温度（℃） 料液比 ABS 提取糖量（g） 提取干物质总重（g） 提取率（%）
1 10 40 1 ∶ 20 0.845 5 0.456 3.740 8 4.56
2 10 60 1 ∶ 30 0.894 0 0.482 4.193 0 4.82
3 10 80 1 ∶ 40 1.675 5 0.888 4.319 0 8.88
4 20 40 1 ∶ 30 0.933 0 0.502 4.236 4 5.02
5 20 60 1 ∶ 40 1.128 5 0.604 4.287 3 6.04
6 20 80 1 ∶ 20 1.373 5 0.732 4.027 6 7.32
7 30 40 1 ∶ 40 1.051 0 0.550 4.333 4 5.50
8 30 60 1 ∶ 20 1.073 0 0.576 4.641 0 5.76
9 30 80 1 ∶ 30 1.404 5 0.748 4.746 0 7.48
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