全 文 ：通过系统的化学预试验，初步确定了盘龙参这一药用植物内
可能含有的化学成分组成，为该植物生物活性成分的提取、分离
研究及进一步开发利用提供了参考。
参考文献:
［1］ 董必慧，杨小兰．沿海滩涂濒危物种缓草的生长利用特性和保护策
略［J］．江苏农业科学，2006，3:193．
［2］ 陆静梅，李桂兰，杨风清．我国东北地区兰科药用植物简介［J］．中
国野生植物资源，1994，2:21．
［3］ Un Y L，Huang R L，Don M J． Dihydrophenanthrenes from Spiranthes
sinensis［J］． J Nat Prod，2000，63(12) :1608
［4］ 照日格图，萨仁格日乐．蒙药旺拉嘎的本草考证［J］．中药材，2005，
28(4) :345．
［5］ 张 伟，金传山，周亚伟．盘龙参研究进展［J］． 安徽医药，2010，14
(7) :748．
［6］ 谭 军，赵金霞．盘龙参根、茎、花紫外光谱的比较［J］．中国冶金工
业医学杂志，2003，20(5) :400．
［7］ Mei L D，Fa K C，Li J W． A new flavonoids from the whole plant of Spir-
anthes australis (R． Brown)Lindl［J］． Asian NatProd Res，2005，7
(1) :71．
［8］ Yun － Lian Lin，Wan － Ping Chen，Abdulgafor D． Dihydrophenanthrenes
from B1etilla formosana［J］． Chem Pharm Bull，2005，53(9) :1111．
［9］ 王焕弟，谭玉成，杜 光，等．藏药湿生扁蕾的化学成分研究［J］．中
国中药杂志，2004，299(11) :1055．
收稿日期:2011-03-19; 修订日期:2011-10-25
基金项目:上海市同济大学青年优秀人才培养行动计划(No． 1508219037)
作者简介:刘爱华(1977-) ，女(蒙古族) ，内蒙古乌兰浩特人，现任同济大
学附属同济医院主治医师，博士学位，主要从事中西医结合临床与基础研
究工作．
蒲公英提取物改善胰岛素抵抗的体外实验研究
刘爱华，李 昊
(同济大学附属同济医院，上海 200065)
摘要:目的 探讨蒲公英提取物对地塞米松诱导的胰岛素抵抗细胞模型的作用。方法 培养 3T3 － L1 前脂肪细胞并诱导
分化为脂肪细胞，用四甲基偶氮唑盐(MTT)方法检测 3T3 － L1 前脂肪细胞及脂肪细胞的增殖情况，同时采用地塞米松诱
导 3T3 － L1 脂肪细胞建立胰岛素抵抗模型，观察不同剂量蒲公英提取物(0． 1，0． 3，1，3，10，30 μg /ml)对前脂肪细胞与胰
岛素抵抗细胞培养基中葡萄糖浓度的影响。结果 与空白组比较，蒲公英提取物各剂量组前脂肪细胞的 MTT值均升高，
除 0． 3 μg /ml剂量组外，均具有显著性差异(P ＜ 0． 001) ，且呈量效关系;脂肪细胞的 MTT 值无显著性差异;与空白组比
较，蒲公英提取物能明显降低前脂肪细胞与胰岛素抵抗 3T3 － L1 脂肪细胞培养基中的葡萄糖含量(P ＜ 0． 001)。结论 蒲
公英提取物可以促进前脂肪细胞的增殖，对脂肪细胞活力无影响;对地塞米松诱导的 3T3 － L1 脂肪细胞胰岛素抵抗具有
明显的改善作用。
关键词:蒲公英提取物; 胰岛素抵抗; 体外实验
DOI标识:doi:10． 3969 / j． issn． 1008-0805． 2012． 02． 048
中图分类号:R285． 5 文献标识码:B 文章编号:1008-0805(2012)02-0361-02
本研究旨在培养体外 3T3 － L1 脂肪细胞模拟胰岛素抵抗，
观察蒲公英提取物对胰岛素抵抗细胞的增殖及葡萄糖消耗的影
响，为明确其改善胰岛素抵抗作用提供依据，同时为清热解毒方
法治疗胰岛素抵抗提供可参考的证据。
1 材料和试剂
3T3 － L1 前脂肪细胞株购自 ATCC 公司;DMEM 高糖培养
基、新生牛血清均购自 GIBCO公司;胰岛素、3 － 异丁基 － 1 － 甲
基黄嘌呤(IBMX)、地塞米松(DEX)、油红“O”染剂均购自 Sigma
公司;葡萄糖检测试剂盒购自上海市医学检验中心。
2 方法
2． 1 3T3 － L1 前脂肪细胞诱导分化 在 37℃、5% CO2 的条件下，
将 3T3 － L1 前脂肪细胞培养于含 10%新生牛血清的高糖 DMEM
中，待细胞融合 2 d后，加入含 0． 5 mmol /L 3 －异丁基 － 1 －甲基
黄嘌呤(IBMX)、1 μmol /L 地塞米松、10 mg /L 胰岛素和 10%新
生牛血清的高糖 DMEM培养 48 h，然后换上含 10 mg / l胰岛素和
10%新生牛血清的高糖 DMEM 再培养 48 h;随后以 10%新生牛
血清的高糖 DMEM继续培养，2 d换培液 1 次，诱导分化 8 ～ 12 d
的 3T3 － L1 细胞 90% ～95%呈脂肪细胞表型，可用于实验。
2． 2 脂肪细胞鉴定 采用油红“O”染色法。去诱导分化结束的
细胞培养基，用 PBS洗 3 次，在 10 %甲醛室温下固定细胞 1 h，弃
去固定液，再用 PBS洗 3 次，然后将细胞晾干 20 min;加入油红
“O”溶液室温下染色 2 h，弃去染色剂，用异丙醇洗去未着色的染
料，然后用苏木精复染细胞核，在倒置显微下观察、照相。见图
1。
2． 3 3T3 － L1 脂肪细胞胰岛素抵抗细胞模型的建立 在分化好
的细胞中加入 1 μmol /L地塞米松诱导胰岛素抵抗，然后分组进
行处理，2 d换 1 次培养液，取上清液，以培养基中葡萄糖含量反
应胰岛素抵抗的程度。葡萄糖含量用葡萄糖检测试剂盒测定。
2． 4 MTT 法测定 3T3 － L1 前脂肪细胞和 3T3 － L1 脂肪细胞的
增殖 当接种于 96 孔板的 3T3 － L1 前脂肪细胞与脂肪细胞达到
约 80%融合时，换以含不同浓度蒲公英提取物的培养基孵育 48
h，不同剂量蒲公英提取物处理组的终含量分别为 0． 1，0． 3，1，3，
10，30 μg /ml。同时设立空白对照组(只加培养液)。用葡萄糖检
测试剂盒测定培养基上清液中的葡萄糖含量，然后每孔加入
MTT(5 mg /ml)10 μl继续孵育 4 h，将培养基倒尽，吸干，每孔加
入二甲基亚砜 200 μl，混匀后置酶标仪 570 nm处测定吸光度，观
察不同剂量蒲公英提取物对 3T3 － L1 前脂肪细胞和脂肪细胞增
殖的影响。
2． 5 统计学处理 各组实验数据均用 珋x ± s 表示，采用 SPSS16． 0
软件进行统计学处理，组间差异用方差分析。
3 结果
3． 1 3T3 － L1 前脂肪细胞分化前后形态学鉴定 诱导分化前的
·163·
LISHIZHEN MEDICINE AND MATERIA MEDICA RESEARCH 2012 VOL． 23 NO． 2 时珍国医国药 2012 年第 23 卷第 2 期
3T3 － L1 脂肪细胞呈典型的梭形，胞浆中无脂滴，形态与成纤维
细胞相似(图 2)。当细胞完全汇合后，处于生长停滞，在多个视
野下均未见处于明显分裂相的细胞，诱导分化第 5 天时，细胞变
大、变圆，细胞中有脂滴出现，用油红“O”染色后脂滴着红色，细
胞核着蓝色。诱导分化第 7 天时，有较多的细胞出现双核(图
3) ;诱导分化第 12 天时，90 %的 3T3 － L1 前脂肪细胞都分化为
成熟的脂肪细胞，表现为细胞浆丰富，含有大量的脂滴，脂滴分布
于核周围，形成“戒环样”结构，为典型的成熟脂肪细胞形态，能
观察到许多富含脂滴的脂肪细胞正在分裂成为 2 个细胞，油红染
色后脂滴着红色，细胞核着蓝色见图 4 。
图 1 油红“O”染色的脂肪细胞 图 2 油红“O”染色的 3T3 － L1
前脂肪细胞
图 3 诱导分化第 7 天的 图 4 诱导分化第 12 天的
脂肪细胞形态 脂肪细胞形态
3． 2 蒲公英提取物对前脂肪细胞和脂肪细胞增殖的影响 与空
白对照组比较，蒲公英提取物各剂量组前脂肪细胞的 MTT 值均
升高，除 B2 组(0． 3 μg /ml 剂量组)外均具有显著性差异(P ＜
0． 001) ，且具有较好的量效关系;与空白对照组比较，蒲公英提取
物各剂量组脂肪细胞的 MTT 值虽显示剂量依赖性下降趋势，但
无显著性差异。结果见表 1。
表 1 蒲公英提取物对前脂肪细胞和脂肪细胞增殖的影响(珋x ± s)
组别 前脂肪细胞 脂肪细胞
A 1． 74 ± 0． 04 1． 96 ± 0． 03
B1 1． 68 ± 0． 02△ 1． 97 ± 0． 03
B2 1． 75 ± 0． 02 1． 96 ± 0． 02
B3 1． 86 ± 0． 03△ 1． 96 ± 0． 03
B4 2． 30 ± 0． 04△ 1． 95 ± 0． 04
B5 2． 37 ± 0． 02△ 1． 94 ± 0． 02
B6 2． 48 ± 0． 02△ 1． 94 ± 0． 02
A 组:空白对照组;B1、B2、B3、B4、B5、B6 组分别为蒲公英提取物
0． 1，0． 3，1，3，10，30μg /ml剂量组;与 A组比较，△P ＜ 0． 001;n = 8
3． 3 蒲公英提取物对前脂肪细胞和脂肪细胞培养基中葡萄糖含
量的影响 与空白对照组比较，蒲公英提取物各剂量组前脂肪细
胞与脂肪细胞培养基中葡萄糖含量均降低，且具有显著性差异，
并呈良好的量效关系。结果见图 5。
图 5 蒲公英提取物对前脂肪细胞
与胰岛素抵抗脂肪细胞培养基中葡萄糖含量的影响
4 讨论
胰岛素抵抗(insulin resistance，IR)是糖尿病的主要发病机制
之一，是肥胖、高血压、高血脂、冠心病等疾病的“共同土壤”，如
何改善胰岛素抵抗一度为众多医学研究者所关注，虽对 IR 展开
了多层面、多方位的研究，但改善 IR的有效方法仍为减轻体质量
和药物干预［1］，后者主要通过应用降糖、降脂、降压等化学药物，
长期服用不仅存在毒副作用、导致耐药，某些促胰岛素分泌剂亦
可导致胰岛细胞功能降低。祖国医学在治疗糖尿病方面早有记
载，现代应用亦较为广泛，中药具有治疗作用温和持久、副作用
小、可长期使用等特点，且其作用机制常为多靶点、多效应、多功
能的综合作用，有着西药不可替代的综合优势。蒲公英为清热解
毒中药，因其药食两用，多在我国北方将其作为蔬菜食用，因此在
民间应用中发现其具有降血糖、血脂作用。近年来国外对其药理
作用进行了大量研究，主要集中在抗炎、抗氧化、抗癌、抗高血糖、
抗血栓形成等方面［2 ～ 7］。为探讨其对胰岛素抵抗的作用，本研究
采用体外 3T3 － L1 脂肪细胞模拟胰岛素抵抗，观察蒲公英提取物
干预后胰岛素抵抗细胞的增殖及葡萄糖消耗的影响，结果显示蒲
公英提取物促进前脂肪细胞增殖，且呈现量效关系，对脂肪细胞
活力无影响;能够降低前脂肪细胞和胰岛素抵抗脂肪细胞培养基
中葡萄糖的含量，提示蒲公英提取物具有较好改善胰岛素抵抗的
作用，具体机制有待进一步研究。
参考文献:
［1］ 贾伟平．胰岛素抵抗在 2 型糖尿病发病机制中的作用［J］． 诊断学
理论与实践，2009，8(3) :233．
［2］ Kim H M，Shin H Y，Lim K H，et al． Taraxacum of ficinale inhibits
tumor necrosis factor alpha production from rat asterocytes［J］． Immu-
nopharmacol Immunotoxicol 2000，22:519．
［3］ Hagymasi K，Blazovics A，Feher J，et al． The in vitro effect of dandelion
antioxidants on microsomal lipid peroxidation ［J］． Phytother Res，
2000，14 (1) :43．
［4］ Koo H N ，Hong S H，Song B K，et al． Taraxacum of ficinale induces cy-
totoxicity through TN F － α and IL － 1α secretion in HepG2 cells［J］．
L ife Sci，2004，74:1149．
［5］ Hussain Z，Waheed A ，Qureshi R A ，et al． The effect of medicinal
plants of Islamabad andMuree region of Pakistan on insulin secretion
from NS － 1 cells［J］． Phytother Res，2004，18 (1) :73．
［6］ Petlevsk i R，Hadzija M，Slijepcevic M，et al． Effect of antidiabetis herb-
al preparation on serum glucose and fructosamine in NOD mice［J］． J
Ethnopharmacol，2001，75:181．
［7］ Neef H，Cilli F，Declerck P J，et al． Platelet antiaggregating activity of T
araxacum of Ficinale Weber［J］． Phytother Res，1996，10:S138．
·263·
时珍国医国药 2012 年第 23 卷第 2 期 LISHIZHEN MEDICINE AND MATERIA MEDICA RESEARCH 2012 VOL． 23 NO． 2